俞建雄
- 作品数：30 被引量：228H指数：10
- 供职机构：武汉大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠神经母细胞特异性转移因子基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2015年
- 背景:研究表明,神经母细胞特异性转移因子(ASCL1)是神经发育过程中的关键调控因子,因此通过对成体细胞进行ASCL1基因修饰,有可能将成体细胞转分化为神经细胞,为视神经再生治疗提供新策略。目的:构建携带鼠ASCL1基因的重组腺病毒表达载体,获得重组腺病毒pA d-rat-ASCL1-EGFP,以期为进一步研究ASCL1基因的功能奠定基础。方法:用XhoⅠ和EcoRⅠ将目的基因ASCL1及带有增强型绿色荧光蛋白表达盒的腺病毒穿梭载体p Yr-adshuttle-4进行双酶切;回收酶切质粒的目的片段进行连接,产物转化至DH5α感受态;提取质粒酶切鉴定正确后测序。然后通过LR体外同源重组将rat-ASCL1表达框构建至pA d/PL-DEST腺病毒表达载体,PacⅠ酶切线性化后用脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,采用PCR法对重组腺病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度,荧光显微镜观察病毒感染效率。结果与结论:通过酶切鉴定和DNA测序鉴定,证实重组腺病毒载体pA d-rat-ASCL1-EGFP构建正确,PCR鉴定扩增出862 bp的目的条带,TCID50法测定病毒滴度为2×1010pfu/mL。荧光显微镜观察HEK293细胞的病毒感染效率为80%以上。提示含ASCL1基因的重组腺病毒载体构建成功,获得的病毒具有高滴度,高效感染率,为下一步进行ASCL1基因功能研究和视神经再生治疗研究奠定了基础。
- 袁静葛坚俞建雄
- 关键词：腺病毒科绿色荧光蛋白质类视神经视神经再生
- 组织因子途径抑制物2在胰腺癌中表达的实验研究被引量：9
- 2004年
- 目的 组织因子途径抑制物 2 (TFPI- 2 )是一丝氨酸蛋白酶抑制物 ,在维持细胞外基质完整性和调控肿瘤细胞浸润转移方面起着重要作用。分析TFPI- 2和在人类胰腺癌中表达情况 ,探讨TFPI- 2与胰腺癌恶性程度之间的相互关系 ,为临床判断胰腺癌预后及后期的基因治疗奠定基础。方法 采用WesternBlot及RT -PCR方法 ,检测TFPI- 2在 2 0例临床胰腺癌标本及 8例正常胰腺组织中的表达情况 ,HPIAS图像分析仪分析各组标本相对密度 ,t检验各组相对密度差异 ,秩和检验TFPI- 2与胰腺癌恶性程度的相关性。结果 随着胰腺癌恶性程度的加深 ,TFPI- 2表达逐渐下降 ,两者之间存在着显著的负相关性。结论 TFPI- 2与胰腺癌恶性程度之间存在着负相关性 ,可能成为胰腺癌预后的判断指标之一 ,并为基因治疗胰腺癌提供新的方向。
- 俞建雄王春友陈立波周峰许逸卿
- 关键词：胰腺癌预后
- 恒河猴骨髓间充质干细胞在体外向角膜上皮前体细胞的诱导分化被引量：9
- 2007年
- 组织工程生物角膜是角膜的理想替代物,为严重眼表疾病的治疗带来了希望.然而,足量种子细胞的获得是构建生物角膜的瓶颈.骨髓间充质干细胞(MSC)具有多向分化潜能.为探讨MSC能否分化为角膜上皮细胞,将分离培养的灵长类动物恒河猴P3代MSC在体外基质微环境中通过3种方案诱导,对诱导前后的MSC用形态学观察、免疫组织化学技术和流式细胞仪检测评价其分化情况.结果显示,Ⅲ组MSC表现出角膜上皮前体细胞的形态特征,检测出角膜上皮前体细胞的标志,包括integrinβ1,Cx43,Pax6和P63的表达.这说明,在适宜条件下,MSC能够诱导分化为角膜上皮前体样细胞,有可能作为构建生物角膜的种子细胞来源,进行眼表修复.
