于清龙
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
- 供职机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划湖北省自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 基于结核菌素与CFP10/ESAT6的牛IFN-γ检测法在牛结核病诊断中的比较研究被引量：8
- 2008年
- 本研究通过比较三种刺激物(牛结核菌素、禽结核菌素和牛型结核菌特异性抗原CFP10/ESAT6对结核菌素皮内变态反应阳性牛的IFN-γ刺激反应,探讨IFN-γ检测法在我国牛结核病诊断中的应用前景。无菌采集22头结核菌素皮内变态反应阳性牛的血液,肝素抗凝。每1mL全血与1mLRPMI1640完全培养基混合均匀,并加入0.1mL(20μg)PHA(阳性对照孔)、0.1mL(20μg PHA)CFP10/ESAT6融合蛋白、0.1mL(2000U)牛结核菌素(PPD/B)、0.1mL(2500U)禽结核菌素(PPD/A)或等量PBS(无刺激阴性对照),37℃培养过夜。次日用夹心ELISA法检测各刺激组0.1mL培养上清的IFN-γ,以OD630表示IFN-γ浓度。结果,特异性抗原CFP10/ESAT6刺激组与牛结核菌素(PPD/B)刺激组的IFN-γ反应具有良好的相关性,相关系数为0.84。但CFP10/ESAT6刺激组IFN-γ浓度与牛和禽PPD的比较反应(以两刺激组IFN-γ浓度差值表示)间无相关性,相关系数为-0.11。分析禽PPD组的IFN-γ反应,发现实验牛中有少数牛对禽PPD有反应。以OD630=0.17为阳性反应切割值,牛PPD检出阳性牛21头,CFP10/ESAT6检出20头,牛和禽PPD比较反应(以OD值差值表示)检出14头,禽PPD阳性反应3头。扣除禽PPD阳性反应牛后,牛和禽PPD比较反应与牛PPD刺激组的相关系数增至0.54。结果表明,牛PPD的IFN-γ释放反应检测灵敏度最高。当出现牛型结核菌与环境分枝杆菌混合感染时,应用牛和禽PPD比较反应检测牛结核的准确度低,混合感染牛被误判为结核阴性牛。而基于CFP10/ESAT6的IFN-γ释放反应不受环境分枝杆菌的影响,检测具有良好的特异性与敏感性。
- 陈颖钰邓铨涛郭爱珍晁彦杰匡有吉匡有吉陈焕春
- 关键词：牛结核牛结核菌素CFP10ESAT6
- 一种应用Rv3872新型融合蛋白制备的牛结核抗体鉴别检测试纸条
- 本发明属于动物传染病基因工程技术领域。公开了一种利用RV3872、ESAT6和CFP10三基因融合蛋白制备的检测牛结核抗体的免疫胶体金试纸条及制备方法与应用。以融合蛋白作为胶体金标记抗原和硝酸纤维素膜上检测区的捕获抗原建...
- 郭爱珍于清龙刘冬光涂玲玲陈颖钰廖娟红凌洁玉陈焕春
- 文献传递
- 三基因融合的重组牛结核特异性抗原蛋白及制备方法
- 本发明属于微生物基因工程技术领域。具体涉及一种三基因融合的重组牛结核特异性抗原蛋白其及制备方法。该牛结核特异性融合抗原蛋白的基因，具有如序列表SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列和氨基酸序列。公开了一株能够表达牛结核特...
- 郭爱珍刘冬光曹莎陈颖钰廖娟红于清龙凌洁玉陈焕春
- 文献传递
- 三基因融合的重组牛结核特异性抗原蛋白及制备方法
- 本发明属于微生物基因工程技术领域。具体涉及一种三基因融合的重组牛结核特异性抗原蛋白其及制备方法。该牛结核特异性融合抗原蛋白的基因，具有如序列表SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列和氨基酸序列。公开了一株能够表达牛结核特...
