通过用一对特异性引物,PCR扩增得到花生(A rach is hyp og aea)主要致敏蛋白A ra h 1的基因的启动子片段1 957 bp,其序列组成与已发表序列基本一致。用其替换pB IN 35S-mGFP 4载体中的35S启动子部分,组成一种花生转基因表达载体pGA 1。该载体含有种子特异表达调控元件、增强表达元件和一些与转录因子结合的调控元件,是一个强启动子,便于将外源基因转入花生,实现外源基因在花生中的表达,为建立花生生物反应器奠定了基础。
为对花生未知的DOFH10基因进行研究,根据DOF转录调控因子DOF (DNA binding with One Finger)GW391728的c DNA序列,采用引物对s162-a1469和引物s30-a1469用PCR方法在花生16个品种中进行克隆比较,并进一步对DOFH10在数据库进行序列比对,对其一级结构酶切位点、三维空间结构、蛋白质表达等进行研究。结果表明,用引物对s162-a1469在5个品种中克隆得到2类DOFH10基因A和B类。它们分别与野生花生染色体A03上的XM_016100960. 2和野生花生染色体B03上的XM_016334585. 2序列完全相同。用引物s30-a1469从所有16个品种中得到相同的B类DOFH10基因,包括6个多粒果实品种。A类基因在4个多粒果实品种和1个2粒果实品种中存在。序列比对表明,A和B类DOFH10基因是不同基因编码的,它们分别位于家培花生的A和B基因组。B类DOFH10在DOF保守序列区域与野生花生染色体B01上编码网格蛋白集装相关蛋白XP_016199412. 2的一段基因剪辑后的RNA序列完全相同,DOFH10蛋白上多个肉豆蔻酰十四酰修饰位点的分布,这2个结果意味着该蛋白在细胞内的运输可能通过膜系统进行。蛋白质印迹分析表明,DOFH10在发育中子叶专一表达。花生DOFH10基因有A和B等2类,其中B类DOFH10存在于所有家培花生品种中,是必需基因,其蛋白可能通过Clathrin依赖的小泡运输途径运入细胞核。A类DOFH10更多存在于多粒家培花生品种中,可能与果实发育早期细胞分裂有关。
