王行国
- 作品数：41 被引量：59H指数：4
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- 土壤假单胞菌593使用Pcs途径合成磷酯酰胆碱
- 2011年
- 【目的】原核生物有两条代谢途径N-甲基化途径(Pmt途径)和磷脂酰胆碱合酶途径(Pcs途径)合成磷脂酰胆碱(PC)。本文对土壤细菌Pseudomonas sp.593的磷脂酰胆碱合成进行了研究,试图弄清楚假单胞菌的磷脂酰胆碱的合成途径。【方法】通过氨基酸序列比较,获得已报道的磷脂酰胆碱合酶(Pcs)的氨基酸保守序列,并设计简并引物,从Pseudomonas sp.593总DNA中PCR扩增出磷脂酰胆碱合酶基因(pcs)的片段,然后用扩增的DNA片段作探针,对Pseudomonas sp.593基因组DNA亚克隆文库进行菌落原位杂交,获得pcs全基因序列;利用同源重组原理进行活体突变,获得Pseudomonas sp.593 pcs-突变体;采用薄层层析(TLC)法分析细菌总磷脂,检测PC含量以及pcs基因活性。【结果】TLC分析显示Pseudomonas sp.593细菌仅在添加外源胆碱的M9或LB培养基中生长时才合成PC;从Pseudomonas sp.593细菌中克隆出894 bp的DNA序列,编码的蛋白具有磷脂酰胆碱合酶活性;活体缺失pcs基因后,Pseudomonas sp.593 pcs-突变体在添加或不添加胆碱的条件下都不能合成PC。【结论】Pcs途径是土壤Pseudomonas sp.593乃至其它假单胞菌合成磷脂酰胆碱的唯一途径。
- 熊敏吴彬何火光李洋王行国
- 同源重组法敲除酵母snoRNA基因的初步探讨被引量：1
- 2007年
- 以3个粟酒裂殖酵母核仁小RNA为对象,通过同源重组法构建相应的基因缺失株.并对影响同源重组效率的因素进行分析.结果显示:载体骨架的切除可以显著提高同源重组效率;增加两侧同源片段的长度也能提高同源重组效率;另外,利用粟酒裂殖酵母野生型单倍体菌株进行snoRNA基因敲除是可行的.
- 李昌瑜胡赛阳王行国瞿国胜
- 关键词：基因缺失同源重组粟酒裂殖酵母
- 细菌磷脂酰胆碱的生物学功能
- 本文首先阐述了磷脂酰胆碱在细菌中的分布。其次，主要阐述了细菌磷脂酞胆碱的生物合成途径包括：磷脂N-甲基化途径、磷脂酰胆碱合成途径、Pcs合成途径在细菌中的分布。最后，就PC的分子特征、PC影响细菌的致病性、PC影响细菌细...
- 王行国
- 关键词：细菌磷脂酰胆碱生物学功能
- 文献传递
- 磷脂酰胆碱PC在原核生物中的表达对抗菌肽作用的影响
- 抗微生物多肽(AMP)是动物先天性防御微生物入侵的重要武器。虽然不同的抗微生物多肽的杀菌机制不同,但都涉及到与细菌细胞膜的相互作用,裂解细胞膜或扰乱生物膜的正常功能而导致细菌死亡。抗微生物多肽只作用于微生物细胞膜,而不破...
- 蔡雪丽李洋王行国
- 关键词：磷脂酰胆碱TLC
- MG-132诱导宫颈癌细胞表达HPV病毒蛋白E6和E7被引量：1
- 2008年
- 使用不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理宫颈癌细胞系CaSki和HeLa S3细胞,WesternBlot检测发现2-5 mg/L MG-132 37℃处理3 h明显增强CaSki细胞中人类乳头瘤病毒HPV E6和E7蛋白的表达量,增加MG-132浓度或延长处理时间并未见E6和E7蛋白量的增加.用相同的方法处理HeLa S3细胞,也观察到HPV E7蛋白的增加.XTT活细胞分析和台盼蓝死细胞检测显示2 mg/L MG-132处理癌细胞3 h,其细胞死亡率10%.这一发现将有可能协助提高以E6、E7蛋白作靶位点的生物导弹疗法的效果.
