马业伟
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和细胞周期的影响被引量：9
- 2001年
- 目的 探讨E1A基因对人肺腺癌细胞增殖的抑制作用与细胞周期的关系及作用机制。方法 利用细胞增殖曲线和裸小鼠体内致瘤性实验研究E1A基因对人肺腺癌细胞增殖的影响 ,采用流式细胞术分析人肺腺癌细胞周期 ,以蛋白印迹方法分析P16、P2 1、P5 3和cyclinB1水平变化。结果转染E1A基因后 ,人肺腺癌细胞 (Anip973 E1A)生长缓慢 ,体内致瘤性降低。Anip973 E1A细胞周期出现明显的S期抑制和G2 M阻滞 ,周期调控蛋白P16、P2 1、P5 3水平无明显变化 ,但cyclinB1表达明显下降。结论 E1A基因能显著抑制人肺腺癌细胞的体内外增殖 ,降低周期蛋白cyclinB1的表达 ,使细胞周期阻滞于G2 M 。
- 梁利波千新来马业伟王争刘玉英赵清正
- 关键词：E1A基因肺癌肺腺癌细胞增殖细胞周期
- 应用抑制性消减杂交技术分离E1A药敏相关基因被引量：3
- 2004年
- 背景与目的:大量研究已经证明,腺病毒5型E1A基因能抑制肿瘤的生长和转移,逆转其恶性表型,特别是能提高肿瘤细胞对多种化疗药物的敏感性,对射线也具有明显的增敏作用。但E1A基因通过哪些基因发挥作用还不知道。本研究利用抑制性消减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)技术在药物敏感的肿瘤细胞中分离差异表达的E1A药敏相关基因。方法:以E1A蛋白处理的人头颈淋巴结转移肿瘤细胞LN686为实验组,以亲本LN686细胞为对照组,提取mRNA,构建消减cDNA文库。随机挑取克隆,采用斑点杂交技术鉴定差异基因片段的表达水平,分析所获cDNA核苷酸序列,并在GenBank中进行比较,半定量RT-PCR鉴定实验组和对照组中新基因的mRNA水平。结果:文库包含约7000个阳性克隆,随机挑取384个克隆进行PCR鉴定,其中362个有插入片段,通过斑点杂交技术,证实这些基因在实验组中表达水平较对照组显著提高。将这362个克隆进行测序并经过BLAST分析,表明10个为新基因,已在GenBank中登录。对其中7个新基因进行半定量RT-PCR检测,证明经E1A蛋白处理的LN686细胞中,新基因的表达水平明显高于亲本LN686细胞,相差3～8倍。结论:应用抑制性消减杂交技术筛选到10个新基因片段,为进一步克隆其全长基因、研究其功能打下基础。
- 马业伟千新来赵清正周小山李艳春
- 关键词：肿瘤化学治疗耐药性抑制性消减杂交
- 氨肽酶N启动子调控的MnSOD基因对骨髓细胞的特异性辐射防护作用
- 2002年
- 背景与目的:骨髓造血细胞中导入耐辐射基因是克服放疗对造血系统抑制作用的有效手段,但这也增加了肿瘤细胞的辐射耐受性。本实验旨在探索不明显增加肿瘤细胞对辐射抗拒性的同时,能特异性保护骨髓细胞免受辐射导致的损伤的方法。方法:构建以氨肽酶N(aminopeptidaseN,APN)基因骨髓特异性启动子调控的锰超氧化物歧化酶(manganesesuperoxidedismutase,MnSOD)基因逆转录病毒载体,并导入成骨髓细胞KG1a和肝癌细胞BEL7402中。用RT-PCR分析MnSODmRNA水平,测定细胞中MnSOD活性,以细胞存活实验检测骨髓细胞和肝癌细胞对X射线的敏感性,并用流式细胞术和断裂DNA电泳方法对辐射诱导的细胞凋亡进行分析。