陈宣男
- 作品数：9 被引量：83H指数：3
- 供职机构：吉林大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- NOD1真核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2010年
- 目的:构建天然免疫胞内识别受体核苷酸寡聚域1(NOD1)真核表达质粒。方法:NOD1基因片段经PCR扩增获得,经酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,对挑选出的阳性克隆测序,将序列正确的重组质粒pflag-NOD1转染293T细胞,用Western印迹检测目的蛋白的表达,同时用NF-κB的萤光素酶报告基因检测NOD1蛋白的活性。结果:pflag-NOD1可以在真核细胞293T中表达,并可以增强NF-κB报告基因的转录活性。结论:构建了重组质粒pflag-NOD1,在细胞中表达NOD1后能够提高NF-κB转录的生物活性,为进一步研究NOD1的功能奠定了基础。
- 陈宣男何湘姜铮王雪松刘大伟郭燕红袁静甄清
- 关键词：NF-ΚB真核表达萤光素酶报告基因
- 蛋白质磷酸化修饰的研究进展被引量：67
- 2009年
- 蛋白质磷酸化是最常见、最重要的一种蛋白质翻译后修饰方式,它参与和调控生物体内的许多生命活动。通过蛋白质的磷酸化与去磷酸化,调控信号转导、基因表达、细胞周期等诸多细胞过程。随着蛋白质组学技术的发展和应用,蛋白质磷酸化的研究越来越受到广泛的重视。我们介绍了蛋白质磷酸化修饰的主要类型与功能、磷酸化蛋白质分析样品的富集及制备、磷酸化蛋白的鉴定及磷酸化位点的预测、蛋白分离后磷酸化蛋白的检测,及蛋白质磷酸化的分子机制,并综述了近年来国内外的主要相关研究进展。
- 姜铮王芳何湘刘大伟陈宣男赵红庆黄留玉袁静
- 关键词：磷酸化修饰
- 长双歧杆菌NCC2705与宿主细胞Caco2相互作用的研究
- 双歧杆菌被认为是人肠道内最重要的益生菌,是评价人健康状况的指标之一。它能够调节并维持肠道微生态平衡,调节机体免疫,拮抗致病菌,合成营养物质,调节血脂,防治肿瘤等,具有保健、防病、治病的三重功效,一直倍受关注。双歧杆菌的粘...
- 陈宣男
- 关键词：长双歧杆菌NCC2705粘附蛋白质双向电泳
- 文献传递
- pcDNA3转染HPV16E6基因对人宫颈癌细胞C33A细胞生长及周期的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨HPV16E6对宫颈癌C33A细胞生长增殖的影响。方法通过脂质体法将HPV16E6基因稳定转染宫颈癌C33A细胞,RT-PCR及Western blot分别检测转染细胞中HPV16E6 mRNA和蛋白表达水平,流式细胞仪检测HPV16E6基因转染对C33A细胞生长增殖与细胞周期的影响。结果稳定转染获得了稳定表达pcDNA3-HPV16E6质粒的C33A细胞克隆(C33A-E6细胞,即pcDNA3/HPV16E6/C33A组)及稳定复制空载体质粒的细胞克隆(C33A-P细胞,即pcDNA3/C33A组),并将未转染的C33A细胞作为对照组。pcDNA3/HPV16E6/C33A组细胞的生长速度比pcDNA3/C33A组和对照组明显加快(P<0.05)。在转染了HPV16E6基因的C33A细胞中,其DNA合成前期Gl和静止期G0(G0/G1期)细胞百分率(39.3%)明显低于pcDNA3/C33A组(53.7%)和对照组(55.4%)(P<0.01);而处于S期细胞的百分率(38.3%)、DNA合成后期G2及分裂期M的细胞百分率(G2/M:32.9%),均明显高于pcDNA3/C33A组(S:29.4%;G2/M:17.0%)和对照组(S:28.0%;G2/M:16.6%)(P<0.01)。pcDNA3/C33A组和对照组细胞周期的各期分布无明显差异(P>0.05)。结论HPV16E6可能通过某种途径参与了C33A细胞的周期调控,促进细胞分裂,从而促进C33A细胞的增殖。
- 杨秀坤陈宣男姜铮
- 关键词：人乳头瘤病毒宫颈癌细胞细胞周期
- 长双歧杆菌NCC2705群体感应系统信号分子AI-2的检测被引量：3
- 2010年
