邹文艺
- 作品数：23 被引量：71H指数：6
- 供职机构：安徽安科生物工程(集团)股份有限公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项安徽省自然科学基金安徽省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 一种去甲硫氨酸重组人干扰素-α2b的制备方法
- 本发明属于干扰素的制备领域，具体涉及一种去甲硫氨酸重组人干扰素-α2b的制备方法。本制备方法设计引物扩增甲硫氨酸氨基肽酶基因片段，将其克隆至表达质粒pACYCDuct-1中，获得重组表达质粒pACYCDuct-1-Met...
- 宋礼华邹文艺陈露露朱伍进王晨露
- 利用大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶去除重组人干扰素-α2b N端的起始甲硫氨酸被引量：1
- 2012年
- 目的构建重组大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶(re-MAP)的原核表达体系,并利用表达的reMAP切除重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)N末端的初始甲硫氨酸。方法将PCR扩增得到的大肠杆菌MAP基因克隆到表达载体质粒pACYCDuet-1中,并在宿主菌E.coli BL21中通过IPTG诱导进行可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot分析及活性检测后,通过两种方法作用rhIFN-α2b:①将纯化后reMAP和rhIFN-α2b在体外适当的缓冲液中作用;②构建reMAP和rhIFN-α2b的共表达体系,实现在细胞内对rhIFN-α2b进行作用,并对两种作用方式的结果进行比较。结果 reMAP和rhIFN-α2b均得到正确表达,酶活性检测结果表明reMAP具有水解N端甲硫氨酸的活性,两种方法作用后的rhIFN-α2b经氨基酸序列测定后显示N端起始甲硫氨酸均被切除,其中体内作用切除率>94%、体外作用切除率>96%。结论 reMAP可以用于rhIFN-α2b N末端的初始甲硫氨酸的切除。
- 王中安邹文艺刘磊范清林宋礼华
- 关键词：干扰素-Α2B基因表达大肠杆菌
- 重组人粒细胞集落刺激因子的表达、纯化以及PEG修饰被引量：4
- 2008年
- 重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)经大肠杆菌温度诱导表达后,其表达产物以包涵体形式存在,包涵体经过变性、复性和分离纯化等步骤处理后得到纯化的rhG-CSF。在一定的实验条件下用单甲氧基聚乙二醇活性酯(mPEG20k-NHS)对rhG-CSF进行化学修饰,所得修饰产物经分离纯化后获得PEG20K-rhG-CSF偶联物。与修饰前的rhG-CSF相比较,尽管修饰后的rhG-CSF体外生物学活性下降至修饰前的20%左右,但其在体内的作用时间能够得到显著的延长,药效有了明显提高。
- 张兵邹文艺戎隆富范清林宋礼华
- 关键词：重组人粒细胞集落刺激因子纯化生物学活性
- 重组人RGD-sTRAIL的表达、纯化及抗肿瘤活性研究被引量：3
- 2004年
- 利用PCR技术构建RGD短肽与人肿瘤坏死因子凋亡配体穴胞外区114～281雪的融合基因,将该DNA片段克隆到原核表达载体pET-11a中。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后可表达相对分子质量约为20000的目的蛋白,占菌体蛋白的20%左右,且大多数重组蛋白以不溶的包涵体形式存在。Western印迹表明目的蛋白具有人sTRAIL的抗原性。表达产物经变性、复性、离子交换层析和分子筛等步骤,可以得到纯度大于95%的RGD-sTRAIL重组蛋白。肿瘤细胞体外实验发现,纯化后的RGD-sTRAIL重组蛋白能明显抑制人肺癌细胞A549生长,并呈剂量依赖性。研究结果表明,通过复性,包涵体中的RGD-sTRAIL蛋白得到正确的折叠,并在体外具有杀伤肿瘤细胞的活性,从而为进一步研究体内靶向性杀伤肿瘤细胞奠定了基础。
- 赵丽红范清林邹文艺宋礼华
- 关键词：纯化细胞凋亡抗肿瘤活性
- 白芍等4种中草药混合提取液体外诱变和抗诱变性研究
- 1995年
- 白芍等４种中草药混合提取液体外诱变和抗诱变性研究佘素贞，孙美芳，魏凌珍，王家骥，徐德祥，王取南，余陈斌，王思宏，刘子坤，邹文艺，张云友本文报道对４种中草药水溶性混合提取液（复合Ａ）诱变性与抗诱变性实验结果。１材料和方法白芍、枸杞、决明子、淫羊藿４种中...
