陈芳芳 作品数:59 被引量:115 H指数:6 供职机构: 南京军区南京总医院 更多>> 发文基金: 江苏省“科教兴卫工程”医学重点人才基金 南京军区医药卫生科研基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
Id3过表达对不同肿瘤细胞中β-catenin的调节 被引量:2 2017年 目的分化抑制因子3(Id3)参与肿瘤发生、细胞增殖和凋亡等过程;β-catenin是导致肿瘤发生的关键。文中探讨Id3与β-catenin在不同肿瘤细胞中的表达及Id3对β-catenin的调控作用。方法采用Trizol法提取各肿瘤细胞总RNA,运用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)分析肿瘤细胞中Id3和β-catenin的相对表达量;用非脂质体转染技术将含人Id3基因的真核表达载体p EGFP/Id3分别导入SW-480、人肺腺癌细胞A549和人肺腺癌细胞耐顺铂株A549/DDP 3种细胞,荧光显微镜观察细胞内EGFP-Id3融合蛋白的表达情况;qRT-PCR技术分析转染后细胞内Id3及β-catenin mRNA的表达水平;Western blot分析转染后细胞内Id3及β-catenin蛋白的表达水平。结果 Id3在肠癌SW-480及HT-29细胞中表达量最低,明显低于A549及其他肿瘤细胞(P<0.05);在鼻咽癌CNE、5-8F细胞中的表达量显著高于其他肿瘤细胞组(P<0.05)。Id3表达量最低的肠癌SW-480中β-catenin与其他组细胞相比含量最高(P<0.05),Id3表达较低的胃癌AGS细胞及肠癌HT-29细胞β-catenin表达次之,其他肿瘤细胞如H446、A549、SPC-A-1、A549/DDP、SK-MES-1细胞中β-catenin均呈低表达,而Id3表达量较高的CNE、5-8F等肿瘤细胞中β-catenin的含量相对极低或几乎不表达,且与其他组细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜观察发现,转染Id3/p EGFP的细胞体积缩小,细胞膜皱缩,折光度消失,而转染空载体p EGFP后,大部分细胞未见上述变化。与对照组相比,Id3/p EGFP组A549、A549/DDI、SW-480细胞转染后Id3 mRNA表达水平均有显著增高(1.24±0.12 vs 193.12±2.80,1.09±0.11 vs 188.30±2.60,0.92±0.29 vs 19.08±0.59,P<0.01)。与对照组比较,β-catenin mRNA在Id3过表达的肠癌SW-480细胞中表达明显下调(0.98±0.05 vs 0.32±0.03,P<0.01);而在A549和A549/DDP细胞中,Id3转染后β-catenin表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,Id3过表达后可明显下调� 赵琴飞 陈芳芳 徐羽中 王海永 管晓龙 孙宁 李昂 宋淑圣 虞伟 李晓军关键词:Β-CATENIN 肿瘤细胞 外源性人Id3基因表达对A549细胞生长功能影响的研究 李晓军 朱传东 汪萍 陈芳芳 贾丽 虞伟双重PCR快速检测KPC和NDM耐药基因 被引量:3 2018年 目的检测耐药基因的核酸技术,已成为有效监测和控制耐药菌扩散的强有力工具之一。建立一种快速检测KPC和NDM两种耐药基因的方法,以指导临床用药和监控院内细菌耐药性流行情况。方法根据肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)和新德里金属β-内酰胺酶(NDM)的基因保守区,设计PCR反应的引物,优化扩增体系,建立同时检测耐药基因KPC和NDM的方法,分析方法的灵敏度和特异性,并应用于铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌株的检测。结果 KPC和NDM基因的序列比对结果与原序列相比一致性为100%。KPC-2阳性标准品和标准菌株肺炎克雷伯菌ATCC BAA-1705均出现预期大小一致的目的片段(151 bp); NDM-2阳性标准品与NDM阳性肺炎克雷伯菌出现与预期大小一致的目的片段(261 bp),均无非特异性扩增。经对PCR产物进行测序验证,产物序列与耐药基因KPC-2和NDM-1序列一致性为100%。双重PCR检测耐药基因KPC和NDM的最低可检测浓度分别为7×102和5×102copies/反应。13株对碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌株中12株检测到耐药基因,检出率为92.3%,其中KPC阳性10株(83.3%),NDM阳性2株(16.7%),其余10株碳青霉烯敏感的肺炎克雷伯菌株未检测到KPC和NDM; 13株铜绿假单胞菌中6株对碳青霉烯耐药的菌株中2株检测到耐药基因,均为KPC,检出率为33.3%,其余7株均未检测到KPC和NDM。结论双重PCR方法能够快速有效地用于KPC和NDM两种耐药基因的检测,并具有灵敏度高、特异性强等优点,对于指导临床用药与监控院内细菌碳青霉烯类抗生素耐药性的传播具有重要意义。 顾芸芸 孙宁 姚新月 史利宁 陈芳芳 李晓军关键词:双重PCR miRNA靶向干扰549细胞id3基因表达的实验研究 目的:探讨miRNA对人肺腺癌(Lung adenocarcinoma)细胞株A549细胞Id3基因表达的抑制作用,观察Id3基因沉默对人肺腺癌细胞生长的影响。方法:根据人Id3基因序列设计并合成4对miRNA olig... 陈芳芳 贾丽 赵晓琴 王书侠 武建国 虞伟 李晓军文献传递 分化抑制因子3重组腺病毒载体的构建及鉴定 庞小娟 赵晓琴 彭薇 臧宇辉 陈芳芳 罗冰 虞伟 秦浚川 李晓军Lewis肺腺癌全细胞瘤苗对C57BL/6小鼠Lewis肺腺癌抑制作用有效性的实验研究 问题的提出及研究背景:
