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Na_v1.2IQ及其癫痫突变体的表达纯化和活性鉴定被引量：1: 2016年; 目的构建电压门控性钠通道亚型Na_v1.2IQ片段及其癫痫突变体的质粒,制备高浓度和高纯度的体外重组蛋白并进行活性鉴定。方法将Na_v1.2 IQ片段及癫痫突变体的cDNA插入pGEX-6p-1质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导Na_v1.2 IQ片段及癫痫突变体GST融合蛋白表达,GS-4B beads进行分离纯化。应用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量;采用Bradford方法测定GST蛋白浓度;应用pull-down法检测纯化后蛋白的活性。结果 Na_v1.2IQ片段及其癫痫突变体在体外大肠杆菌中具有较高的纯度和表达量,与钙调蛋白在体外能够直接结合,证明制备的蛋白片段具有一定活性。结论成功分离纯化了稳定高效的体外重组Na_v1.2IQ及其癫痫突变体蛋白,为研究Na_v1.2与相关调节因子在癫痫发病的作用提供理论依据。; 郑敏王千慧封瑞李智马中女孙威毛楠高青华郝丽英郭凤; 关键词：钙调蛋白突变体癫痫

遗传性癫痫大鼠小脑中p-CaMKⅡ、p-ERK和p-p38蛋白表达的异常变化: 2015年; 目的研究遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)与正常Wistar大鼠小脑中p-Ca MKII、p-ERK以及pp38蛋白含量的变化,进一步阐明癫痫发病机制。方法应用PCR技术,鉴定基因突变鼠(TRM),确定癫痫阳性大鼠。以Wistar大鼠作为正常对照模型,通过Western blot技术分别测定TRM及Wistar大鼠小脑内p-Ca MKII、pERK以及p-p38的蛋白表达量。结果与正常大鼠相比,TRM大鼠小脑p-Ca MKII蛋白和p-p38蛋白表达量升高,而pERK蛋白表达量没有明显变化。结论 TRM大鼠小脑内p-Ca MKII和p-p38蛋白表达上调,表明Ca MKII与MAPK信号通路可能参与癫痫的发病机制。; 王千慧李智哈大吉封瑞高青华胡慧媛赵美眯孙雪菲郝丽英郭凤; 关键词：小脑癫痫 MKII P-ERK P-P38

遗传性癫痫大鼠海马NOs、SOD、MDA、LDH的异常变化: 2014年; 目的比较遗传性癫痫大鼠(tremor,TRM)海马与正常Wistar大鼠海马的一氧化氮合酶(NOs)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的变化,进一步揭示癫痫的发病机制。方法应用Western Blot法检测TRM海马区NOs蛋白的表达;应用试剂盒检测TRM海马区LDH和SOD的活性以及MDA的含量。结果与正常Wistar大鼠相比,遗传性癫痫大鼠海马中NOs表达水平升高,MDA含量和LDH活性升高(<0.01),SOD活性无变化。结论 NOs、LDH、MDA的异常变化可能与遗传性癫痫大鼠的癫痫发生与发展相关。; 王千慧徐晓雪赵丹高青华朱茂华张娟封瑞马中女蔡际群郝丽英郭凤; 关键词：海马一氧化氮合酶乳酸脱氢酶

神经肽Y及其Y1受体在遗传性癫痫大鼠脑内的表达及意义被引量：1: 2014年; 目的探讨遗传性癫痫大鼠(TRM)海马和颞叶皮质中神经肽Y(NPY)及其Y1受体(Y1R)的表达和分布。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NPY和Y1R m RNA表达。ELISA试剂盒法检测TRM和Wistar大鼠海马和颞叶皮质中NPY浓度。Western blot检测Y1R蛋白表达。免疫荧光双标记法分析TRM及Wistar大鼠海马CA1、CA3和DG区以及颞叶皮质中NPY与Y1R的分布和共定位。结果 ELISA和RT-PCR结果均显示,TRM海马和颞叶皮质中NPY表达明显上调,与Wistar大鼠比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果证实,TRM海马中Y1R蛋白表达明显低于Wistar大鼠,而在颞叶皮质中显著高于Wistar大鼠。免疫荧光分析发现NPY与Y1R在TRM海马CA1、CA3区神经元细胞和DG区颗粒细胞以及颞叶皮质神经元细胞中分布广泛,并存在共定位且主要定位在细胞膜上。结论在TRM海马和颞叶皮质中,NPY及其Y1R表达出现异常变化,而这种异常表达可能与TRM癫痫发生机制有关。; 徐晓雪郭凤王千慧张朝东杨军赵久晗蔡际群; 关键词：癫痫海马颞叶皮质

遗传性癫痫大鼠海马ERK与p38蛋白的异常变化被引量：3: 2014年; 目的研究遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)海马中p-ERK、ERK、p-p38和p38蛋白的表达。方法以正常Wistar大鼠为对照组,PCR技术鉴定基因突变癫痫模型鼠TRM。提取大鼠海马组织后,应用免疫印迹法,检测大鼠海马中p-ERK、ERK、p-p38和p38的蛋白表达。结果与正常Wistar大鼠相比,TRM鼠海马中pERK与p-ERK/ERK蛋白表达量升高,而ERK蛋白表达量不变;TRM鼠海马中p-p38与p-p38/p38蛋白表达量高于正常Wistar大鼠,而p38蛋白表达量不变。结论 TRM鼠海马中p-ERK与p-p38表达上调,可能与TRM癫痫发病机制相关。; 赵金生徐晓雪孙晓宇王千慧高青华封瑞胡慧媛孙威马中女蔡际群郝丽英郭凤; 关键词：海马癫痫 ERK P38