- 袁静俞建雄黄冰刘炳乾刘敬波江儒章葛坚
- 关键词：恒河猴角膜上皮细胞细胞生长因子
- 三种大鼠骨髓间充质干细胞源性人工肝组织的构建与评价被引量：1
- 2014年
- 背景:人工肝组织有可能为治疗急性肝衰竭提供一种新的选择,但人工肝组织的构建存在着种子细胞、支架、培养模式及对人工肝组织营养获取调控等各方面的难题。目的:体外构建3种人工肝组织,筛选最佳人工肝组织以供移植用。方法:纯化、扩增并诱导分化骨髓间充质干细胞为肝样细胞,在Transwell培养体系中分别与去细胞羊膜、DACRON PATCH心血管外科补片、生物外科补片3种支架结合构建3种人工肝组织,培养3 d后进行形态学和功能学检测。结果与结论:密度梯度离心结合贴壁法可获得较高纯度的大鼠骨髓间充质干细胞,并在体外转分化为肝样细胞。在构建的3种人工肝组织中,肝样细胞与生物外科补片支架材料可获得最大程度结合,并具有更强的尿素合成能力和白蛋白分泌功能,为治疗急性肝衰竭提供了实验基础。
- 俞建雄袁静许瑞云
- 关键词：干细胞骨髓干细胞急性肝衰竭骨髓间充质干细胞羊膜DACRON
- 原位转染组织因子途径抑制物2基因抑制兔角膜新生血管形成(英文)被引量：1
- 2007年
- 背景：有研究表明，基质金属蛋白酶所参与的细胞外基质降解在角膜新生血管形成过程中起关键作用，组织因子途径抑制物2是新近发现的一种新型的丝氨酸蛋白酶抑制物，能有效抑制基质金属蛋白酶的活性。选用组织通道途径抑制物组织因子途径抑制物2作为治疗基因，是否能对角膜新生血管形成产生影响？目的观察局部转染组织因子途径抑制物2基因对实验兔角膜新生血管形成的影响。设计：随机对照观察。单位：武汉协和医院外科实验室和中山大学附属第三医院中心实验室。材料：本实验于2004—06／2006—03在武汉协和医院外科实验室及中山大学附属第三医院中心实验室完成。选用健康纯种成年新西兰大白兔60只，体质量2、5～3．0kg，雌雄不限。术前经裂隙灯检查均无明显眼前段病变。pBos-Cite-neo，组织因子途径抑制物2质粒（由协和医院血液科仲任博士惠赠），过氧化物酶阻断剂、非免疫性羊血清、鼠抗人MMP-1，2，3单克隆抗体、生物素标记的羊抗鼠IgG二抗（Santacruz公司）。方法：实验干预：硝酸银烧灼法建立各组实验兔兔角膜新生血管模型，随机摸球法将模型兔分为Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ组，每组20只，分别结膜下注射生理盐水、空白质粒和真核表达质粒pBos-Cite-neo／组织因子途径抑制物2。实验评估：采用裂隙灯显微镜下观察角膜新生血管生长情况；采用RT-PCR方法检测造模2周后各组实验兔角膜组织组织因子途径抑制物2的表达；采用免疫组织化学测定造模后3，5，7，9，14d角膜组织基质金属蛋白酶蛋白的表达。主要观察指标：①各组实验兔角膜新生血管生长情况。②实验兔角膜组织组织因子途径抑制物2及基质金属蛋白酶的表达情况。结果：纳入实验兔60只均进入结果分析。①角膜新生血管生长情况：Ⅲ组原位转染组织因子途径抑制物2后兔�
- 俞建雄袁静
- 关键词：组织因子途径抑制物2基质金属蛋白酶角膜新生血管
- 早期血滤对家猪重症急性胰腺炎血浆细胞因子和脏器功能的影响
- 2003年
- 目的:观察早期血液滤过对重症急性胰腺炎(SAP)家猪血浆细胞因子水平和脏器功能的影响。方法:采用胰管逆行灌注人工胆汁法复制家猪SAP模型;随机分为胰腺炎血滤治疗组(HF组,n=8)和胰腺炎非血滤治疗组(NHF组,n=8)。HF组在建模成功后行高容量、零平衡血滤治疗。结果:与NHF组相比,HF组的MAP、CVP及PaO2/FiO2值均较高(P<0.01);心率、尿蛋白含量、血清ALT水平、肺系数与肺湿/干比均较低(P<0.05)。光镜下,HF组肺组织学评分较低(P<0.01);肾、肝组织损伤亦较轻。但胰腺组织学评分在两组间无差异。建模后6h,HF组血浆TNF鄄α、IL鄄1β水平较低(P<0.05);IL鄄10/TNF鄄α比值较高(P<0.05)。结论:早期血滤能有效地廓清SAP猪血浆中的细胞因子TNF鄄α和IL鄄1β,升高IL鄄10/TNF鄄α比值,改善血流动力学,并减轻肺、肾、肝组织损伤。
- 杨智勇王春友陶京俞建雄熊炯炘陈立波周峰
- 关键词：重症急性胰腺炎血浆脏器功能血液滤过
- 组织因子途径抑制物2对胰腺癌细胞浸润能力的影响被引量：2
- 2004年
- 目的:探讨TFPI-2表达与胰腺癌细胞体外和体内浸润能力之间的关系. 方法:脂质体介导人类TFPI-2真核表达载体pBos-Cite- neo/TFPI-2转染胰腺癌细胞系Panc-1,G418筛选阳性细胞,RT-PCR,Western blot技术检测转染前后胰腺癌细胞中TFPI-2 mRNA以及相应蛋白质的表达水平;利用Boyden小室检测转染前后胰腺癌细胞穿膜的细胞数,比较转染前后胰腺癌细胞的裸鼠成瘤大小,以此作为评价胰腺癌细胞体外和体内浸润能力的指标. 结果:转染成功的胰腺癌细胞证实有TFPI-2 mRNA和相应蛋白质的表达;与未转染的细胞相比,转染TFPI-2的细胞体外浸润能力显著下降(穿膜细胞数为60.7±7.6,109.7±5.5和110.7±9.0,P<0.001);3 wk后裸鼠成瘤明显缩小(0.39 cm×0.36 cm,0.56 cm×0.50 cm和0.60 cm×0.52 cm,P<0.001),病理切片亦证实没有肌层浸润现象. 结论:TFPI-2表达可显著抑制胰腺癌细胞的体外和体内浸润能力,为进一步开展胰腺癌的基因治疗提供实验依据.
