钟强
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局科技发展基金国家自然科学基金上海市科委“登山计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 构建RNA干扰真核表达载体靶向抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231内的VEGF-C表达之研究
- 2010年
- 目的:通过构建RNA干扰真核表达载体人乳腺癌细胞株MDA-MB-231内VEGF-C后的生物学变化。方法:构建pGCsi-VEGF-C真核表达载体,建立VEGF-C稳定低表达的MDA-MB-231人乳腺癌细胞株,检测该细胞株的体外增殖和侵袭能力及体内移植瘤生长和淋巴结转移的变化。结果:成功构建了pGCsi-VEGF-C真核表达载体,沉默效率达90%;筛选并获得VEGF-C稳定低表达的MDA-MB-231细胞株,该细胞株的体外增殖及侵袭能力,分别下降40%和35%,体内移植瘤的生长减慢和癌细胞淋巴结转移数量明显下降(P<0.05)。结论:VEGF-C的表达量下降可显著降低MDA-MB-231细胞株的增殖、侵袭及淋巴结转移能力。
- 钟强朱晨芳戚晓亮孙波顾岩
- 关键词：VEGF-C乳腺癌RNA干扰真核表达载体
- IGF-1调控乳腺癌VEGF-C表达的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对乳腺癌MDA-MB-231细胞株的血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)表达的调控及其相关信号传导通路。方法:应用实时定量PCR和Western印迹技术检测IGF-1刺激前后目的基因VEGF-C mRNA及其蛋白在乳腺癌细胞中表达的变化,检测细胞内相关信号传导分子Akt、ERK1/2蛋白及其磷酸化表达改变。结果:IGF-1显著促进乳腺癌细胞株的VEGF-C表达(P<0.05);VEGF-C表达与IGF-1间呈浓度依赖关系;在IGF-1作用下,p-Akt及p-ERK1/2表达显著增加(P<0.05)。结论:IGF-1能显著促进乳腺癌MDA-MB-231细胞株的VEGF-C表达,信号传导分子p-Akt与p-ERK1/2可能在其中起着重要的介导作用。
- 孙波钟强朱晨芳顾岩
- 关键词：乳腺癌胰岛素样生长因子-1血管内皮生长因子-C
- RNA干扰CXCR4表达抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、黏附和迁移
- 2010年
- 目的:构建CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor4,CXCR4)RNA干扰真核表达载体,研究其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、黏附及迁移能力的抑制作用。方法:构建针对CXCR4的带发夹结构的小RNA干扰序列,并连接到pGCsi-U6-Neo-GFP载体中,转染293T细胞,筛选出干扰效率最高的表达载体。脂质体法转染MDA-MB-231细胞。利用CCK8法、细胞-基质黏附实验和划痕修复实验检测shRNA干扰CXCR4表达对MDA-MB-231细胞增殖、黏附和迁移能力的影响。结果:成功构建CXCR4-shRNA重组质粒,并转染293T细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测发现CXCR4沉默效率最高可达81.3%。CXCR4-shRNA转染能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05)以及细胞与细胞外基质的黏附(P<0.05)。CXCR4-shRNA转染组MDA-MB-231细胞的迁移距离明显低于对照质粒组和空白对照组(P<0.01)。结论:CXCR4-shRNA干扰载体能特异性抑制CXCR4的表达,从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、黏附及迁移。
- 刘磊郭善禹顾岩钟强
- 关键词：CXC趋化因子受体4RNA干扰乳腺癌
- 重组人生长激素对裸鼠肝癌移植瘤生长转移的实验研究被引量：1
- 2011年