遗传性癫痫大鼠海马脑源性神经营养因子蛋白的异常变化被引量：2: 2017年; 目的本研究通过分析比较遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)与正常大鼠(Wistar)海马中BDNF蛋白表达与定位差异,进一步阐明癫痫发病机制。方法以正常Wistar大鼠为对照组,应用PCR技术,筛选阳性自发性癫痫大鼠TRM作为实验组;通过Western blot技术分别对TRM及Wistar大鼠海马中BDNF蛋白进行半定量检测;免疫组织化学技术分别测定TRM及Wistar大鼠海马中BDNF蛋白的定位表达变化。结果与Wistar大鼠相比,TRM大鼠的海马中BDNF蛋白表达无明显变化;BDNF蛋白在海马DG区和CA1区定位表达减少。结论与Wistar大鼠相比,TRM大鼠海马DG区和CA1区BDNF蛋白定位表达减少,表明癫痫的发作可能与BDNF蛋白在海马区定位的异常变化有关。; 张景梅梁洪玥王千慧徐晓雪李智马中女郝丽英郭凤; 关键词：脑源性神经营养因子海马癫痫

钙离子／钙调蛋白激酶Ⅱ在癫痫中的作用机制被引量：5: 2017年; 钙离子/钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是一种多功能丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。CaMKⅡ在神经递质、细胞代谢和突触重塑性等方面参与调节,在诸多神经系统疾病中发挥极其重要的作用。CaMKⅡα特异性定位于兴奋性神经元中,一直被认为是研究治疗癫痫的关键所在。体内和体外不同癫痫模型出现CaMKⅡ的活性下降。本文从CaMKⅡ的生物学分类、结构与特性以及CaMKⅡ在癫痫中的作用方面进行综述,为深入研究癫痫病理过程及癫痫药物治疗提供新的理论依据。; 徐硕妍王千慧郭凤; 关键词：癫痫细胞特异性

自发性癫痫大鼠脑内神经肽Y受体Y2R和Y5R的表达及分布: 2015年; 目的研究自发性癫痫大鼠(tremor rat,TRM)海马和颞叶皮质中神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)Y2和Y5受体(Y2R和Y5R)的表达和分布。方法以TRM大鼠作为癫痫组,正常Wistar大鼠作为对照组,每组7只,以RT-PCR法检测Y2R和Y5R mRNA水平表达,Western Blot法检测其蛋白水平表达,免疫荧光法分析癫痫组和对照组大鼠海马CA1、CA3和齿状回(DG)区以及颞叶皮质中Y2R与Y5R的分布和定位。结果RT-PCR和Western Blot结果显示,与对照组大鼠相比较,癫痫组海马和颞叶皮质中Y2R mRNA相对表达水平(相对灰度值为海马:0.75±0.06 vs.0.51±0.07;颞叶皮质:0.70±0.05 vs.0.55±0.03)及蛋白相对表达水平(相对灰度值为海马:0.79±0.08 vs.0.42±0.05;颞叶皮质:0.72±0.05 vs.0.51±0.07)均显著上调(均P<0.01),Y5R mRNA(相对灰度值为海马:0.52±0.10 vs.0.54±0.06;颞叶皮质:0.46±0.03 vs.0.42±0.04)及蛋白(相对灰度值为海马:0.28±0.06 vs.0.27±0.03;颞叶皮质:0.31±0.05 vs.0.27±0.07)表达均没有明显变化(均P>0.05)。免疫荧光分析发现Y2R与Y5R在癫痫组大鼠海马CA1、CA3区神经元和DG区颗粒细胞以及颞叶皮质神经元中分布广泛且主要定位在细胞膜上。结论在TRM中Y2R表达在海马和颞叶皮质中均表达上调,但是Y5R的表达没有明显改变。; 徐晓雪郭凤王千慧杨军赵久晗张朝东蔡际群; 关键词：癫痫自发性癫痫大鼠

遗传性癫痫大鼠海马内电压门控性钠离子通道四种亚型的表达及分布被引量：1: 2015年; 目的探讨遗传性癫痫大鼠(Tremor rat,TRM)大脑海马中,电压门控性钠离子通道Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ亚型(Na_v1.1、Na_v1.2、Na_v1.3与Na_v1.6)的表达及分布。方法 Western blot检测TRM(n=7)和Wistar大鼠(n=7)海马中Na_v1.1、Na_v1.2、Na_v1.3与Na_v1.6的蛋白表达情况。免疫荧光法进一步分析TRM及Wistar大鼠海马CAI、CA3和DG区中这四种亚型的分布与定位。结果相较于正常大鼠,TRM海马中Na_v1.1、Na_v1.2、Na_v1.3与Na_v1.6蛋白表达均明显上调(P<0.01)。此外,这四种VGSC亚型在TRM海马CAI,CA3区神经元及DG区颗粒细胞中分布广泛,且主要定位在细胞膜上。结论 Na_v1.1、Na_v1.2、Na_v1.3与Na_v1.6在TRM大鼠海马中出现显著高表达,可能与遗传性癫痫发生机制有关。; 徐晓雪郭凤王千慧张朝东吕昕瞳熊爽王宏徐承伟赵晶蔡际群; 关键词：海马

CaMKⅡ抑制剂KN93对遗传性癫痫大鼠海马电压门控性钠通道亚型NaV1.1,NaV1.2表达的影响: Ca MKⅡ抑制剂KN93对遗传性癫痫大鼠海马电压门控性钠通道亚型Na V1.1,Na V1.2表达的影响王千慧蔡际群郝丽英郭凤*中国医科大学药学院药物毒理学教研室,沈阳,110001目的:研究遗传性癫痫大鼠(Tremo...; 王千慧蔡际群郝丽英郭凤; 关键词：电压门控性钠通道; 文献传递

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王千慧

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