赵勤
- 作品数：36 被引量：126H指数：6
- 供职机构：郑州大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省教育厅自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人DNA聚合酶β突变基因和对应蛋白
- 本发明提供了一种新的人基因核苷酸序列,尤其涉及人类修复基因DNA聚合酶β的cDNA序列,是DNA聚合酶β在食管癌中的特殊表现形式,它所编码的蛋白完全丧失DNA聚合酶β的DNA修复活性,它是一种分离出的DNA分子,以M－P...
- 董子明赵国强赵勤谭晓辉杨洪艳薛乐勋
- 文献传递
- RNA斑点印迹法检测人食管癌DNA聚合酶β的基因表达被引量：3
- 2003年
- 目的 :探讨人食管癌组织DNA聚合酶 β(polβ)RNA水平的表达。 方法 :提取 5 1例食管癌患者的手术标本组织 ,包括 :17例癌灶组织 ,17例癌旁组织 ,17例“正常”组织细胞总RNA ,以生物素标记的polβcDNA探针进行RNA斑点印迹。结果 :DNApolβRNA水平的表达癌组织高于癌旁组织 (P <0 .0 5 ) ,癌旁组织高于“正常”组织 (P <0 .0 5 ) ,癌组织高于“正常”组织 (P <0 .0 1)。结论 :人食管癌组织及癌旁组织的DNApolβ基因RNA水平表达显著高于“正常”组织 ,提示DNApolβ的过表达可能在食管癌的发生、发展中起 作用。
- 金戈张婷赵勤赵继敏吴景兰董子明
- 关键词：食管癌DNA聚合酶Β基因表达肿瘤发生
- 人野生型DNA聚合酶β在NIH3T3细胞中的定位
- 2005年
- 目的:研究人野生型DNA聚合酶β(wtDNApolβ)在NIH3T3细胞内的定位。方法:将携带人wtDNApolβ的真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-polβ,用脂质体介导的方法转染NIH3T3细胞株,用荧光倒置显微镜观察转染细胞,观察wtpEGFP-C3-polβ融合基因表达。以转染空质粒pEGFP-C3的NIH3T3细胞为对照。结果:转染细胞均有GFP表达,说明转染成功。转染pEGFP-C3-polβ的细胞胞核荧光强度较胞浆强,而空质粒转染细胞胞浆胞核荧光强度无差别。结论:wtDNApolβ在NIH3T3细胞中定位于胞核内。
- 赵军赵勤赵国强秦冰路静宋谦崔自由赵继敏杨红艳黄幼田汤黎明董子明
- 关键词：转染蛋白质定位NIH3T3细胞
- 胃癌组织中DNA聚合酶β基因突变检测被引量：4
- 2005年
- 目的:了解胃癌组织中DNA聚合酶β(polβ)基因的突变情况。方法:利用RT-PCR、单链构象多态性(SSCP)和序列分析对38例胃癌组织及其相应癌旁正常组织标本polβ基因进行检测。利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据,Chou&Fasman算法推测polβ氨基酸序列二级结构。结果:38例胃癌组织标本中SSCP异常9例(23.7%);而对应的癌旁正常组织均未见异常。polβ在低分化胃癌中的突变率达57.1%(8/14),而在中、高度分化胃癌中的突变率为4.2%(1/24),差异有统计学意义(P<0.05)。突变分别为196位A→G(28位Asn→Ser),268位A→G(52位Lys→Arg),790位A→T(226位Asp→Val)。其中196位A→G突变可导致polβ酶蛋白的二级结构明显改变。结果:胃癌组织中的polβ基因突变可能与胃癌的发生、发展有关。
- 赵国强何炜赵勤朱涵赵洁董子明
- 关键词：DNA聚合酶Β胃癌基因突变
- 食管正常、癌前及癌变组织中DNA聚合酶βmRNA检测被引量：5
- 2005年