- 佘素贞孙美芳魏凌珍王家骥徐德祥王取南余陈斌王思宏刘子坤邹文艺张云友
- 关键词：抗诱变性体外诱变敌克松菌落数染色体畸变卫生毒理学
- 包涵体蛋白的层析复性技术研究进展被引量：6
- 2006年
- 包涵体蛋白的复性是生物工程下游技术中的一个重要难题。层析法用于蛋白质复性是一种较新的、适用于大多数蛋白的方法。其原理是将层析技术应用于蛋白质复性和纯化,使变性蛋白质在层析柱上重折叠为正确的空间构象,在洗脱的同时实现部分纯化。本文详细介绍了蛋白质在5种层析柱上的复性方法、原理、应用及研究的新进展,为层析法对蛋白质复性的进一步应用提供依据。
- 高飞范清林邹文艺宋礼华
- 关键词：包涵体蛋白质复性重折叠
- hTNFRII-Fc融合基因的克隆及在CHO细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 构建人肿瘤坏死因子受体II胞外区(TNFRII)和人免疫球蛋白(IgG1)Fc段的融合基因真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达融合蛋白hTNFRII-Fc。用全合成重叠延伸PCR方法克隆TNFRII胞外区的基因片段,再与(IgG1)Fc段拼接起来形成hTNFRII-Fc融合基因,经HindIII、EcoRI双酶切后插入至pEE14中构建pEE14-TNFRII-Fc真核表达载体,脂质体转染至CHO细胞中进行表达及鉴定。ELISA检测到转染hTNFRII-Fc基因的CHO细胞培养上清中含有hTNFRII-Fc蛋白,SDS-PAGE与Western-blot鉴定证实其为hTNFRII-Fc蛋白,为进一步研究该融合蛋白在CHO细胞稳定表达及应用于类风湿关节炎等自身免疫性疾病临床治疗奠定了一定的研究基础。
- 张玲范清林王参军邹文艺宋礼华
- 关键词：真核表达类风湿关节炎
- 重组人干扰素α-2b在大肠杆菌中分泌表达被引量：2
- 2011年
- 人干扰素α-2b原始基因在重组原核工程菌中表达量偏低,所以我们在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下,根据大肠杆菌密码子偏爱性使用定向突变技术对huIFNα-2b基因进行点突变。将大肠杆菌STⅡ信号肽基因与突变后huIFNα-2b基因融合并于信号肽5′端和huIFNα-2b基因3′端引入合适的酶切位点。融合基因克隆至载体pCSE,pET-22b和pPAK4L中,此3种载体分别含有组成型启动子、T7启动子和phoA启动子。融合基因在载体pCSE中表达量很低,其中约有50%的目标蛋白能够成功实现分泌。在E.coliBL21中,pET-22b经过IPTG诱导可以实现huIFNα-2b的高表达,但STⅡ信号肽不能被有效切除。含有phoA启动子的载体pPAK4L其在E.coliW3110中可以实现huIFNα-2b较高水平的分泌表达,经过低磷诱导其表达量最高可至20μg/mL(A550)菌液,约有30%的目标蛋白质信号肽能够被成功切除并分泌到胞间质中。
- 卢晨赵辉邹文艺范清林付永标宋礼华
- 关键词：人干扰素Α-2B分泌大肠杆菌
- 人sTRAIL基因的克隆、表达纯化及对人A549细胞的抗肿瘤活性作用被引量：9
- 2006年
- 目的人TRAIL基因胞外区片段(114-281氨基酸残基,sTRAIL)的克隆、表达、纯化及对人肺腺癌A549细胞的抗肿瘤活性研究。方法采用PCR技术从人胎盘和肺cD-NA文库中扩增出全长人TRAIL基因,克隆到pUC19质粒载体上进行测序。然后再采用PCR技术,以全长人TRAIL基因为模板,扩增出sTRAIL基因片段并定向克隆到pET-11 a表达载体中,转化大肠杆菌BL21进行表达。表达后的产物经变性、复性和分离纯化,纯化后的sTRAIL用结晶紫染色法和流式细胞仪法测定其对人肺癌细胞A549的细胞毒性作用。结果从人胎盘和肺cDNA文库中都能扩增出全长人TRAIL基因,经测序表明与已发表的人TRAIL基因序列一致。扩增出的人sTRAIL基因克隆到表达质粒载体pET-11a,经IPTG诱导表达,表达量占细菌全菌蛋白的50%,纯化后的sTRAIL纯度大于98%,结晶紫法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性作用的IC50为(24±5.2)μg.L-1,流式细胞仪法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性具有明显的效应-时间依赖关系。结论本实验成功地克隆了人sTRAIL基因并实现其高表达,摸索出包涵体sTRAIL的变性、复性及其纯化方法,纯化后的sTRAIL蛋白对人A549肺癌细胞具有明显的细胞毒性作用,为进一步研究其功能与临床应用奠定了基础。
- 范清林魏伟邹文艺宋礼华
- 关键词：克隆细胞毒性A549细胞
- 长效重组药物研究进展被引量：5
- 2008年
- 生物重组药物半衰期的长短显著影响药物在使用时的剂量以及治疗的效果,所以延长其在体内的生物半衰期,防止药物在体内迅速降解成为现在药物研究的重要方向之一。针对目前较为广泛使用的几种重组药物长效化方法,如定点突变、化学修饰、基因融合、药物剂型和给药方式的改变等,结合目前已经上市的和正在研发中的长效重组药物进行了综述。
- 张兵邹文艺范清林宋礼华
- 关键词：半衰期