结果:导入基因的KG1a细胞中MnSODmRNA水平和酶活性明显升高。APN骨髓特异性启动子调控的MnSOD基因表达能有效抑制辐射引起的KG1a细胞凋亡。导入基因的KG1a细胞对辐射的耐受性提高,在用10Gy剂量照射时,KG1a细胞存活率比原来增加3.7倍。而导入MnSOD基因并未使BEL7402细胞中MnSODmRNA水平和酶活性提高,其放射敏感性未发生明显变化。结论:APN骨髓特异性启动子能控制MnSOD基因在骨髓细胞中高表达,而在癌细胞中低表达。在用X射线杀伤癌细胞的过程中,APN骨髓特异性启动子调控的MnSOD基因能特异性保护骨髓细胞。
- 梁利波马业伟赵清正1周小山杨军李艳春刘玉英王争章扬培
- 关键词：氨肽酶N逆转录病毒载体骨髓细胞肝癌细胞
- 改造的腺病毒5型E1A基因对TNF-α诱导的猪血管内皮细胞中NF-κB活性的抑制作用
- 2003年
- 在延缓性免疫排斥反应(DXR)过程中, NF-κB发挥着关键作用. 如何恰到好处地抑制其活性是本领域研究的重要问题之一. 用改造的E1A基因(E1A)包括功能区(1 ~ 80氨基酸)和核定位区(139 ~ 243氨基酸), 删除其中可能对人体有害的CR2区, 将其克隆到真核表达载体pcDNA3中, 并转染猪血管内皮细胞(PAEC), 经G418筛选, 获得稳定表达细胞株. RT-PCR技术和细胞生长曲线分析, 证明E1AΔ基因能在PAEC中稳定表达, 且不影响细胞的正常生长, 并能抵抗肿瘤坏死因子-α (TNF-α)诱导的细胞凋亡. 报告基因分析表明, E1A(能抑制由TNF-α诱导的NF-κB活性, 其抑制率为53%, 对NF-κB信号转导途径下游的一个重要炎症基因--E-选择素基因的表达抑制率达63%. 综上, E1AΔ基因的这些功能基本符合异种器官移植中克服DXR的要求, 为利用E1AΔ基因克服DXR的可行性提供了实验依据.
- 马业伟周小山赵清正杨军高新李艳春刘玉英王争
- 关键词：猪血管内皮细胞活性抑制腺病毒TNF-Α
- 特异启动子调控的MDR1和MnSOD基因对骨髓的选择性保护作用被引量：2
- 2003年
- 目的探讨特异保护骨髓细胞免受抗癌药物及射线损害的新途径。方法 构建了由APN骨髓特异性启动子调控的耐药、耐辐射基因的逆转录病毒载体,导入骨髓母细胞及癌细胞中,用细胞存活实验对耐药耐辐射性能进行观察。分离小鼠骨髓细胞,经转染基因后,再输回到预先用射线处理以破坏骨髓系统的同种受体小鼠体内。经化疗药物或射线处理后,不同时间采血,计算白细胞数,观察在药物或射线照射后导入耐药或耐辐射基因对造血细胞的保护作用。结果 导入MDR1基因的KGla细胞对秋水仙素、足叶乙甙、长春新碱、阿霉素及紫杉醇与对照组相比,各提高了10.6,10.4,11.2,4.2和14.2倍。导入由APN启动子驱动的MnSOD基因,使KGla细胞比对照组对射线(10 Gy)的耐受性提高3.7倍。相反,导入以上两个基因后,肝癌细胞BEL7402的化、放疗耐受性未见明显变化。体内实验表明,转染了MDR1和MnSOD基因的小鼠血液中,白细胞数量明显高于对照组(P<0.01)。结论体外由APN骨髓启动子调控的MDR1和MnSOD基因能特异性地保护骨髓细胞,而对肿瘤细胞无明显影响。体内,在用药物或射线处理动物时能重建造血功能。此研究为肿瘤患者在接受化、放疗时特异性保护骨髓系统,提供了新的思路和依据。
- 梁利波马业伟周小山杨军李艳春王争周兰萍章扬培赵清正
- 关键词：化学治疗造血功能骨髓细胞MDRL基因
