王震 作品数:9 被引量:46 H指数:3 供职机构: 复旦大学上海医学院病理学系 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
大鼠肺细小动脉和大动脉平滑肌细胞的分离培养及其增殖特性比较 被引量:1 2008年 肺动脉高压(PAH)主要组织病理学改变在肺细小动脉,尤其是肌性细小动脉内膜-中膜的肥厚、无肌细小动脉的肌化,在PAH的发生发展过程中起着重要作用。但引起PAH中肺细小动脉改变的病理学机制尚不明确,而又因实验大鼠肺细小动脉难以定位和取材,使大鼠肺细小动脉平滑肌细胞(RPMC)不易分离和培养, 黄海琼 王震 姜桢 陈灏珠关键词:肺细小动脉 实验大鼠 组织病理学改变 肺动脉高压 NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响 被引量:33 2006年 目的探讨NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响。方法免疫组织化学SP法、即时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测10例新鲜乳腺浸润性导管癌和27例石蜡包埋乳腺癌组织中NDRG1蛋白和mRNA的表达。脂质体介导NDRG1基因瞬时转染高侵袭高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231;用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入法、流式细胞术观察NDRG1基因转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;细胞体外侵袭实验和迁移实验观察转染后细胞侵袭和迁移能力的变化。结果NDRG1蛋白和mRNA表达分别为:无转移的乳腺癌组织阳性率为100%(14/14)和0·82±0·14,而有转移的乳腺癌组织中为69·2%(9/13)和0·17±0·11,均明显降低;对两株细胞的检测中,高侵袭高转移的MDA-MB-231细胞株中NDRG1mRNA的表达水平(0·14±0·02)明显低于低侵袭低转移的MCF7细胞株(1·51±0·11)。NDRG1基因瞬时转染MDA-MB-231细胞后,与未转染组和pEGFP-N3组相比,pEGFP-NDRG1-N3转染组中,细胞BrdU掺入率降低,细胞周期G0/G1期比例增高,S期比例明显减低;同时细胞体外侵袭能力下降,而体外迁移能力则差异无统计学意义。结论NDRG1基因的表达与乳腺癌的转移呈负相关关系,提示该基因可望成为早期预测乳腺癌转移的分子生物学标记物之一;NDRG1基因通过脂质体转染高侵袭高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,可抑制肿瘤细胞增殖、降低其侵袭能力,提示其可作为一个候选的肿瘤转移抑制基因,并有望成为乳腺癌基因治疗的新的候选基因。 王震 刘乾 陈琦 朱荣 朱虹光关键词:转染 瞬时转染SARS-CoVM基因对大鼠肺成纤维细胞生长特性及生物学功能的影响 2005年 目的通过观察转染SARS-CoV M基因的大鼠肺间质成纤维细胞(fibrob last,FB)生长及功能的改变,初步探讨SARS病毒通过肺组织损伤而引发肺纤维化的可能机制和途径。方法碱裂解法扩增纯化质粒,酶消化法分离大鼠肺间质成纤维细胞;采用脂质体介导的方法瞬时转染M基因入FB;采用RT-PCR法和W estern b lot鉴定转染结果;四唑盐(MTT)比色法和流式细胞技术(FCM)检测转染后的大鼠肺成纤维细胞的生长情况;采用半定量RT-PCR和Realtim e PCR检测转染后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因转录水平的变化。结果与转染空载体的成纤维细胞相比,转染M基因的成纤维细胞在转染48 h时生长明显增强,G0/G1期比例下降,S期比例增高;转染M基因后MMP-2的转录明显增强。结论成功地将携带有M基因的真核表达质粒瞬时转染入大鼠肺间质成纤维细胞,目的基因在肺间质成纤维细胞中表达并具有与SARS-CoV M相似的抗原性;SARS-CoV M蛋白可能促进肺间质成纤维细胞生长;并促进MMP-2的表达。 刘乾 陈琦 蒋涛 王震 闫明霞 许祖德关键词:瞬时转染 基质金属蛋白酶-2 肺纤维化 乙型肝炎病毒X基因的变异与原位病毒抗原的表达及病毒复制的相关性研究 目的探讨慢性乙型患者肝组织内 HBV X基因部分区段的变异与原位病毒抗原的表达及肝内病毒复制的关系。方法以83例慢性乙型肝炎肝穿刺活检标本作为研究对象,20例HBV 相关性肝细胞癌作为对照;免疫组化二步法显示肝组织内HB... 朱荣 王震 张慧萍 黄海 凌玉琴 胡锡琪 翟为溶 王吉耀 朱虹光关键词:肝炎 乙型 病毒 X基因 文献传递 NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响 目的探讨NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响。方法采用免疫组化、实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测人乳腺癌组织中NDRG1蛋白和mRNA的表达。脂... 王震 刘乾 陈琦 朱荣 朱虹光关键词:乳腺癌 NDRG1 转染 文献传递 caveolin-1对喉鳞状细胞癌生物学特性的影响 被引量:8 2007年 目的探讨细胞质膜微囊蛋白-1(caveolin-1)对喉鳞状细胞癌生物学特征的影响。