邓蕾
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科学研究基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 针对人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒的构建及其对人肝癌细胞生长的影响被引量：2
- 2009年
- 目的构建人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒,并观察其对肝癌细胞生长的影响。方法将目的片段亚克隆入慢病毒载体中,包装成病毒后感染人肝癌细胞,检测细胞IKKα、IKKβ的表达,并将感染细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况。结果目的片段被成功克隆入载体质粒。pLenti-GFP-IKKα-SiRNA慢病毒液感染的细胞中IKKα蛋白表达明显降低,pLenti-GFP-IKKβ-SiRNA慢病毒液感染的细胞中IKKβ蛋白表达明显降低。实验组裸鼠皮下肿瘤出现晚且生长缓慢。结论成功构建了针对人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒,包装成病毒后感染人肝癌细胞后能抑制其生长。
- 李俊孙倍成邓蕾张勇席力森高云王学浩
- 关键词：核糖核酸干扰肝癌
- 肝细胞肝癌中MTA1基因的表达及其与术后患者生存率及肿瘤复发率相关性研究被引量：3
- 2011年
- 目的:检测人类肝细胞肝癌(HCC)中转移相关基因1(MTA1)表达的水平,研究该基因是否与肝癌肝切除术后患者的生存率及肿瘤复发相关,是否可以作为判断预后的指标。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和免疫组织化学(IHC)的方法以人正常肝组织为对照,分别检测肝癌切除术后所得的肿瘤组织及相应的癌旁组织中MTA1的表达水平,通过Kaplan-Meier曲线研究不同MTA1表达水平与HCC患者生存率及复发率之间的关系。结果:MTA1在肝癌组织及癌旁肝硬化组织中的转录表达明显高于正常组织(P<0.01),同时,MTA1蛋白在肝癌组织及癌旁肝硬化组织中的表达也明显高于正常组织(P<0.01)。通过Kaplan-Meier曲线及Log-rank检验证明MTA1能够影响肿瘤的复发及患者的生存期。结论:MTA1可以作为判断肝癌肝切除术后肿瘤复发及患者生存率预测的指标。
- 邓蕾姜润秋殷爱红孙倍成
- 关键词：MTA1肝细胞肝癌生存率复发率
- 慢病毒载体介导的针对端粒酶的RNA干扰技术对HepG2细胞的体外效应
- 2009年
- 目的观察针对hTERT的siRNA对肝癌HepG2细胞的体外抑制效应。方法将逆转录表达载体中的针对hTERT的siRNA序列亚克隆至慢病毒表达载体pWPT-GFP中,经293T细胞包装,收集病毒上清,感染肝癌细胞株HepG2。采用半定量RT-PCR法、TRAP法及MTT法,分别检测hTERT基因表达、端粒酶活性、肿瘤细胞生长抑制情况等。结果限制性内切酶酶切分析表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的干扰RNA的慢病毒表达载体;以293T包装的重组慢病毒能够高效感染肝癌细胞,感染效率可达99%以上;在稳定表达pWPT-hTERT-siRNA的肝癌细胞中,hTERT mRNA表达水平、肿瘤细胞的体外增殖受到抑制。结论慢病毒介导的siRNA转染能明显抑制恶性肝癌细胞的生长。
- 张勇高云邓蕾席力森殷爱红王学浩孙倍成
- 关键词：RNA干扰逆转录病毒载体人端粒酶逆转录酶
- 慢病毒载体介导端粒酶逆转录酶小干扰RNA治疗肝癌的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨慢病毒介导的端粒酶逆转录酶（hTERT）小干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞生长的影响。方法构建携带hTERTsiRNA的慢病毒表达载体，在体外转染人肝癌HepG2细胞系，以MTr法测定细胞生长变化，半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测hTERTmRNA的表达。将转染hTERTsiRNA的HepG2细胞，接种于裸鼠腋窝皮下，观察移植瘤生长情况。取移植瘤组织，常规HE染色，行组织学观察，应用原位末端标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡情况。