- 赵琼李洋王行国
- 关键词：宫颈癌细胞HPVMG-132
- 活体内磷脂酰胆碱替代磷脂酰乙醇胺影响E.coli细胞的功能
- 2010年
- 【目的】通过磷脂酰胆碱(PC)阳性大肠杆菌菌株与磷脂酰乙醇胺(PE)阳性野生型和PE阴性突变型菌株比较,并用PC+PE+双阳性菌株佐证,从细菌形态、生理生化以及巨噬细胞对细菌的吞噬作用等方面探讨活体内磷脂酰胆碱能否替代磷脂酰乙醇胺。【方法】光学和电子显微镜观察细菌形态和结构;不同条件培养细菌并使用分光光度计测定OD600值,评估细菌的生长情况;使用SDS-PAGE和2-D电泳法测定细菌间质蛋白组分;用小鼠RAW264.7巨噬细胞系检测细菌的粘附和吞噬作用。【结果】与短棒状的PE+野生型细菌AD93/pDD72相比,PC+细菌AD93/ptac67中仍有25%丝状体;与PE-突变体AD93一样,PC+细菌AD93/ptac67仍需要添加二价离子Mg2+或Ca2+才能生长;与野生型AD93/pDD72相比,PC+细菌AD93/ptac67的周质蛋白组分、粘附率与相对吞噬效率呈现明显的差异;与野生型细菌Top10/ptac85相比,PE+PC+双阳性细菌Top10/ptac66的细胞壁外层、抗逆性和周质蛋白组分也显示差别。【结论】在活体内,膜磷脂中PC替代PE不能使PE-突变体细胞的功能完全恢复至野生型状态,PE和PC在功能上存在明显的差别,两者在功能上不能相互替代。
- 吴彬叶青李洋李昌瑜喻雪婧周舒王行国
- 关键词：磷脂酰胆碱磷脂酰乙醇胺大肠杆菌
- 假单胞菌593(Pseudomonas sp．593)漆酶基因的克隆
- 漆酶是自然界广泛分布的多铜氧化酶家族中的一个成员,它为生物技术所广泛关注,可应用于牛皮纸的漂白、染料脱色及解毒、生物合成、洗衣店清洁、生物传感器、木质混合物材料产品等。漆酶广泛存在植物和真菌中,但目前发现的很多真菌漆酶的...
- 杨升瞿国胜王行国
- 关键词：漆酶ABTS染色体步行
- 文献传递
- E.coliPC^+PE^-菌株AD93/ptac67的构建及其生物学性质被引量：1
- 2009年
- 将螺旋菌Borrellia.afzelii编码的磷脂酰胆碱合成酶基因(pcs)导入磷脂酰乙醇胺阴性菌株E.coliAD93(PE-)获得磷脂酰胆碱阳性、磷脂酰乙醇胺阴性的菌株E.coliAD93/ptac67(PC+PE-).生理生化特性调查显示:AD93/ptac67菌株的生长需要高于10 mmol/L的Mg2+,而对照细菌AD93则需要高于20 mmol/L的Mg2+,AD93/pDD72菌株则不需要;AD93/ptac67与AD93 SDS的MIC值为0.02%,比AD93/pDD72低约10倍;5%NaCl完全抑制AD93/ptac67的生长,3%NaCl则几乎完全抑制AD93的生长,而NaCl浓度为5%时,AD93/PDD72菌株仍能生长;SDS-PAGE图谱显示3种菌株的周质蛋白差异显著,而外膜蛋白差异不明显.在活体细菌中,磷脂酰胆碱替代磷脂酰乙醇胺并不能使缺少磷脂酰乙醇胺的突变体恢复至野生型状态,显示磷脂酰胆碱不能完全替代磷脂酰乙醇胺的功能.
- 李昌瑜喻雪婧叶青吴彬李洋王行国
- 关键词：磷脂酰胆碱磷脂酰乙醇胺
- 磷脂酰胆碱的生物合成与病源菌的致病性
- 磷脂酰胆碱(PC)是真核生物膜磷脂的主要成分之一。它与其他磷脂一道,为细胞和细胞器构建了一个具有通透性的屏障,为多种生物催化过程的集合和进
- 王行国
- 文献传递
- 推定的BB0462蛋白增强oppAV启动子的转录活性
- Borrelia burgdorferi基因组中BB0462 ORF编码一种由110氨基酸组成的未知功能 BB0462蛋白。使用推定的氨基酸序列在蛋白库中进行Blast搜寻比对以及推定蛋白的二级结构预测都显示BB0462...
- 王行国尹姣徐娴
- 文献传递