- 郭爱珍刘冬光曹莎陈颖钰廖娟红于清龙凌洁玉陈焕春
- 文献传递
- 梅花鹿γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法及试剂盒与应用
- 本发明属于农业微生物基因工程和动物传染病领域。涉及一种梅花鹿γ-干扰素双夹心ELISA检测方法及试剂盒与应用。获得一株能稳定分泌梅花鹿γ-干扰素单克隆抗体的细胞株CerIFN-γ4C，其保藏号为CCTCC NO：C200...
- 郭爱珍刘颖张广智廖娟红刘冬光于清龙王冰邹新峰熊家军杨利国陈焕春
- 文献传递
- 融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用被引量：4
- 2009年
- 本研究通过融合表达Rv3872、CFP-10和ESAT-6蛋白,以改良牛结核病特异性鉴别诊断抗原CFP-10-ESAT-6,提高牛结核抗体鉴别诊断法的灵敏度。利用PCR方法,克隆牛分枝杆菌RD1区上述三个基因,通过酶切连接方法,将三个基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接。融合基因在大肠杆菌内经IPTG0.4mmol/L诱导3h,目的蛋白经SDS-PAGE证实表达在上清中,Western-blot分析证实表达蛋白具有免疫原性。以所表达的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA,检测了44份牛分枝杆菌感染背景清楚的临床奶牛血清。26份阳性血清中,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA检出阳性样本18份,检测灵敏度为69%,而CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA只检出阳性样本4份。18份阴性血清中,两种ELISA均检出17份阴性血清,特异性都为94%(17/18)。因此,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白在对牛结核抗体检测特异性没有降低的情况下,敏感性获得了显著提高,这对牛结核病的早期鉴别诊断方法的建立具有重要意义。
- 刘冬光廖娟红于清龙陈颖钰陈焕春郭爱珍
- 关键词：牛结核CFP-10ESAT-6
- 梅花鹿γ干扰素克隆表达及抗病毒活性测定被引量：7
- 2009年
- 提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为梅花鹿γ干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠埃希菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的32.6%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性,重组梅花鹿γ干扰素抗病毒活性分别约为7.25×104U/mL和4.61×104U/mL。结果表明,重组梅花鹿γ干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。
- 刘颖刘冬光廖娟红于清龙熊家军杨利国陈焕春郭爱珍
- 关键词：梅花鹿Γ干扰素抗病毒活性
- 梅花鹿γ-干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究被引量：2
- 2010年
- 提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ-干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI-neo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI-neo-CerIFN-γ转染入中国仓鼠肾细胞(BHK-21)和牛肾细胞(MDBK)中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16ku,与预测大小一致。本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础。
- 刘颖王冰于清龙熊家军杨利国陈焕春郭爱珍
- 关键词：梅花鹿Γ-干扰素细胞系真核表达
- 梅花鹿γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法及试剂盒与应用
- 本发明属于农业微生物基因工程和动物传染病领域。涉及一种梅花鹿γ-干扰素双夹心ELISA检测方法及试剂盒与应用。获得一株能稳定分泌梅花鹿γ-干扰素单克隆抗体的细胞株CerIFN-γ4C，其保藏号为CCTCC NO：C200...
- 郭爱珍刘颖张广智廖娟红刘冬光于清龙王冰邹新峰熊家军杨利国陈焕春
- 人和动物结核病新型特异诊断试剂
- 陈焕春詹枝华项杰曾庆志周金海张书环涂玲玲刘颖郭爱珍凌洁玉邓铨涛晁彦杰匡有吉廖娟红吴波于清龙刘冬光陈颖钰熊家军陈军胡长敏杨利国
- 该研究成功研制了适于牛结核与梅花鹿结核的牛结核快速检测胶体金试纸条，适合于牛和梅花鹿的高通量检测ELISA试剂盒，和人、牛、梅花鹿结核高准确度检测IFN-γ试剂盒。通过临床评价证实其具有较高的灵敏度与特异性，且分别适合于...
- 关键词：
- 关键词：结核病
