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β-catenin对单核—巨噬细胞分化的影响及机制研究: 白血病是一类发生在造血系统,严重危害人类健康的恶性克隆性疾病,也是儿童及青少年发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。近年来,虽然越来越多的学者致力于白血病的病因和发病分子机制的研究,但由于致病机制比较复杂,目前尚不完全明确。随着...; 鞠文; 关键词：急性髓细胞性白血病 WNT/Β-CATENIN信号通路; 文献传递

一种布鲁氏菌病特异性融合蛋白抗原的制备及应用: 本发明公开了一种布鲁氏菌病特异性融合蛋白抗原，是将布鲁氏菌外膜蛋白BP26、OMP31、OMP16、OMP2b优势抗原表位的氨基酸序列进行串联，构建了融合蛋白基因，插入pET‑28b中，在大肠杆菌BL21(DE3)表达的...; 李娟李丽徐坤宋秀玲殷德辉宋丹丹刘玉申鞠文王娟曲笑锋赵超魏佳

重组钩端螺旋体多抗原位点同源合成基因的表达及其抗原性鉴定: 2012年; 目的:构建重组钩端螺旋体(钩体)优势抗原表位原核表达系统,以期获得高纯度的钩体优势抗原表位重组融合蛋白,为进一步研究钩体快速检测方法奠定基础。方法:利用基因重组的方法构建表达质粒pET-rLP。经IPTG诱导后,获得高效表达带组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,包涵体蛋白经尿素变性溶解,采用镍离子亲和纯化,利用SDS-PAGE、Western blotting和间接ELISA法鉴定。结果:在相对分子质量为20 000处有1条特异性蛋白条带,为重组钩体优势抗原表位融合蛋白;ELISA结果显示其可与钩体阳性血清特异性结合,而与其他血清无交叉反应。结论:成功构建重组钩体优势抗原表位原核表达系统,并获得高纯度的重组钩体优势抗原表位融合蛋白。; 张士尧浦昀徐坤李金华原野鞠文李娟; 关键词：钩端螺旋体原核表达融合蛋白活性鉴定

单增李斯特菌多克隆抗体制备及其在乳胶凝集试验中的应用被引量：2: 2012年; 目的:制备高效价高纯度兔抗单增李斯特菌(LM)多克隆抗体,并初步探讨其在乳胶凝集试验(LAT)中的应用。方法:复苏并扩大培养LM标准菌株,制备灭活疫苗免疫家兔,采用ELISA法测定耳缘静脉血抗体效价。4次免疫后,颈动脉采血分离血清,采用辛酸-饱和硫酸铵法粗分离,经蛋白亲和层析柱HiTrap Protein GHP进行IgG纯化,采用SDS-PAGE电泳、紫外分光光度法、间接ELISA法分别测定蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价。得到的高效价提纯IgG与乳胶微球进行共价偶联,并选择偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件,建立快速检测模拟样品中LM的方法。结果:制备并纯化的兔抗LM IgG蛋白浓度为23.364g.L-1,效价为1∶12 800～1∶25 600,与霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺菌等多种菌均无交叉反应,与斯氏李斯特菌有弱交叉反应;致敏时IgG与乳胶微球偶联比率为1∶40;利用LAT方法检测246份样品,阳性检出率为87.5%,最低检出抗原含量为0.039 8g.L-1。结论:制备了高效价、高纯度的兔抗LM多克隆抗体;建立的LAT方法特异性强,敏感性较高,重复性好,便于基层推广使用,为LM的现场检测提供了一种新手段。; 鞠文宋秀玲原野张士尧方珍徐坤李娟孟日增; 关键词：单增李斯特菌多克隆抗体乳胶凝集试验

大肠杆菌O157:H7异硫氰酸荧光素标记抗体的制备及评价被引量：9: 2013年; 目的:制备高效价、高纯度、特异性好、荧光强度高及稳定的抗大肠杆菌O157∶H7异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,初步探讨其在大肠杆菌荧光免疫检测试验中的应用。方法:复苏培养E.coli O157∶H7标准菌株,甲醛灭活制备疫苗免疫家兔。4次免疫后,颈动脉采血分离血清,经辛酸-饱和硫酸铵法粗提后应用蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行IgG纯化,借助SDS-PAGE电泳、BCA试剂盒法、间接ELISA法分别对蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价进行测定。应用不同FITC与蛋白量比值以及不同标记反应条件对多克隆抗体进行标记。比较荧光抗体F485/535,结合差异性显著分析对FITC与蛋白量比值及反应条件进行合理选择,应用标记抗体与E.coli O157∶H7和金黄色葡萄球菌混合菌液反应验证标记效果。结果:HiTrap Protein G进行E.coli O157∶H7多克隆抗体纯化的最佳纯化方法为35%、100%二梯度洗脱,制备抗体效价为1∶25 600,与沙门氏菌、阴沟肠杆菌等8种肠杆菌无交叉反应,最佳FITC与蛋白量比值为1∶10,最佳标记反应条件为20℃、2h。由最佳条件制得的荧光抗体与E.coli O157∶H7反应明显,强荧光连续照射15min后仍显示高亮度荧光反应,且不与金黄色葡萄球菌反应。结论:本实验首次制备出纯度高、荧光强度高、持续时间长的E.coliO157:H7FITC标记多克隆抗体,为E.coli O157:H7荧光免疫检测方法的建立完成了关键步骤。; 方珍鞠文秦亚楠孟日增潘风光; 关键词：多克隆抗体

