- 人结肠癌细胞株CW-2干细胞生物学特性研究被引量：1
- 2010年
- 目的从人结肠癌细胞株CW-2中分离癌干细胞,并观察其生物学特性。方法采用多重联合法分离人结肠癌干细胞,应用流式细胞仪检测分离后细胞中CD44+EpCAM+癌干细胞含量;细胞周期检测、体外侵袭实验、体内成瘤实验对癌干细胞进行生物学特性研究。结果分离后细胞中CD44+EpCAM+癌干细胞含量为89.57%;CD44+EpCAM+癌干细胞的增殖能力、侵袭能力、致瘤能力均强于非癌干细胞,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD44+EpCAM+癌干细胞具有低增殖性、高侵袭性、高致瘤性,并可通过多重联合分离获得。
- 刘美艾亮陈宓龙浩李少林
- 关键词：癌干细胞结肠癌流式细胞技术细胞分离
- 肝癌细胞系Hep3B中CD133^+细胞亚群的分离及其特性的研究
- 2011年
- 目的研究CD133在人肝癌细胞系Hep3B中的表达以及CD133^+细胞的体外增殖、自我更新及体内成瘤能力,初步探讨肝癌中CD133^+细胞亚群的干细胞特性。方法流式细胞仪检测未分选的Hep3B细胞中CD133^+细胞表达情况;免疫磁珠分选技术纯化CD133^+肿瘤细胞;MTT法检测CD133^+细胞体外增殖能力;无血清培养纯化的CD133^+肿瘤细胞,观察其生长分化情况及非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)接种实验观察其体内成瘤能力。结果流式细胞仪检测未分选的Hep3B细胞中有9.13%的细胞呈CD133^+表达;免疫磁珠富集的CD133^+肿瘤细胞在无血清培养基中悬浮生长,并可以形成肿瘤细胞球,且在1,3,5,7天的紫外吸光度(A)值均高于相同条件下未分选细胞及CD133^-细胞(P<0.05);CD133^+肿瘤细胞的体内成瘤能力明显高于CD133^-细胞及未分选细胞。结论肝癌细胞系Hep3B中CD133^+细胞亚群比其他细胞亚群具有较强的增殖,分化和成瘤能力,是具有肝癌干细胞特性的细胞亚群。
- 李小青曹辉龙浩李少林
- 关键词：肝癌细胞CD133免疫磁珠分选
- 靶向CD133的RNA干扰对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用
- 2011年
- 目的利用RNA干扰技术下调SMMC-7721肝癌细胞中CD133的表达,观察其在肝癌细胞增殖和侵袭方面的作用。方法构建CD133特异性的siRNA真核表达载体,转染SMMC-7721肝癌细胞并筛选出稳定表达siRNA的转染克隆;应用RT-PCR和Western blot检测CD133 mRNA和蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法和Transwell法检测细胞体外增殖和侵袭能力。结果成功构建表达质粒PGPH1/GFP/Neo-shGAPDH、PGPH1/GFP/Neo-shNC、PGPH1/GFP/Neo-CD133-1和PGPH1/GFP/Neo-CD133-2,并转染SMMC-7721肝癌细胞。筛选后得到稳定的细胞克隆。RT-PCR和Western blot检测显示转染PGPH1/GFP/Neo-CD133-1和PGPH1/GFP/Neo-CD133-2后CD133 mRNA和蛋白表达均受到显著抑制,mRNA抑制率分别为42.98%和63.16%;蛋白表达抑制率分别为49.46%和59.15%。与未转染组和PGPH1/GFP/Neo-shNC组相比,PGPH1/GFP/Neo-CD133-2组细胞凋亡比例明显增加(P<0.05);PCPH1/GFP/Neo-CD133-2组细胞的增殖和侵袭能力也受到显著抑制(P<0.05)。结论靶向CD133的RNA干扰能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞中的CD133表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭。
