沈涛
- 作品数：44 被引量：258H指数：7
- 供职机构：中国医科大学附属盛京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金沈阳市科学技术计划项目辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学自动化与计算机技术更多>>
- GST-β-catenin融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达被引量：2
- 2015年
- 目的构建GST-β-catenin融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.col)中诱导表达。方法从COS-7细胞中提取m RNA,反转录为c DNA。用PCR方法扩增出β-catenin基因全长,通过Bam HI和Sal I酶切位点将其定向插入p GEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒p GEX-4T-2-β-catenin,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-β-catenin,并用Western blot方法证实了GST-β-catenin融合蛋白的表达。结论成功构建了GST-β-catenin原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化β-catenin及研究其结构与功能提供了前提基础。
- 梁峰沈涛姚强贾长青
- 关键词：Β-CATENIN原核表达融合蛋白
- GST-hVinexin融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
- 2012年
- 目的构建GST-hVinexin融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hVinexin基因全长,通过BamHI和SalI酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hVinexin,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。结果电泳后酶切结果证实hVinexin大小为990bp,测序证明成功构建了原核表达质粒GST-hVinexin,并诱导表达GST-hVinexin融合蛋白,进一步用Western blot方法验证了其融合蛋白的表达。结论成功构建了GST-hVinexin原核表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌表达,为进一步纯化Vinexin及研究其结构与功能提供了前提基础。
- 沈涛史立伟杨礼庆巴根梁爽付勤
- 关键词：原核表达融合蛋白
- GST-hSesn2融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
- 2017年
- 目的构建GST-h Sesn 2融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hSesn2基因全长,通过BamHI和SalI酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hSesn2,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDSPAGE电泳和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-h Sesn2,并用Western blot方法证实了GST-h Sesn2融合蛋白在原核细胞大肠埃希菌中阳性表达。结论 GST-h Sesn2原核表达载体成功构建为进一步纯化Sesn2及研究其结构与功能提供了前提基础。
- 沈涛杨蕾李妍巴根郭然郭洲洋陈之光付勤
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 口服利伐沙班预防人工全髋关节置换术后深静脉血栓的临床研究被引量：51
- 2013年
- 目的评价全髋关节置换术(THA)后患者用利伐沙班和低分子肝素抗凝的疗效和安全性。方法 145例初次行THA的患者,随机分成2组,利伐沙班组75例,术后每日口服利伐沙班10 mg至术后10 d;低分子肝素组70例,术后每日皮下注射低分子肝素0.4 mg,至术后10 d。观察术后患者伤口出血情况;术后48 h内拔除引流管,计算术后引流量;术后7 d观察凝血指标变化值;术后7～10d超声检查深静脉血栓形成情况。结果术后深静脉血栓(DVT)形成情况,出血倾向和术后引流量,2组患者差异无统计学意义。术后7 d凝血指标与术前比较,利伐沙班组的凝血酶原时间(PT)较术前延长,低分子肝素组差异无统计学意义。术后7 d国际标准化比值(INR)与术前比较,2组变化无统计学意义。结论利伐沙班与低分子肝素相比,预防THA术后的疗效相当,在安全性方面,均无大出血事件的发生。
- 杨礼庆王程沈涛焦士军付勤
- 关键词：人工全髋关节置换术深静脉血栓利伐沙班
- 骨肉瘤细胞中Polo样激酶3的表达和定位
- 2017年
- 目的:构建新型人源真核表达载体3*Flag-hPlk3并同时检测其在骨肉瘤细胞U2OS中的表达及定位。方法:以GST-hPlk3作为模板,利用聚合酶链反应扩增人源Plk3目的基因c DNA全长,并将其克隆到含有3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序分析鉴定,并转染至U2OS骨肉瘤细胞系中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。同时利用荧光共聚焦激光扫描显微镜观察3*FlaghPlk3在U2OS细胞系中的定位,进一步利用免疫沉淀方法纯化人源Plk3蛋白。结果:hPlk3基因c DNA全长成功构建于含有3*Flag标签的真核表达载体中,Western blot检测3*Flag-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为74k Da。3*Flag-hPlk3在骨肉瘤细胞系U2OS中主要定位于细胞质及核周,并成功纯化了hPlk3蛋白。结论:成功的构建了含有3*Flag标签的人源Plk3真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-hPlk3融合蛋白的表达,最终成功纯化hPlk3蛋白。3*Flag-hPlk3蛋白主要定位在细胞质和核周。
- 沈涛陈之光李妍巴根郭然杨蕾郭洲洋付勤
- 关键词：WESTERNBLOT免疫沉淀
- 形成性评价在临床流行病学教学应用中的体会和思考被引量：4
- 2021年
- 形成性评价(formative assessment)是由美国哈佛学者Scriven在1967年首次提出[1],主要用于教师在教学过程中通过实施动态化和多元化的系统评价,诊断发现教育教学过程中可能存在的问题,并对发现的问题总结和凝练以提高教学活动的质量,最终提高学生的综合能力和素质。形成性评价不仅是教与学的互动,更是教师与学生互动的过程[2]。
- 郑黎强沈涛
- 关键词：临床流行病学教育教学过程教学应用教学活动动态化
- 姜黄素通过抑制成骨细胞凋亡缓解糖皮质激素诱导骨质疏松症的体内体外研究
- 目的 姜黄素(Curcumin)是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的活性成分,具有对抗卵巢切除大鼠骨质疏松症的作用.然而,目前尚无直接证据证明姜黄素亦能缓解糖皮质激素诱导的骨质疏松症.本研究旨在探究姜黄素在体内缓解糖...