- 目的:观察不同演进过程食管组织中DNA聚合酶β(polβ)mRNA的表达。方法:采用含有内对照的半定量RT-PCR方法,检测31例食管浸润癌(鳞癌27例,腺癌4例)、4例原位癌、6例不典型增生以及31例正常食管黏膜组织中polβmRNA的表达。结果:食管浸润癌、原位癌和不典型增生组织中polβmRNA的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),但均高于正常食管黏膜组织中的表达水平(P均<0.05)。食管鳞癌和腺癌组织中polβmR-NA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结果:在食管癌组织中存在着polβ的高表达,且发生于癌变早期。
- 赵国强王涛赵明耀何炜杨红艳王明臣汤黎明赵继敏赵勤董子明
- 关键词：DNA聚合酶Β食管肿瘤
- 人源细胞色素P450 2E1与细胞色素P450氧化还原酶的共表达被引量：2
- 2014年
- 目的利用大肠埃希菌(E.coli)表达系统异源表达细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1),并与细胞色素P450氧化还原酶(cytochrome P450 oxidoreductase,POR)实现共表达,使其具有代谢活性,为药物代谢的研究提供单一性的酶源。方法以人肝组织RNA为模板,RT-PCR扩增CYP2E1基因,插入pCW空载体,构建重组表达质粒pCW-2E1,转化E.coli DH5α,IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定;利用双启动子原理构建CYP2E1与POR共表达的重组质粒pCW-2E1-POR,采用对氨基苯酚法检测CYP2E1重组酶的代谢活性,并对不同培养时间(18、28、38 h)的代谢活性进行比较。结果质粒pCW-2E1经PCR鉴定,证明构建正确;表达的重组人CYP2E1蛋白相对分子质量约56 000,主要以可溶性形式表达。质粒pCW-2E1-POR经PCR及酶切鉴定,证明构建正确;导入质粒pCW-2E1-POR的重组菌提取的蛋白样品具有明显的代谢活性,培养18、28、38 h后,代谢活性均值分别为(0.195±0.004)、(0.189±0.003)和(0.192±0.004)nmol/(min·mg),差异无统计学意义(P>0.05),但与导入质粒pCW-2E1的重组菌提取的蛋白样品的代谢活性相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了具有代谢活性的CYP2E1重组酶,且3个培养时间段之间的代谢活性无明显差异。
- 徐彬彬张海风刘秀赵勤王俊平单杰
- 关键词：细胞色素P450原核细胞基因表达
- 盐酸多西环素对重组质粒pBI-EGFP-hHO-1表达的调控
- 2011年
- 目的构建Tet-off调控的血色素氧化酶-1(HO-1)真核表达载体pBI-EGFP-hHO-1,并确定盐酸多西环素对其表达的调控剂量。方法利用分子生物学技术,将hHO-1基因与质粒pBI-EGFP连接构成重组质粒。NheI和MluI双酶切鉴定后采用RT-PCR技术及免疫细胞化学的方法检测其在人肝癌细胞SMMC-7721中的表达情况。利用RT-PCR技术检测Tet-off和pBI-EGFP-hHO-1双转染后不同浓度盐酸多西环素对hHO-1基因mRNA表达量的影响,确定该四环素调控系统的盐酸多西环素诱导量。结果用NheI和MluI双酶切证明hHO-1成功克隆入应答质粒pBI-EGFP;RT-PCR、免疫细胞化学检测结果表明重组质粒在SMMC-7721细胞中表达;经RT-PCR检测显示当盐酸多西环素浓度≥2 000 ng/ml时,HO-1基因mRNA表达降低,与未转染组接近。结论成功构建了由Tet-off调控的真核表达载体pBI-EGFP-hHO-1,并确定盐酸多西环素对其调控剂量为2 000 ng/ml。
- 杨婧张海风王媛赵勤张新胜单杰
- 关键词：盐酸多西环素
- 酸性肽对阿尔茨海默病大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶水平的干预(英文)被引量：4
- 2005年
