皇甫罗锴
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- B7-H1在脑胶质瘤中对Treg细胞的调节作用
- 阐明肿瘤细胞表达B7-H1分子发挥免疫抑制作用与诱导Treg细胞产生的关系,从而进一步阐明B7-H1分子的肿瘤免疫抑制机理,探索干涉肿瘤细胞B7-H1分子对抑制肿瘤免疫逃逸的作用.B7-H1分子在肿瘤组织中的高表达，促进...
- 皇甫罗锴王曦郭张燕陈晓燕杨安钢张剑宁温伟红
- 关键词：脑胶质瘤免疫机制蛋白表达调节性T细胞
- 含B7-H1 shRNA基因的慢病毒表达载体的制备及其抑制效果鉴定
- 2013年
- 目的设计针对B7-H1的shRNA序列,构建慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后检测其对U251细胞中B7-H1基因的沉默效果。方法设计3对针对B7-H1 mRNA的shRNA,化学合成正义链和反义链,退火后与酶切后的pLKO.1载体进行连接。测序正确后包装成病毒并感染U251细胞,分别用qRT-PCR及Western blot法检测干扰效果。结果 qRT-PCR及Westernblot结果证实设计的3条RNA干扰序列中有2条可有效沉默U251细胞中B7-H1的表达。结论所制备的针对B7-H1的shR-NA慢病毒能特异性沉默B7-H1。
- 皇甫罗锴王曦郭张燕席文锦史圣甲杨帆陈晓燕杨安钢张剑宁温伟红
- 关键词：B7-H1SHRNA
- HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌,划线接种传代50次;通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Western blot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性。结果成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体,并在BL21大肠杆菌中诱导表达;革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Western blot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好,可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid。结论成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体,鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性,为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础。
- 席文锦彭红艳白文栋郑国旭史圣甲皇甫罗锴王曦贾林涛张英起杨安钢
- 关键词：原核表达
- hsa-miR-128慢病毒载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:构建含hsa-miR-128-1和hsa-miR-128-2前体的慢病毒表达载体,建立能够稳定表达目的基因的人胶质瘤U87细胞株。研究hsa-miR-128对胶质瘤细胞增殖的影响。方法:扩增hsa-miR-128前体片段,克隆入Pentr3c载体,利用LR clonaseⅡ酶将目的片段转接于Plenti6.3质粒,包装病毒,以改构的Plenti6.3-mCherry载体包装的病毒为对照,感染人胶质瘤U87细胞,通过Blasticidin筛选出能够稳定表达抗生素抗性的细胞株。荧光显微镜观察mCherry的荧光表达,实时荧光定量检测miR-128的表达量,流式细胞仪检测细胞周期,MTT检测细胞增殖。结果:成功构建重组慢病毒载体Plenti6.3-miR-128-1和Plenti6.3-miR-128-2,经Blasticidin筛选细胞株、mCherry荧光表达和实时荧光定量PCR验证,成功包装出慢病毒。病毒滴度测定在1.1×107-8.3×107TU/mL之间,细胞周期和MTT结果提示miR-128-1和miR-128-2高表达的U87细胞株均表现增殖抑制。结论:成功构建了分别含有两种hsa-miR-128前体的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达hsa-miR-128的U87细胞株。miR-128-1和miR-128-2均抑制胶质瘤U87细胞增殖。
- 方丹东李俊堂杨韬张雷鸣皇甫罗锴王曦张剑宁杨安钢
- 关键词：U87细胞细胞增殖
- 针对B7-H1的siRNA对脑胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:利用针对B7-H1的siRNA在脑胶质瘤U87细胞中下调B7-H1的表达,研究B7-H1的表达下调对U87细胞增殖和凋亡的影响。方法:根据人B7-H1的mRNA序列设计并合成两对针对B7-H1的siRNA,于转染前一天将U87细胞接种于10 cm细胞培养皿中,以转染时细胞融合度为50%-80%为宜,分别用250μl OPTI-MEM稀释15μl siRNA与15μl转染试剂Lipofectamine 2000,将两者混匀室温静置20 min后,滴入细胞培养皿中。转染60或72 h后利用流式细胞术检测B7-H1在细胞表面的表达情况,利用荧光定量PCR和Western Blot分别检测B7-H1的mRNA和蛋白质水平,并用MTT和流式细胞术检测B7-H1表达下调后,U87细胞增殖和凋亡的改变。结果:与阴性对照组相比,两对针对B7-H1的siRNA均可有效下调U87细胞中B7-H1的表达,流式细胞术结果显示与阴性对照组相比,B7-H1阳性表达率由53.2%分别下调至26.7%和20.6%;MTT结果显示B7-H1表达下调后U87细胞的增殖被显著抑制,培养第5天吸光度值由0.58±0.02分别下降至0.451±0.02及0.342±0.016;流式细胞术结果显示B7-H1表达下调后U87细胞凋亡明显,早期凋亡率由0.1%分别增加至12.8%及13.2%。结论:B7-H1的表达下调可有效抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖,并促进细胞凋亡,提示B7-H1可能作为脑胶质瘤基因治疗的一个潜在靶点。
- 王曦皇甫罗锴杨帆史圣甲郭张燕杨安钢温伟红张剑宁
- 关键词：B7-H1RNAIU87细胞脑胶质瘤
- B7-H1在脑胶质瘤中对Treg细胞的调节作用
- 肿瘤是当今社会严重威胁人类健康的最主要疾病之一，寻找治疗肿瘤的有效方法是医学工作者的一个非常重要的课题。由于肿瘤组织存在主动的免疫逃逸机制，因此目前的多种免疫治疗方法效果并不明显。肿瘤细胞针对机体的抗肿瘤免疫，采取多种方...
- 皇甫罗锴
- 关键词：B7-H1TREG细胞共培养
- 文献传递
