邓莉
- 作品数：24 被引量：46H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7的原核表达、纯化及抗凝活性鉴定被引量：6
- 2007年
- 目的在大肠杆菌中表达十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7并鉴定抗凝活性。方法运用RT-PCR扩增十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7成熟蛋白及其组成肽段AduNAP7A、AduNAP7B的编码序列;将编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a及pICET32,构建重组表达质粒;成功构建的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;用镍亲和层析一步纯化融合有硫氧还蛋白(Trx)的目的蛋白;先后用几丁质亲和层析及镍亲和层析两个步骤纯化自切割后带6×his-tag的目的蛋白;用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测纯化表达产物的体外抗凝活性。结果获得AduNAP7、AduNAP7A及AduNAP7B的编码序列并成功构建了原核表达重组质粒;AduNAP7、AduNAP7A及Adu-NAP7B均在大肠中得到了高效可溶表达,纯化产物具有一定抗凝活性,它们延长aPTT比延长PT更有效。AduNAP7B的抗凝活性显著强于AduNAP7及AduNAP7A。结论AduNAP7具有较强抗凝活性,但显著弱于AcAP5、AcaNAP7及AcAPc2。AduNAP7的抗凝效应可能利于钩虫在人体内的吸血寄生生活,其抗凝作用机制有待进一步研究。
- 彭礼飞邓莉杨陈胡晶晶甘伟琼吴亚敏付汉维
- 关键词：十二指肠钩虫原核表达纯化抗凝活性
- Trx-NAP 5融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性检测被引量：2
- 2007年
- 目的:用大肠杆菌表达获得重组线虫抗凝血肽5(rNAP 5),为研究开发NAP5的功能与应用提供原料来源。方法:将扩增的NAP5基因经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后与表达载体pET-32a连接。构建好的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,分别经IPTG和乳糖诱导表达,并探讨诱导表达条件,分析表达产物的可溶性情况。表达产物经镍亲和纯化后,用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测体外抗凝活性。结果:成功构建了pET-32a/NAP5表达载体,IPTG和乳糖均能诱导目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地可溶性表达。优化条件下每升LB培养基可获可溶性目的融合蛋白量达65.3mg。纯化的蛋白能明显延长PT及aPTT,7.0mg/L的蛋白平均约延长5.09倍aPTT,2.55倍PT。结论:在大肠杆菌中成功表达了具有很好生物活性的Trx-NAP5融合蛋白,为研究开发NAP5的功能与应用奠定了基础。
- 吴亚敏邓莉彭礼飞杨陈胡晶晶付汉维
- 关键词：融合蛋白大肠杆菌
- 一种简便直观的实验动物血栓动态观察方法研究被引量：1
- 2015年
- 目的利用荧光素钠作为造影剂,建立一种简便、直观的大鼠血栓动态观察方法。方法 66只SD大鼠,雌雄各半,随机分为11组。3组大鼠经尾静脉分别注射荧光素钠2、1、0.5 mg/kg,确定合适荧光剂量;2组大鼠经尾静脉注射合适荧光素钠后,颈总动脉、下腔静脉连续照射1 h,观察荧光激发有无血栓形成;其余6组大鼠,分别为35%Fe Cl3诱导颈总动脉血栓模型组、下腔静脉血栓模型组、相应肝素钠组(520 U/kg)和假手术组。于荧光体视显微镜下观察记录血栓形成过程,并与血管称重和组织病理学观察结果相比较。结果 1 mg/kg剂量荧光钠用于实验效果较好。荧光连续激发1 h均没有引起明显的动静脉血栓形成。血栓模型组血栓形成呈时间依赖关系,而相应肝素钠组血栓明显减少,与血管称重和组织切片观察结果一致。结论荧光素钠作为造影剂,可用于实验动物血栓形成动态观察,并具有安全、简便、直观的优点。
- 司徒永立陈耀哲陈驹邵正邓莉彭礼飞
- 关键词：荧光素钠下腔静脉血栓肝素钠三氯化铁
- Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂IsKuI-1的原核表达、纯化及活性研究被引量：7
- 2014年
- 目的:原核表达并制备重组蜱kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂IsKuI-1,检测其抗凝血及抑制蛋白酶活性。方法:构建pET32a-sumo/IsKuI-1原核表达质粒,并转入到E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA亲和层析,在层析柱上用SUMO蛋白酶切割融合伴侣,纯化后得到重组目的多肽rIsKu I-1。用PT及a PTT法检测重组目的多肽的抗凝活性,发色底物法检测rIsKuI-1对丝氨酸蛋白酶的抑制活性。结果:用原核表达系统获得了rIsKu I-1,其无延长PT及aPTT活性,对人中性粒细胞弹性蛋白酶具有较好的抑制活性(IC50=1.83μM),且特异性强。结论:IsKuI-1是一种活性较好的人NE抑制剂。因此为进一步探讨rIsKuI-1的生物学功能及其作为新药开发应用奠定了基础。
- 崔宏娣邵正邓莉司徒永立彭礼飞
- 关键词：原核表达中性粒细胞弹性蛋白酶
- 人体寄生虫学教学方法改革的探讨被引量：7
