- 重组人IL-6D24-PE40外毒素融合蛋白的构建及其生物学效应被引量：4
- 2001年
- 目的 构建重组人白细胞介素 6 绿脓杆菌外毒素融合蛋白IL 6D2 4 PE40 ,以选择性杀伤高表达IL 6受体 (IL 6R)的肿瘤细胞和白血病细胞。方法 采用重叠延伸的基因融合技术将N 末端缺失 2 4个氨基酸的重组人白细胞介素 6 (IL 6D2 4)cDNA与缺失细胞结合区的绿脓杆菌外毒素PE40基因进行融合 ,构建IL 6D2 4 PE40融合基因。利用HB10 1/pBV2 2 0表达系统 ,实现了IL 6D2 4 PE40融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达 ,经MonoQ柱进行层析纯化 ,采用MTS法检测细胞毒活性。结果 IL 6D2 4 PE40融合蛋白在大肠杆菌中的表达水平达到 40 %～ 6 0 %。包涵体蛋白经分离、复性及纯化得到纯度 >95 %的融合蛋白。Westernblot证明 ,纯化的融合蛋白与IL 6抗体及PEA抗体均发生特异性结合。细胞毒活性检测证实 ,IL 6D2 4 PE40融合蛋白能高度特异地选择性杀伤高表达IL 6R的U937细胞 ,ID50 约为 2 5 0ng/ml,而对不表达IL 6R的CEM细胞无杀伤作用。结论 IL 6D2 4 PE40融合蛋白能够选择性杀伤高表达IL 6R的靶细胞 ,有希望成为导向治疗高表达IL 6 /IL
- 郑黎燕奚永志孔繁华金荔陈兴国屠敏刘楠
- 关键词：基因克隆生物学效应
- 低分辨率和高分辨率HLA-Ⅱ类PCR-SSP基因分型在骨髓移植中的应用被引量：3
- 1999年
- 为满足临床骨髓移植对HLA配型的要求，本研究采用先进、快速的DNA提取方法和低分辨率与高分辨率HLA-ⅡPCR—SSP分型方法，对150例临床骨髓移植供、受者进行HLA-Ⅱ类分型研究，并且对分型方法进行了改进，建立了随时间释放DNA聚合酶活性的分型方法。结果表明：DNA提取方法可以满足微量HLA-Ⅱ类DNA分型方法对DNA样本的要求，200μl全血DNA产量为4—12μg，A260／A280为1．7～1．9。低分辨率和高分辨率HLA-Ⅱ类PCR-SSP均具有良好稳定性、可靠性和准确性。低分辨率HLA-Ⅱ类PCR—SSP方法耗时1．5小时，适用于同胞兄弟姐妹间的骨髓移植配型。高分辨率HLA-Ⅱ类亚型PCR-SSP分型方法耗时2小时50分钟，适用于同胞兄弟姐妹间骨髓移植配型的特殊病例和无血缘关系骨髓移植供、受者间的配型。本研究的分型方法对于推动我国骨髓移植工作的开展和未来的发展均具有重要的意义。
- 郑黎燕孔繁华屠敏金荔陈兴国奚永志郭斯启刘楠
- 关键词：骨髓移植聚合酶链反应-序列特异性引物组织相容性
- 构建靶向杀伤白血病细胞的新型重组白细胞介素6D24-PE40KDEL融合蛋白被引量：9
- 2003年
- 目的 构建能高度特异地靶向杀伤高表达白细胞介素 6受体 (IL 6R)白血病细胞的新型重组IL6 PE4 0KDEL(绿脓杆菌外毒素 )融合蛋白。方法 通过定点诱变将绿脓杆菌外毒素PE4 0基因羧基端最后 5个氨基酸REDLK替换成内质网蛋白滞留序列 (KDEL) ,采用重叠延伸的基因融合技术将N 末端缺失 2 4个氨基酸的人IL6 (IL6D2 4 )cDNA与PE4 0KDEL基因进行重组融合构建 ,利用HB10 1/pBV2 2 0表达系统实现该新型重组IL6D2 4 PE4 0KDEL外毒素融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达 ,经MonoQ柱层析纯化后 ,以四甲基偶氮唑类似物 (MTS)法检测IL6D2 4 PE4 0KDEL的靶向杀伤活性。结果 构建的新型重组IL6D2 4 PE4 0KDEL融合蛋白在大肠杆菌中的表达水平达到 4 0 %左右 ;经包涵体分离、复性、变性及纯化所得该融合蛋白纯度 >95 % ;纯化的融合蛋白能与IL6抗体及绿脓杆菌外毒素A(PEA)抗体发生特异性结合 ;IL6D2 4 PE4 0KDEL融合蛋白能高度特异地选择性杀伤高表达IL6R的U937细胞 ,IC5 0约为 2 5 0ng/ml,而对不表达IL6R的人T淋巴白血病细胞系则无杀伤作用。结论 成功构建了具有靶向杀伤高表达IL6R白血病细胞的新型重组IL6D2 4 PE4 0KDEL融合蛋白 ,为深入地探索利用IL6 /IL6R系统介导靶向治疗高表达IL6R白血病奠定了坚实的基础。
- 郑黎燕奚永志孔繁华崔建武粱飞刘楠孙玉英郭斯启
- 关键词：白血病靶向治疗内质网细胞毒试验
- HL-60细胞中IL6基因的克隆及鉴定被引量：2
- 1999年
- 目的：为探索性构建重组人白细胞介素６－绿脓杆菌外毒素融合蛋白（ＩＬ６－ＰＥ４０）以选择性杀伤高表达ＩＬ６受体（ＩＬ６Ｒ）的白血病细胞，本研究试图从人急性早幼粒细胞白血病细胞株（ＨＬ－６０）中克隆Ｎ－末端缺失２４个氨基酸的人ＩＬ６基因（ＩＬ６ｃＤＮＡ）并构建含此基因的重组质粒。方法：根据ＩＬ６基因序列设计合成可扩增ＩＬ６ｃＤＮＡ的特异性引物；利用基因重组技术，构建含ＩＬ６基因的重组质粒ｐＵＣ－ＩＬ６。结果与结论：本文首次从ＨＬ－６０中扩增出预期４８０ｂｐ的ＩＬ６ｃＤＮＡ，将其克隆至ｐＵＣ１８质粒中，命名为ｐＵＣ－ＩＬ６，并经ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ双酶切电泳及序列分析鉴定加以确证，为进一步构建重组人ＩＬ６－ＰＥ４０奠定了坚实基础。
- 郑黎燕奚永志孔繁华鱼咏涛金荔陈兴国屠敏刘楠
- 关键词：白细胞介素6白血病HL-60细胞克隆融合蛋白
- 毒素蛋白PE40的基因克隆及序列分析被引量：5
- 1999年
- 细胞因子－受体介导的靶向杀伤作为导向治疗白血病与肿瘤的第二代新策略，是现代分子导向药物研究的最新领域之一。它是利用细胞因子与其受体的特异性结合来导向传递重组细胞因子－细菌外毒素融合蛋白以达到特异性杀伤高表达相应细胞因子受体的白血病及肿瘤细胞〔１～３〕...