- 目的:研究重组人生长激素(recombinant hunman growth hormone,rhGH)对裸鼠肝癌移植瘤生长和转移能力的影响及相关信号转导通路的变化。方法:通过RNA干扰技术抑制MHCC-97H肝癌细胞中胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)的表达。建立裸鼠皮下和原位肝癌移植模型;研究IGF-1R基因沉默前后,rhGH对裸鼠肝癌移植瘤成瘤、生长和转移的影响,并用Western印迹法检测PI-3K信号转导通路中,信号分子AKT的蛋白表达和磷酸化水平。结果:注射rhGH可使荷瘤裸鼠体重明显增加,肝癌原位移植瘤体积显著增大(P<0.05);但肝癌在裸鼠体内的转移并未显著增加(P>0.05)。IGF-1R基因沉默后,裸鼠皮下移植瘤的成瘤率、原位肝癌接种模型中的肝癌移植瘤体积均显著减小(P<0.05)。同时,注射rhGH后,裸鼠肝癌移植瘤体积无明显增大(P>0.05)。对PI-3K信号通路的研究显示,rhGH能显著促进MHCC-97H肝癌细胞信号分子AKT磷酸化,IGF-1R沉默后AKT磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论:rhGH在体内具有显著促进荷瘤裸鼠体重增加及移植瘤生长的作用;但并不促进肝癌的转移。IGF-1R基因沉默后,rhGH对裸鼠移植瘤的成瘤和促生长作用明显减弱。而PI-3K信号通路在rhGH促肝癌生长中发挥重要的介导作用。
- 朱晨芳孙波钟强顾岩
- 关键词：重组人生长激素肝癌胰岛素样生长因子-1受体
- 构建RNA干扰真核表达载体抑制肝癌细胞IGF1R表达的研究被引量：2
- 2009年
- 目的构建胰岛素样生长因子-1受体(IGF1R)RNA干扰真核表达载体,探讨人肝癌细胞株MHCC-97H在IGF1R基因抑制前后黏附和侵袭能力的变化及相关信号分子的变化。方法以pGCsi-U6-Neo-GFP为空白质粒载体,以IGF1R为靶基因,按GeneBank IGF1R基因核苷酸序列和Tusch1设计原则,选择5对2条互补的带发夹结构的核苷酸序列,连接到pGCsi-U6-Neo-GFP空载体中。转化大肠杆菌Stable3,扩增后提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。转染模型细胞(293T),进行RT-PCR及Westernblotting检测,筛选出沉默效果最好的质粒载体。用脂质体转染MHCC-97H肝癌细胞,G418筛选并建立IGF1R基因沉默的MHCC-97H肝癌细胞株。检测MHCC-97H细胞株黏附和侵袭能力及FAK蛋白的表达变化。结果构建的IGF1R pGCsi-U6-Neo-GFP shRNA,经酶切和DNA测序证实与设计完全一致;RT-PCR及Western blotting检测发现IGF1R沉默效率达88%。MHCC-97H细胞IGF1R被沉默后黏附和侵袭能力下降,FAK蛋白表达下降。结论IGF1R pGCsi-U6-Neo-GFP shRNA能够降低MHCC-97H细胞黏附和侵袭能力并抑制FAK蛋白的表达。
- 朱晨芳钟强顾岩
- 关键词：胰岛素样生长因子-1受体RNA干扰真核表达载体肝癌FAK
- 重组人生长激素对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制被引量：3
- 2010年
- 目的探讨重组人生长激素(rhGH)对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制。方法以无血清培养液诱导肝癌细胞MHCC-97H凋亡,再以浓度为0μg/L(GH0组)、5μg/L(GH5组)、25μg/L(GH25组)、50μg/L(GH50组)、100μg/L(GH100组)和500μg/L(GH500组)的rhGH完全培养液进行培养,MTT法观察MHCC-97H细胞生长情况,流式细胞技术检测细胞凋亡率、细胞周期和细胞增殖指数,RT-PCR和Western blotting法分别检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达情况。结果与GH0组比较,GH25组、GH50组、GH100组和GH500组MHCC-97H细胞增殖明显,S期细胞百分比和细胞增殖指数显著增加(P<0.05);GH25组、GH50组和GH100组细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bax mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论 rhGH体外显著促进肝癌细胞MHCC-97H增殖,并通过调节凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达来抑制无血清培养液诱导的细胞凋亡。
- 朱晨芳钟强顾岩
- 关键词：重组人生长激素肝癌细胞凋亡BAXBCL-2
