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大型多管水母的绿色荧光蛋白被引量：6: 2002年; 采用PCR扩增和southern杂交筛选相结合的方法 ,从厦门水域的大型多管水母中分离到了新的绿色荧光蛋白基因 gfpxm ,并在大肠杆菌中进行了表达 .gfpxmDNA序列编码区长为 1 0 4 2bp,包含 3个外显子和两个内含子 ,cDNA编码区全长为71 7bp .gfpxmcDNA与已知野生型Aeqgfp 1 0cDNA长度一致 ,核苷酸同源性为81 9% ,推导的氨基酸序列全长为 2 38个氨基酸 ,与AeqGFP1 0的氨基酸同源性为83 6 % .将 gfpxm克隆至pTO -T7表达载体 ,GFPxm在大肠杆菌BL2 1中的表达量达菌体总蛋白的 50 %左右 .荧光性质和强度分析结果表明 ,GFPxm蛋白的激发峰为 4 76nm ,发射峰为 4 96nm ,荧光量子产率为 1 GFPxm蛋白的荧光很稳定 ,对热、碱性。; 罗文新张军杨海杰谢小燕覃映雪逄淑强李少菁夏宁邵; 关键词：绿色荧光蛋白克隆表达荧光性质海洋生物

大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2多肽对恒河猴的免疫保护研究被引量：33: 2003年; 在大肠杆菌中表达的一段戊型肝炎病毒 (HEV)结构蛋白NE2 ,纯化后以弗氏佐剂 ,按0d ,1 0d ,30d的方案 1 0 μg 针的剂量免疫 3只恒河猴 ,在第 2周抗体阳转 ,第 6周时 1只滴度达 1∶1 0 0 0 0 0 ,另 2只滴度 1∶2 0 0 0 0 ,此时以 1 0 6PCR滴度的HEV病毒粪悬液攻击。对照组 3只均出现血清转氨酶 (ALT)升高 ,抗体阳转 ,粪便持续排毒 1月以上 ;疫苗组无一发病 ,未检出非疫苗来源的抗体 ,其中 1只始终未检出粪便排毒 ,另 2只仅出现短暂排毒。以一份NE2免疫后猴血清 (滴度 1∶2 0 0 0 0 )与 1 0 3PCR滴度的病毒混匀后感染 2只恒河猴 ,结果对照组 2只均持续排毒 3周以上 ,抗体阳转 ,1只ALT明显升高 ;而抗体中和组 2只猴始终未检出粪便排毒 ,抗NE2抗体缓慢下降 ,ALT正常。这些结果表明NE2具有良好的免疫原性和免疫保护性 ,有可能成为有效的戊肝疫苗。; 葛胜祥张军黄果勇逄淑强周开姣夏宁邵; 关键词：大肠杆菌戊型肝炎病毒恒河猴免疫保护

中国HTLV-Ⅰ env基因的克隆及Ⅰ+Ⅱ型嵌合基因的原核表达与抗原活性检测被引量：5: 2001年; 为尽快研制出国产HTLV抗体诊断试剂 ,首先从福建HTLV流行区 1名HTLV感染者外周血细胞中克隆出HTLV Ⅰ的全长膜基因 (env) ,继而结合文献报道、PSA软件的亲疏水性分析和EPI软件的B细胞表位分析数据 ,选择了gp46中段开始延伸至 gp2 1N端 2 12个氨基酸 (aa185～aa396 )的基因 ,并在 3′端通过 (GlySer) 2 与人工合成的HTLV Ⅱ型的型特异性表位区基因嵌合 ,插入原核表达载体 pRSET ,在 E .coli中得到了高效表达 ,目的蛋白产量约占菌体总蛋白的 30 %。通过Triton X10 0洗涤 ,低浓度尿素逐步变性处理 ,8mol/L尿素溶解后纯度在 75 %左右 ,经电泳洗脱纯化 ,最终纯度可达 95 %左右 ,纯蛋白得率约 40 %。经Westernblotting检测 ,该蛋白对 4份HTLV Ⅰ型和 2份HTLV Ⅱ型血清均有较强反应 ,而对 4份阴性血清无反应 ,从而有可能用于研制HTLV抗体诊断试剂盒。; 张军王颖彬徐颖潇逄淑强张国忠杨海杰夏宁邵; 关键词：人类T淋巴细胞白血病病毒原核表达抗原

一种带增强子的原核高效表达载体的构建及初步应用被引量：46: 2000年; 构建的 pTO T7大肠杆菌高效融合表达载体 ,调控序列中有一个Ω序列和一个T7启动子串联 ;多克隆位点 (MCS)包括 8个常用酶切位点 ;可进行融合表达或者非融合表达 ,根据不同的需要加以选择 ;融合蛋白N端为T7g10的 12个起始氨基酸 ,C端为His标签 ;含kan抗性基因作为选择标记。将增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因克隆至 pTO T7载体 ,在E .coli中的表达结果表明 ,融合EGFP达到菌体总蛋白量的 5 0 %以上 ,90 %以上的融合蛋白以可溶性形式存在 ,融合后的EGFP仍保持原有的荧光性质。与同时构建的不含Ω序列的 pT T7载体的表达产量的比较研究结果表明 ,Ω序列在 pTO T7载体中能显著提高表达效率。; 罗文新张军杨海杰李少伟谢小燕逄淑强李少菁夏宁邵; 关键词：增强子原核细胞

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逄淑强