- 2011年
- 鉴于当前医学高等教育的发展趋势和人体寄生虫学教学中遇到的问题,从多方面探讨了对教学方法的改革,以期增加学生学习的主动性,提高教学质量,提升学生综合素质。
- 邓莉何庆丰彭礼飞
- 关键词：人体寄生虫学教学方法
- 十二指肠钩虫天冬氨酸蛋白酶抑制剂的克隆与表达被引量：1
- 2009年
- 目的克隆并表达十二指肠钩虫天冬氨酸蛋白酶抑制剂(Ad-API-1)。方法根据犬钩虫及锡兰钩虫API保守序列设计引物,RT-PCR扩增获得Ad-API-1完整阅读框序列,并将Ad-API-1成熟肽编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a,以构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,用Ni亲和层析进行纯化。结果成功克隆获得Ad-API-1完整阅读框序列;构建了pET32a/Ad-API-1重组质粒,Ad-API-1在大肠杆菌中得到了高效表达。结论成功克隆并表达Ad-API-1,为进一步研究Ad-API-1的功能,探讨其作为血清学诊断抗原或保护性疫苗奠定了基础。
- 张振林邓莉杨陈彭礼飞
- 关键词：十二指肠钩虫克隆
- 十二指肠钩虫热休克蛋白HSP60基因的克隆及重组表达
- 2013年
- 目的克隆十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)基因,并在大肠埃希菌中表达获得重组AduHSP60蛋白。方法以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,PCR扩增AduHSP60基因。将获得的目的基因编码序列连接至原核表达载体pETHF,构建重组表达质粒pETHF/AduHSP60。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达、Ni-NTA亲和层析分离纯化重组蛋白,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达及纯化情况。结果成功扩增到AduHSP60全长编码序列,编码序列长度为1 701bp,编码566个氨基酸。构建了重组表达质粒pETHF/AduHSP60,经诱导表达、分离纯化获得了分子质量单位为60ku的可溶性重组AduHSP60蛋白。结论本研究从十二指肠钩虫中分离获得了HSP60基因,构建的pETHF/AduHSP60重组质粒能在大肠埃希菌中表达重组蛋白,为进一步研究AduHSP60的生物学功能奠定了基础。
- 许琴英邵正邓莉何庆丰彭礼飞
- 关键词：十二指肠钩虫热休克蛋白60克隆原核表达
- 蛋白酶3及其与疾病的关系研究进展被引量：5
- 2015年
- 蛋白酶3(proteinase 3,PR3)是中性粒细胞分泌的主要丝氨酸蛋白酶之一,其生物学功能广泛,不仅能降解多种组织蛋白,还可通过加工细胞因子、受体等调控炎症反应,与慢性炎症性疾病如血管炎性肉芽肿病、慢性阻塞性肺疾病、肺囊肿性纤维症的发生发展密切相关,可能作为疾病防治靶点.本文主要综述了PR3的生物学功能及其在疾病中的可能作用机制,期望为相关疾病的防治提供新的思路.
- 刘广花邓莉彭礼飞
- 关键词：蛋白酶3细胞因子炎症性疾病
- 棘阿米巴角膜炎患者分离株在不同环境中的形态观察被引量：1
- 2015年
- 目的观察棘阿米巴的形态学特点,为探讨棘阿米巴感染的诊断提供依据。方法以棘阿米巴角膜炎患者的送检材料为实验材料,置入不同条件中培养,观察其在不同的p H值（2、4、6、8、10）、温度（20、25、30、35℃）和加大肠埃希菌的条件下对棘阿米巴形态和活力的影响。结果棘阿米巴在不同的条件下形态呈多样性,酸性环境中以滋养体为主,而在碱性环境易形成包囊。p H=6,温度为25~30℃和加有大肠埃希菌的培养条件时,适合棘阿米巴生长,其中大部分的虫体为活动滋养体,并进行大量的繁殖。结论棘阿米巴在不同条件中存在滋养体和包囊转化过程,这为进一步研究其诊断及致病机制奠定了基础。
- 许琴英徐珠锦邵正邓莉
- 关键词：棘阿米巴滋养体包囊形态学
- 十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶AduGST-1基因的克隆和重组表达
- 2012年
- 目的克隆十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶(GST)AduGST-1基因,并在大肠埃希菌中表达获得重组AduGST-1。方法设计特异引物,以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,通过PCR扩增AduGST-1基因。将获得的AduGST-1编码序列克隆至原核表达载体pETHF,构建重组表达质粒pETHF/AduGST-1。重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达、Ni亲和层析分离纯化重组AduGST-1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达及纯化情况。结果成功扩增到AduGST-1全长编码序列,并登记到GenBank(accession no.JQ812812)。AduGST-1编码序列长度为624bp,编码307个氨基酸残基。成功构建了重组表达质粒pETHF/AduGST-1,在BL21(DE3)中表达并纯化了重组AduGST-1。结论首次报道从十二指肠钩虫中分离到GST基因,该基因可在大肠埃希菌中高效表达,并分离纯化了重组GST蛋白,为进一步研究AduGST-1功能与应用奠定了基础。
- 邵正何庆丰邓莉彭礼飞
- 关键词：十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶原核表达