结果hTERTsiRNA转染HepG2细胞后，随着时问的延长，对细胞增殖的抑制作用逐渐增强，到第8天，于扰组细胞抑制率为57．5％，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。RT—PCR产物凝胶电泳图显示，hTERTsiRNA转染后，肿瘤细胞的端粒酶活性明显下降。转染后72h，干扰组hTERTmRNA的表达水平为0．035±0．007，明显低于空载体对照组（0．151±0．016）和空白对照组（0．155±0．014，均P〈0．01）。转染细胞皮下接种后，干扰组的肿瘤生长速度明显慢于两个对照组，随着时间的延长，差异越来越明显。移植瘤组织常规HE染色显示，组织坏死增多，周围炎性细胞浸润。TUNEL检测结果显示，细胞凋亡增多，增殖减慢。结论慢病毒介导的hTERTsiRNA转染能明显抑制肝癌细胞的生长。
- 张勇高云席力森邓蕾殷爱红王学浩孙倍成
- 关键词：端粒酶逆转录酶RNA干扰慢病毒
- 人膜连蛋白A2基因重组慢病毒载体的构建及其在肝癌细胞株中的表达
- 2011年
- 目的:构建重组慢病毒载体pWPT-ANXA2-Flag,并检测其在小鼠肝癌细胞系Hepa 1-6的表达情况。方法:利用DNA重组技术将人膜连蛋白A2(annexin A2,ANXA2)基因克隆入慢病毒表达载体pWPT中,通过酶切、测序验证后,将重组慢病毒载体pWPT-ANXA2-Flag与包装质粒pCMV-dR8.91、pCMV-VSV-G共转染人胚肾上皮细胞株293T,包装重组慢病毒LV-ANXA2-Flag,并感染小鼠肝癌细胞株Hepa 1-6,用RT-PCR检测ANXA2 mRNA转录水平,Western blot法检测ANXA2-Flag蛋白的表达情况,应用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:经酶切及测序结果证实,构建了重组慢病毒载体pWPT-ANXA2-Flag;RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染Hepa 1-6细胞后,ANXA2基因能够在细胞内正确的转录、翻译并稳定表达ANXA2蛋白;经过LV-ANXA2-Flag感染后,Hepa 1-6细胞S期细胞比例明显高于对照细胞。结论:成功建立ANXA2基因慢病毒表达载体pWPT-ANXA2-Flag,包装的慢病毒能够成功感染小鼠肝癌细胞系Hepa 1-6,并使ANXA2基因得以稳定表达,并通过ANXA2促进肿瘤细胞增殖。
- 杨东昌母小新刘巧玉邓蕾陈云孙倍成
- 关键词：慢病毒载体肝癌
- 慢病毒载体携带siRNAs对乙型肝炎病毒抑制作用的体内研究被引量：1
- 2009年
- 目的:建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染动物模型,在此基础上观察慢病毒载体携带小干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs)对乙型肝炎病毒(HBV)复制和表达的影响。方法:36只Balb/c小鼠随机等分为3组(n=12):①空白对照组(NC组):通过尾静脉注射pTHBV2(包含HBV全基因组真核表达质粒),建立小鼠急性HBV感染模型;②干扰组(E组):将pTHBV2与pWPT-HBV-siRNA1(携带靶向HBVS区的siRNA1的慢病毒)通过尾静脉共注射小鼠;③无关干扰组(I组):pTHBV2和pWPT-HBV-siRNA2(携带非靶向HBV的无关siRNA2的慢病毒)通过尾静脉共注射小鼠。于注射后第4天和第7天取小鼠血清和肝脏组织。采用ELISA法检测血清中HBsAg(HBV表面抗原);选择逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测肝组织HBVS-mRNA水平;用免疫组织化学法检测肝组织HBcAg(HBV核心抗原)和HBsAg。结果:与NC组比较,E组小鼠血清中HBsAg水平在第4和第7天分别下降89.76%和94.81%(P<0.01);RT-PCR结果提示E组肝组织HBVS-mRNA水平明显降低(P<0.05);免疫组织化学法检测结果显示E组肝组织HBcAg﹑HBsAg阳性细胞数明显减少(P<0.05)。I组与NC组比较,上述检测指标无统计学差异(P>0.05)。结论:慢病毒载体携带siRNAs能够显著抑制小鼠体内HBV的复制和表达,并且抑制作用在第7天较第4天更强,没有减弱的趋势。
- 席力森邓蕾张勇高云王学浩孙倍成
- 关键词：小干扰RNA慢病毒载体肝炎病毒乙型