- 龙浩曹辉李小青李少林
- 关键词：RNA干扰凋亡
- 人结肠癌CW-2干细胞获取方法研究被引量：1
- 2010年
- 目的运用3种不同的方法分离纯化人结肠癌CW-2干细胞,并对其分离纯化效率进行比较,探讨获得癌干细胞的有效方法。方法采用单纯无血清悬浮培养、无血清悬浮培养联合化疗药物、流式细胞分选技术分别富集人结肠癌细胞株CW-2干细胞;然后运用流式细胞术、NOD-SCID小鼠致瘤实验和Transwell侵袭实验分析比较3种方法的富集效率。结果无血清悬浮培养细胞,无血清悬浮培养联合化疗药物处理细胞和流式细胞仪分选技术分选后细胞中具有结肠癌干细胞特性的CD 44^+EPCAM^+细胞分别为(59.39±4.55)%、(74.36±6.78)%、(86.43±8.43)%;3群细胞的成瘤能力和侵袭能力都存在显著统计学差异(P值<0.05):流式细胞分选技术分选后细胞>无血清悬浮培养联合化疗药物处理细胞>单纯无血清悬浮培养细胞结论流式细胞分选技术富集癌干细胞的能力强于单纯无血清悬浮培养和无血清悬浮培养联合化疗药物,无血清悬浮培养联合化疗药物又强于单纯无血清悬浮培养。
- 刘美陈宓艾亮龙浩李少林
- 关键词：肿瘤干细胞结肠癌奥沙利铂
- 靶向CD133的RNA干扰对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用
- 目的:利用RNA干扰技术下调SMMC-7721肝癌细胞中CD133的表达,观察其在肝癌细胞增殖和侵袭方面的作用。
方法:于体外构建CD133特异性的shRNA真核表达载体,脂质体法转染SMMC-7721肝癌细胞然后...
- 龙浩
- 关键词：靶向RNA干扰技术人肝癌SMMC-7721细胞SMMC-7721肝癌细胞
- 人结肠癌细胞株CW-2干细胞富集方法的比较被引量：4
- 2010年
- 目的比较3种细胞分选方法对人结肠癌细胞株CW-2干细胞的富集效率,探讨获得肿瘤干细胞的有效方法。方法采用单纯无血清悬浮培养、无血清悬浮培养+奥沙利铂、无血清悬浮培养+奥沙利铂+流式细胞术(多重联合)分别富集人结肠癌细胞株CW-2干细胞;应用流式细胞术、NOD-SCID小鼠致瘤实验和Transwell侵袭实验比较3种方法的富集效率;分别测量不同时间点(4、7、9、14、21、28d)各组小鼠成瘤情况;免疫组化检测移植瘤中CD44和EPCAM的表达情况。结果无血清悬浮培养细胞、无血清悬浮培养+奥沙利铂处理细胞和多重联合分选细胞中具有结肠癌干细胞特性的CD44+EPCAM+细胞,细胞比例分别为57.39%、73.85%、89.57%;多重联合分选细胞接种NOD-SCID小鼠后成瘤时间早、瘤体增长速度快,各时间点体积分别为(209.25±31.54)、(500.00±72.90)、(852.75±157.51)、(2280.00±440.91)、(4897.00±1154.15)、(11070.00±3559.86)mm3,与无血清悬浮培养细胞、无血清悬浮培养+奥沙利铂处理细胞的成瘤能力比较差异有统计学意义(P<0.05);单纯无血清悬浮培养细胞、无血清悬浮培养+奥沙利铂处理细胞和多重联合分选后细胞接种72h后穿过人工基底膜的细胞数分别为(98±7)/视野、(135±7)/视野、(188±6)/视野,3组之间差异有统计学意义(P<0.05);各组移植瘤中均表达CD44和EPCAM。3种分选方法所获得细胞中干细胞含量由高到低为:多重联合分选后细胞、无血清悬浮培养+奥沙利铂处理细胞、单纯无血清悬浮培养细胞。结论多重联合法富集肿瘤干细胞的效果明显强于单纯无血清悬浮培养和无血清悬浮培养+化疗药物法,是获得肿瘤干细胞较好的方法。
- 刘美李少林陈宓李小青龙浩
- 关键词：肿瘤干细胞结肠肿瘤细胞分离细胞培养技术