- 目的:用生物学方法检测长双歧杆菌NCC2705是否产生群体感应系统信号分子AI-2。方法:将长双歧杆菌NCC2705不同时间点的培养上清分别加至AI-2特异报告系统哈氏弧菌BB170中,以空白培养基上清为对照,用荧光光度计对哈氏弧菌发光强度进行计量,推测出长双歧杆菌NCC2705上清中是否含有分泌的AI-2,并由此推断AI-2的活性。结果:通过微孔板检测系统对加入长双歧杆菌NCC2705培养上清的哈氏弧菌BB170进行检测,发现双歧杆菌上清的加入增强了哈氏弧菌BB170发出的荧光强度。结论:长双歧杆菌NCC2705中存在依赖于luxS/AI-2的群体感应系统,并能够分泌有活性的AI-2,为进一步研究长双歧杆菌NCC2705AI-2及luxS基因的功能打下基础。
- 姜铮陈宣男王雪松刘大伟郭燕红赵江丽邵长林袁静何湘
- 关键词：长双歧杆菌NCC2705
- 长双歧杆菌NCC2705葡萄糖与乳糖代谢的比较蛋白质组学被引量：4
- 2008年
- 【目的】以本实验室前期构建的长双歧杆菌NCC2705菌株蛋白质参考图谱为基础,研究长双歧杆菌发酵乳糖和葡萄糖的比较蛋白质组学。【方法】采用ImageMaster 2D Elite Platnum Version5.0比较分析3倍以上蛋白差异点;利用MALDI-TOF进行差异蛋白鉴定,每个蛋白质点的肽指纹图谱在长双歧杆菌NCC2705菌株的蛋白质数据库用Mascot进行检索;采用Pro-Q磷酸化试剂进行磷酸化蛋白的染色。【结果】鉴定到31个蛋白表达发生显著变化,在乳糖发酵中14个蛋白上调17个蛋白下调。这些蛋白为亲水性酸性蛋白,它们基因的CAI值均在0.5以上,主要包括糖代谢相关蛋白、应激蛋白、转录和翻译相关蛋白,还有一些未知功能的蛋白。此外,有两个蛋白:转醛缩酶(BL0715,transaldolase,tal)L3蛋白点和丙酮酸激酶(BL0988,pyruvate kinase,pyk)G9蛋白点发生了磷酸化作用。【结论】长双歧杆菌NCC2705在乳糖中生长快于葡萄糖,它们的降解途径是相同的;转醛缩酶和丙酮酸激酶发生了翻译后修饰作用,推测转醛缩酶在43T和47S发生了磷酸化,而丙酮酸激酶在65S发生了磷酸化。
- 何湘刘大伟孙忠科王芳姜铮赵红庆陈宣男黄留玉袁静
- 关键词：比较蛋白质组磷酸化蛋白
- 病原微生物胞内寄生机制的研究进展被引量：3
- 2011年
- 近年来随着微生物学和免疫学的发展,病原菌胞内寄生的研究越来越受到广泛的重视。现对病原微生物胞内寄生的侵袭途径、胞内生境以及不同病原体胞内生存致病的特点,以及近年来国内外的主要研究进展做一综述。
- 赵江丽陈宣男姜铮王芳袁静甄清
- 长双歧杆菌NCC2705株果糖结合蛋白BL0033基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 2009年
- 目的:克隆长双歧杆菌NCC2705株果糖结合蛋白BL0033的基因,利用大肠杆菌表达GST-BL0033融合蛋白并纯化。方法:以长双歧杆菌NCC2705株基因组为模板,PCR扩增BL0033基因,并将其插入pGEX-4T-1表达载体,转化至大肠杆菌DH5α;提取质粒,经PCR、质粒双酶切及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21,并对表达条件进行摸索;用谷胱甘肽-Sepharose4B树脂对可溶性GST-BL0033融合蛋白进行纯化。结果:PCR扩增的BL0033基因长度接近1000bp,与预期值一致;重组菌在IPTG浓度为0.05mmoL/L的条件下,于16℃诱导过夜后,SDS-PAGE分析可见可溶性表达条带,相对分子质量约60×103,与预期值一致;亲和纯化后,SDS-PAGE结果显示单一的表达条带。结论:克隆了BL0033蛋白的基因,并表达纯化了融合蛋白GST-BL0033,为进一步研究长双歧杆菌NCC2705株BL0033蛋白功能奠定了基础。
- 郭燕红刘大伟何湘陈宣男黄留玉廖祥儒袁静
- 关键词：长双歧杆菌基因克隆
- c-abl通过与雌激素受体β相互作用上调其转录活性被引量：2
- 2010年
- 雌激素受体β(ERβ)在心血管疾病发生发展中起着重要的作用,但是其在心血管病中发挥作用的机制还不清楚.因此寻找与ERβ相互作用的共调节因子对阐明ERβ信号通路具有重要价值.应用GST沉淀、免疫共沉淀技术,发现ERβ可以与c-abl相互作用,并可被c-abl磷酸化.通过荧光素酶报告基因方法发现,c-abl可以上调ERβ转录激活的活性,并且上调作用可以被c-abl的抑制剂STI571抑制.上述结果提示c-abl是新的ERβ共刺激因子,为进一步研究ERβ通路在心血管疾病中发挥作用的机制打下基础.
- 高远陈宣男陈宣男郑子瑞马红芳倪才飞宋婷齐国先齐国先何湘
- 关键词：C-ABL蛋白质相互作用