- 郑黎燕奚永志孔繁华金荔陈兴国屠敏
- 关键词：白血病基因治疗基因克隆
- IL-6D_(24)- Linker-PE40重组毒素的分子生物学特性预测被引量：1
- 1999年
- 目的：探讨重组毒素ＩＬ６Ｄ２４ＬｉｎｋｅｒＰＥ４０融合蛋白及其接头设计的合理性。方法：应用核酸和蛋白质序列分析软件系统ＧＯＬＤＫＥＹ软件，对ＩＬ６Ｄ２４ＬｉｎｋｅｒＰＥ４０重组毒素融合蛋白的柔性、抗原性、亲水性、表位等分子生物学特性进行计算机模拟预测，并做Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析进行验证。结果：ＩＬ６Ｄ２４ＬｉｎｋｅｒＰＥ４０分别保留了ＩＬ６Ｄ２４和ＰＥ４０的表位特征，没有新的抗原表位出现，而且柔性接头处具有极低的抗原性。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明融合蛋白能分别与ＩＬ６和ＰＥＡ的单克隆抗体发生特异结合，这说明融合蛋白保留了ＩＬ６和ＰＥ４０的空间结构特征。
- 郑黎燕奚永志孔繁华陈兴国金荔屠敏刘楠
- 关键词：LINKER重组毒素
- 细胞因子-受体介导靶向杀伤白血病细胞的新策略
- 细胞因子－受体的特异性结合来靶向杀伤肿瘤是新一代导向杀伤策略。鉴于白血病细胞异常高地表达ＩＬ６／ＩＬ６Ｒ系统，而正常造血细胞几乎不表达抑或微量表达这一事实，他们开展了利用ＩＬ６／ＩＬ６Ｒ系统介导重组ＩＬ６－ＰＥ４０外毒素...
- 奚永志郑黎燕
- 关键词：金属蛋白酶
- 造血干细胞移植中HLA-Ⅱ类基因分型影响因素的探讨被引量：1
- 2000年
- 目的：为了准确地进行造血干细胞移植供－受体的ＨＬＡ－Ⅱ类配型，对ＨＬＡ－Ⅱ类基因分型实验的影响因素进行了探讨。方法：采用美国莱姆达公司提供的微量ＳＳＰ＾ＴＭＨＬＡ－Ⅱ类ＰＣＲ－ＳＳＰ分型试剂盒对４００例造血干细胞移植供－受体进行基因分型。结果：采用０．５％ＥＤＴＡ抗凝的血标本与肝素抗凝的血标本相比，前者的护增效果好。ＤＮＡ终浓度为２５～２００ｎｇ／ｕｌ，最佳浓度为１００ｎｇ／ｕｌ。
- 屠敏孔繁华奚永志孙玉英郑黎燕金荔刘楠陈兴国郭斯启张惠丽
- 关键词：基因分型造血干细胞移植
- 移植物抗宿主病发病机理的研究进展被引量：8
- 1997年
- 移植物抗宿主病(GVHD)是造血干细胞移植的主要并发症之一,是影响造血干细胞移植长期存活率的重要因素。目前认为造成GVHD组织损伤的首要介质是一种失调分泌的细胞因子网络——这就是有关GVHD发病机制的新学说“细胞因子风暴”学说。本文综述了在急性GVHD、慢性GVHD和同基因GVHD发病机理方面的最新研究进展。
- 郑黎燕
- 关键词：移植物抗宿主病发病机理骨髓移植
- HLA配型在肾移植中的作用被引量：3
- 1999年
- 近年来，许多研究中心的研究结果表明ＨＬＡ配型对肾移植的成功起着重要作用，适当延长冷缺血时间并不影响ＨＬＡ匹配好的肾脏的移植效果，ＨＬＡ匹配得好的分享肾比ＨＬＡ匹配得不好的肾存活期要长。ＨＬＡ配型对移植肾的早期存活和长期存活都有重要的影响。ＨＬＡ配型对肾移植结果的影响受病人的致敏性、供肾的质量。
- 郑黎燕
- 关键词：HLA配型肾移植存活