- 背景:有实验指出酸性肽可能是通过抑制一氧化氮等毒性化合物的生成而提高阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力。目的:建立阿尔茨海默病动物模型,观察给予不同剂量浓度的酸性肽治疗后大鼠脑一氧化氮、一氧化氮合酶与乙酰胆碱酯酶含量的变化。设计:随机对照单一实验。单位:郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室。材料:实验于2003-02/07在郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室的第二研究室和实验动物房完成。选取雄性SD大鼠100只,用跳台实验除去反应迟钝的动物,共84只大鼠纳入实验,随机分为7组:正常对照组,模型组,生理盐水组,吡拉西坦治疗组,酸性肽15,30,60mg/kg治疗组,12只/组。酸性肽为本课题组从牛脑中分离出的一个新的小分子肽,由三个谷氨酸连成的三肽。方法:除正常对照组外,其余各组大鼠常规饲养1周后,均采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术,脑海马注射5μg鹅膏蕈氨酸,以损毁大鼠双侧迈纳特基底核建立阿尔茨海默病模型。正常对照组和模型组不给药,生理盐水组用生理盐水灌胃,吡拉西坦治疗组用0.3g/kg吡拉西坦灌胃,酸性肽15,30,60mg/kg治疗组分别用15,30,60mg/kg酸性肽灌胃,连续20d,1次/d,2mL/次。灌胃期满将大鼠麻醉后断头处死,立即在冰盘中开颅取脑制备组织匀浆。4℃下1000r/min离心10min,取上清液用一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶检测试剂盒测定一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶的含量。主要观测指标:各组大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶的含量。结果:纳入实验的84只大鼠全部进入结果分析。各组大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶含量的比较:与模型组比较,酸性肽15,30,60mg/kg治疗组一氧化氮含量均明显降低[(1.95±0.20),(1.39±0.10),(1.25±0.07),(1.00±0.04)mmoL/kg,P<0.05];一氧�
- 安玉会寇现娟陈再蓉孟庆瑞张维娟郭茂峰单杰赵勤
- 关键词：一氧化氮一氧化氮合酶阿尔茨海默病
- 全反式维甲酸诱导的食管癌细胞DNA聚合酶β的表达被引量：2
- 2004年
- 目的 :了解食管癌细胞分化过程中DNA聚合酶 β(polβ)基因的表达。方法 :采用全反式维甲酸 (ATRA)诱导人食管癌Eca1 0 9细胞分化 ,应用甲基绿 派洛宁染色、原位杂交、免疫组化和Westernblot方法分别检测细胞分化和polβ基因的表达。 结果 :ATRA作用 5d后可以诱导Eca1 0 9细胞分化。wt polβ和mt polβ(截短的 )基因的表达随着Eca1 0 9细胞的分化而降低。结论 :ATRA可下调Eca1 0 9细胞wt polβ和mt polβ的表达 。
- 金戈赵继敏吴景兰杨红艳赵勤赵国强郑乃刚董子明
- 关键词：DNA聚合酶Β全反式维甲酸细胞分化
- 全反式维甲酸和二甲亚砜诱导人食管癌细胞wtp53基因的表达被引量：4
- 2006年
- 目的探讨野生型p53(wtp53)基因表达与食管癌细胞分化相关性。方法采用全反式维甲酸(ATRA)和二甲亚砜(DMSO)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用甲基绿-派洛宁染色、软琼脂集落形成、原位杂交方法分别检测细胞分化和wtp53的基因表达变化。结果ATRA和DMSO作用5d后可以抑制Eca109细胞增殖,诱导细胞分化及降低集落形成率。wtp53基因表达随着Eca109细胞分化而增高。结论ATRA和DMSO可上调Eca109细胞wtp53的表达使其趋向正常细胞分化。
- 金戈赵继敏杨洪艳黄幼田郑智敏赵国强赵勤吴景兰董子明
- 关键词：食管肿瘤全反式维甲酸二甲亚砜细胞分化