- 陈之光薛今琦沈涛巴根于冬冬付勤
- β-catenin基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
- 2014年
- 目的构建β-catenin真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞NIH3T3的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增β-catenin基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞NIH3T3细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。最后利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-β-catenin在NIH3T3细胞内的定位。结果β-catenin基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为2346 bp,并测序成功。Western blot检测到了GFP-β-catenin融合蛋白表达,分子量约为115kDa。pEGFP-β-catenin在工具细胞NIH3T3细胞中主要定位于细胞膜和细胞质。结论成功构建了β-catenin基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-β-catenin蛋白在NIH3T3细胞中主要定位于细胞膜和细胞质。
- 张成宏沈涛佟宇鑫李妍李丰
- 关键词：Β-CATENIN基因质粒构建NIH3T3细胞
- 全髋关节置换术治疗伴有股骨头坏死的成人髋关节发育不良被引量：11
- 2012年
- 目的:总结人工全髋关节置换术治疗伴有股骨头坏死的成人髋关节发育不良的经验及术后效果。方法:分析我科2006年4月至2010年6月间诊治的29位伴有股骨头坏死的成人髋关节发育不良患者的临床资料及随访结果,并进行统计学处理。共行38髋全髋关节置换术,平均随访20个月。结果:平均手术时间109 min,平均术中失血量390 ml,围术期无重大心脑血管并发症发生,平均Harris评分术前为39.3分,术后随访为84.3分(P<0.05),手术效果优良率为96%。结论:全髋关节置换术是治疗伴有股骨头坏死的成人髋关节发育不良的一种重要方法,术者对该病病理特点的熟练掌握、周密的术前准备、丰富的手术经验是手术取得成功的关键。
- 巴根杨礼庆许晓军沈涛付勤
- 关键词：全髋关节置换术髋关节发育不良先天性髋关节脱位成人
- 3~* Flag-hPlk4真核表达载体的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达和定位
- 2017年
- 目的:构建3~* Flag-hPlk4真核表达载体,并证实重组表达载体在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pGEX-4T-2-hPlk4为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk4基因c DNA全长,并将其克隆至含有3~* Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,Western blot检测重组蛋白的表达。同时利用共聚焦激光显微镜观察3~* Flag-hPlk4表达载体在U2OS细胞中的定位,进一步利用免疫沉淀的方法纯化人源Plk4蛋白。结果:hPlk4基因c DNA全长成功构建到3~* Flag真核表达载体中,Western blot检测到含有3~* Flag的人源Plk4融合蛋白表达,进一步在U2OS骨肉瘤细胞中主要定位于细胞质和细胞核周,并成功纯化hPlk4蛋白。结论:成功构建了3~* Flag-hPlk4真核表达质粒,同时鉴定了融合蛋白的表达,并成功纯化人源Plk4蛋白。3~* Flag-hPlk4蛋白主要定位在细胞质和细胞核周。
- 沈涛李妍杨蕾郭洲洋巴根郭然陈之光付勤
- 关键词：WESTERNBLOT免疫沉淀骨肉瘤