人们发现肿瘤细胞能表达肿瘤抗原,机体的免疫系统通过对其做出免疫反应能将抗原清除。那么机体罹患肿瘤后能否对相应肿瘤产生特异性免疫?通过提高机体对相应肿瘤的特异性及非特异性免疫反应,能否阻止... 陈芳芳关键词:肺腺癌 免疫反应 肿瘤抗原 疫苗治疗 肿瘤疫苗 文献传递 液态芯片技术测定肿瘤标志物的可行性评价 2012年 甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原(PSA)、糖类相关抗原125(CA125)是临床广泛应用的肿瘤标志物。液态芯片技术是新发展的一种高灵敏度、高通量的标记免疫分析技术,可在同批次内对多种分析物进行快速检测。 王国洪 陈芳芳 刘国瑞 王艾丽 李晓军关键词:肿瘤标志物 液态芯片 化学发光免疫分析 甲胎蛋白异质体在肝细胞癌中临床应用 被引量:1 2012年 目的评价甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在肝细胞癌(HCC)中的临床应用。方法收集本院2011年8月至2012年4月住院、门诊患者及健康体检者血清,检测血清中AFP总含量,再应用微量离心柱法分离检测AFP-L3的百分含量。结果以AFP-L3>10%作为阳性判断标准,68例肝癌患者血清AFP-L3阳性率为75.0%,45例肝硬化患者血清AFP-L3阳性率为2.2%,51例慢性肝炎患者血清AFP-L3阳性率为5.9%,60例体检者血清AFP-L3阳性率为0,肝癌患者AFP-L3水平明显高于肝硬化,慢性肝炎及健康人群(P<0.01)。结论 AFP-L3是肝细胞癌鉴别诊断的有用指标,且与AFP联合检测更有利于肝细胞癌的诊断。 李家亮 陈芳芳 王国洪关键词:甲胎蛋白异质体 甲胎蛋白 肝癌 抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物对类风湿关节滑膜细胞功能影响的研究 被引量:11 2013年 目的:研究类风湿关节炎(RA)患者血清抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物(ACPA-IC)对RA患者关节成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖和分泌细胞因子功能的影响。方法:用PEG沉淀法提取RA患者血清免疫复合物(IC),ELISA法检测IC中ACPA-IC水平。用G蛋白免疫亲和层析法从6份ACPA-IC(+)RA血清、4份ACPA-IC(-)RA血清及10份正常人血清中提取IC。体外培养RA关节FLS;分别用RA ACPA-IC(+)提取物、ACPA-IC(-)提取物及健康人血清IC(C-IC)刺激FLS,用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂检测FLS增殖情况,液态芯片技术检测不同来源IC刺激对FLS分泌IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、GM-CSF、EGF、VEGF等11种细胞因子水平的影响。结果:RA患者ACPA-IC(+)提取物能够显著促进FLS增殖,与对照组IC比较,在培养24小时时间里,四种浓度(25、50、75和100μg/ml)的ACPA-IC都能显著促进FLS增殖。RA患者血清ACPA-IC(+)和ACPA-IC(-)提取物刺激FLS 24小时后,可诱导细胞分泌大量IL-6、IL-8和GM-CSF;其中ACPA-IC(+)组刺激FLS分泌GM-CSF和IL-8量均显著高于ACPA-IC(-)组和C-IC组,ACPA-IC(+)组刺激FLS分泌IL-6水平显著高于C-IC组,但与ACPA-IC(-)组无显著性差异。三组间刺激分泌IL-1β、IL-2、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、EGF、VEGF等其他8种细胞因子含量均无显著性差异。结论:RA患者血清ACPA-IC可促进FLS增殖,并诱导其分泌IL-6、IL-8和GM-CSF等炎性细胞因子,进而进一步诱发滑膜炎症反应及骨质破坏。 高德玉 陈芳芳 刘阳 王凯 虞伟 严孝岭 李晓军BECKMAN DxI 800全自动化学发光仪检测泌乳素的性能验证 被引量:3 2015年 目的:对BECKMAN DxI 800全自动化学发光仪检测泌乳素(PRL)的分析性能进行验证。方法参照美国临床实验室标准化协会(NCCLS)的文件,选取病人血清和质控室间质评质控品,对 PRL的批内精密度、批间精密度、准确度、线性范围等方面进行验证。结果 PRL的批内和批间精密度CV值均小于厂家声明的CV值,在允许范围内;PRL线性范围验证结果显示,a值为1.0114,r值为0.9974,均在仪器要求范围内,并具有良好的线性;PRL准确度验证结果显示,测定5份室间质评的检测结果与“靶值”的偏倚为-1.18%--7.78%,均在室间质评的测量范围之内。结论 BECKMAN DxI 800全自动化学发光仪测定PRL在精密度、准确度、线性范围等性能指标均在仪器要求范围内,符合要求,可应用于临床检测。 陈芳芳 李家亮 张中书 王国洪关键词:泌乳素 精密度