- 俞建雄袁静王春友陈立波周峰
- 关键词：胰腺癌细胞TFPI组织因子途径抑制物
- 重症急性胰腺炎并发腹腔室隔综合征的诊断和治疗及分型的探讨被引量：40
- 2004年
- 目的总结重症急性胰腺炎 (SAP)并发腹腔室隔综合征 (ACS)的诊断和治疗经验。方法患者高度腹胀后出现继发性心、肺、肾功能不全 ,即诊断为ACS ;CT测量腹膜后前后径 (R) /腹腔前后径 (A) <0 5归为Ⅰ型 (腹腔型 ) ,R/A >0 8为Ⅱ型 (腹膜后型 ) ,Ⅲ型为混合型。手术治疗者均用 3升静脉营养袋 (3L袋 )暂时性关腹 ,等待二期关腹。结果本组 34例 (36例次 )ACS手术死亡率为 13% (3/ 2 4 ) ,非手术死亡率为 4 2 % (5 / 12 )。Ⅰ～Ⅲ型手术与非手术死亡率分别为 0、2 0 %、17%与17%、6 7%、6 7%。结论ACS是SAP的严重合并症 ,诊断明确时应尽早手术 ,探查术后可以用 3L营养袋行暂时性关腹。
- 陶京王春友许逸卿杨智勇熊炯炘俞建雄
- 关键词：重症急性胰腺炎并发症腹腔室隔综合征
- 迟发性腹腔室隔综合征的诊断和治疗被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨重症急性胰腺炎病人并发迟发性腹腔室隔综合征的诊断和治疗方法。方法 回顾性分析 3 0 1例重症急性胰腺炎患者 ,5例在感染期发生迟发性腹腔室隔综合征 ,2例早期患者采用非手术治疗 ,3例后期患者一经诊断后 ,即行手术减压治疗。结果 非手术治疗患者 ,均于迟发性腹腔室隔综合征发生后 1～ 2d死亡 ;手术患者 ,均得以存活 ,总体死亡率达 40 %。结论 重症急性胰腺炎病人并发迟发性腹腔室隔综合征具有极高的死亡率 ;
- 俞建雄王春友陶京熊炯炘周峰
- 关键词：重症急性胰腺炎腹腔室隔综合征
- 角膜基质细胞基质金属蛋白酶1,2活性与组织因子途径抑制物2的效应(英文)被引量：1
- 2014年
- 背景:有研究表明,基质金属蛋白酶所参与的细胞外基质降解在角膜新生血管形成过程中起关键作用,组织因子途径抑制物2是新近发现的一种新型的丝氨酸蛋白酶抑制物,能有效抑制基质金属蛋白酶的活性。目的:观察组织因子途径抑制物2对体外角膜基质细胞表达基质金属蛋白酶活性的关系。方法:在体外对兔角膜基质细胞进行原代及传代培养,用脂质体介导的人类组织因子途径抑制物2真核表达载体转染兔角膜基质细胞,G418筛选阳性细胞。结果与结论:RT-PCR,Western blot及明胶酶谱法分析结果显示,转染后角膜基质细胞组织因子途径抑制物2 mRNA和蛋白质的表达均上调(P<0.05),而基质金属蛋白酶1,2的活性下降(P<0.05)。结果提示,组织因子途径抑制物2可明显抑制角膜基质细胞中基质金属蛋白酶1,2的活性。
- 俞建雄袁静周炼红
- 关键词：角膜基质细胞组织因子途径抑制物2基质金属蛋白酶细胞外基质角膜新生血管国家自然科学基金