方法构建caveolin-1真核表达质粒,用脂质体法转染喉鳞癌细胞株HEp2细胞,筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆,并用实时荧光定量PCR和免疫印迹法鉴定。MMT法用于检测细胞的生长能力,软琼脂克隆形成实验用于检测细胞锚定非依赖性生长能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,免疫印迹法检测表皮生长因子受体(EGFR)和细胞外信号调节激酶(Erk1/2)的磷酸化水平,用激光共聚焦显微镜观察caveolin-1和EGFR的共定位。结果成功构建了caveolin-1真核表达质粒,转染HEp2细胞后筛选得到3株稳定高表达caveolin-1的克隆。与对照组相比,转染后的细胞生长速度明显减慢,软琼脂中克隆形成能力明显下降。流式细胞仪结果显示,高表达caveolin-1可使细胞阻滞在G0/G1期,并且促进细胞的凋亡。激光共聚焦显微镜观察显示,caveolin-1与EGFR共定位于细胞膜。免疫印迹检测显示,caveolin-1能降低EGFR和Erk1/2的磷酸化水平。结论caveolin-1能够抑制喉鳞癌细胞株HEp2的生长,并促进其凋亡;对EGFR-MAPK信号通路的负性调节可能在其抑癌机制中发挥重要作用。 顾栋桦 唐峰 王震 李华 陈琦 朱虹光关键词:喉肿瘤 细胞质膜微囊蛋白 表皮生长因子受体 细胞外信号调节激酶 Caveolin-1对喉鳞状细胞癌抑制作用的体内外研究 被引量:2 2007年 目的探讨 caveolin-1对喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞生长的影响。方法通过脂质体法转染喉鳞癌细胞株 Hep-2细胞,筛选出稳定高表达 caveolin-1的克隆,并用实时定量逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定;用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的体外增殖能力;免疫印迹法检测细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷酸化 EGFR、细胞外信号调节激酶1、2(extracellular signal-regulated kinase,Erk1、2)、磷酸化 Erk1、2,caveolin-1蛋白的表达;免疫共沉淀法检测 caveolin-1和 EGFR 的结合情况;转染后的细胞接种至裸鼠皮下,观察肿瘤的生长情况,裸鼠移植瘤中caveolin-1、磷酸化 EGFR、磷酸化 Erk1、2的蛋白表达用免疫组织化学法检测。结果成功筛选到稳定高表达 caveolin-1的克隆;与对照组相比,转染后的细胞体外增殖能力明显减弱;细胞接种到裸鼠皮下,未转染组和转染卒载组中裸鼠均形成肿瘤(100%,4/4),稳定转染 caveolin-1的 Hep-2-CAV1-2组中裸鼠未形成实体肿瘤(0%,0/4),Hep-2-CAV1-3组中4只裸鼠中只有3只形成肿瘤(75%,3/4),但肿瘤生长缓慢,最终生成肿瘤的重量与未转染组相比明显减小(t=3.05,p<0.05);免疫共沉淀显示caveolin-1与 EGFR 在 Hep-2细胞中是结合的;免疫印迹法和免疫组织化学法发现转染 caveolin-1后细胞中 EGFR 和 Erk1、2的磷酸化水平降低。结论 caveolin-1能够抑制喉鳞状细胞癌细胞株 Hep-2的生长,抑制 EGFR-MAPK 信号通路可能与其抑癌作用相关。 顾栋桦 李华 王震 陈琦 朱虹光关键词:喉肿瘤 基因表达 表皮生长因子受体 内皮素1过表达经Akt/PKB信号通路抑制大鼠肺细小动脉平滑肌细胞凋亡的体外研究 被引量:3 2008年 目的探讨过表达内皮素1(ET-1)对体外培养的大鼠肺细小动脉平滑肌细胞(RPMC)凋亡的影响及其作用机制。方法采用组织灌注法体外分离和培养原代RPMC,经免疫荧光法和电镜鉴定后,脂质体法瞬时转染ET-1基因,用流式细胞技术检测细胞周期和凋亡,免疫印迹法检测丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt/PKB)的磷酸化水平和剪切的半胱天冬酶-3(Caspase-3)的表达。结果成功分离和培养出原代RPMC,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测显示,RPMC中ETA受体mRNA表达水平明显高于ETB受体。瞬时转染ET-1基因48h后,流式细胞仪结果显示,与空载相比,RPMC的凋亡明显下降。免疫印迹法检测显示,过表达ET-1后,Akt/PKB的磷酸化水平升高,剪切的Caspase-3的表达水平下降。结论过表达ET-1可能主要通过ETA受体,并经Akt/PKB-Caspase-3信号通路抑制RPMC的凋亡,从而在肺动脉高压的血管重塑过程中发挥重要作用。 黄海琼 王震 姜桢 陈灏珠关键词:肺性 肌细胞 平滑肌 内皮缩血管肽1 细胞凋亡 瞬时转染SARS-Cov M基因对大鼠肺成纤维细胞生长及功能的影响 目的通过观察转染SARS-Cov M基因的大鼠肺成纤维细胞生长及功能的改变,初步探讨SARS病毒通过肺组织损伤而引发肺纤维化的可能机制和途径。方法碱裂解法扩增纯化质粒,酶消化法分离大鼠肺成纤维细胞(Fb),采用脂质体介导... 刘乾 陈琦 蒋涛 王震 闫明霞 许祖德文献传递