布鲁氏菌多表位融合蛋白疫苗的制备及应用: 本发明公开了布鲁氏菌多表位融合蛋白抗原，是将布鲁氏菌外膜蛋白BP26、OMP31、OMP16、OMP2b优势抗原表位的氨基酸序列进行串联，构建了融合蛋白基因，表达了蛋白，制备了布鲁氏菌多表位融合蛋白抗原疫苗。小鼠攻毒实验...; 徐坤李娟李丽殷德辉宋秀玲王娟刘玉申宋丹丹曲笑锋鞠文赵超庞博孟祥君张惠雯翟玥暴昊; 文献传递

一种布鲁氏菌病特异性融合蛋白抗原的制备及应用: 本发明公开了一种布鲁氏菌病特异性融合蛋白抗原，是将布鲁氏菌外膜蛋白BP26、OMP31、OMP16、OMP2b优势抗原表位的氨基酸序列进行串联，构建了融合蛋白基因，插入pET‑28b中，在大肠杆菌BL21(DE3)表达的...; 李娟李丽徐坤宋秀玲殷德辉宋丹丹刘玉申鞠文王娟曲笑锋赵超魏佳; 文献传递

生物素标记的布鲁菌多克隆抗体的制备被引量：1: 2015年; 目的制备生物素标记的兔抗牛种布鲁菌544A多克隆抗体,并进行鉴定。方法复苏并扩大培养牛种布鲁菌544A,灭活后制备灭活疫苗,经背部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,5次免疫后,经心脏采血,分离血清,采用硫酸铵盐析法对血清中的多克隆抗体进行粗提,再通过蛋白亲和柱层析法对抗体进一步纯化,利用SDS-PAGE分析抗体的纯度,间接ELISA法检测抗体的效价和特异性,Bradford法检测抗体的蛋白含量,并利用生物素对抗体进行标记。结果制备的牛种布鲁菌544A的兔多克隆抗体纯度较高,效价为1:256 000,特异性较好,蛋白含量为2.83 mg/ml,每摩尔蛋白中标记的生物素摩尔数为3.09。结论成功制备了生物素标记的牛种布鲁菌多克隆抗体,为下一步研制牛种布鲁菌免疫检测试剂盒奠定了物质基础。; 李丽鞠文殷德辉孟日增李娟宋秀玲徐坤; 关键词：布鲁菌多克隆抗体免疫检测

新型多酸化合物NCW-6的毒理学安全性评价被引量：1: 2012年; 目的:评价具有抗病毒活性的多酸化合物NCW-6的安全性,阐明NCW-6的毒性及潜在的危险。方法:依据新药临床前毒理学评价方法进行NCW-6经口急性毒性实验和致畸敏感期实验。急性毒性实验中,将健康的昆明小鼠随机分为7组,每组10只,雌雄各半;给药剂量最低为4 000.00 mg.kg-1、最高为6 000.00mg.kg-1,组距为400.00mg.kg-1;经口灌胃1次给药,观察给药后14d小鼠的中毒表现,记录死亡数,用Bliss法计算半数致死剂量(LD50);致畸敏感期实验中,孕鼠随机分为5组,每组至少20只;给药组剂量分别为91.7、366.8和1 467.5mg.kg-1;阴性对照组给予5mL.kg-1蒸馏水,于受孕后第6～15天连续给药,每天灌胃1次;阳性对照组于妊娠第10天一次灌胃给予130mg.kg-1的维甲酸;各组孕鼠于孕期第20天颈椎脱臼处死,检查受孕情况,记录黄体数、活胎数、死胎数和吸收胎数等,做胎鼠一般外观检查(体质量、身长、尾长和外观有无异常),取胎鼠雌雄各半行内脏形态检查和骨骼形态检查。结果:急性毒性实验,NCW-6的LD50为5 869.9mg.kg-1,属于无毒化合物。致畸敏感期实验,3个给药组孕鼠的体质量和增重与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),各给药组胎鼠的平均体质量、身长、尾长以及平均胎质量、窝质量与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),各给药组胎鼠外观、内脏畸形率、骨骼畸形率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NCW-6属于无毒化合物,且对大鼠无致畸作用,具有深入研究开发的价值。; 原野李金华王娟张士尧鞠文齐燕飞李娟徐坤; 关键词：急性毒性毒理学

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