梁海君
- 作品数：11 被引量：16H指数：3
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- 质粒表达型siRNA对人近端肾小管上皮细胞cubilin表达的抑制作用被引量：1
- 2007年
- 目的观察cubilinsiRNA真核表达载体对人近端肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell line,HKC)cubilin基因的特异性抑制作用。方法针对人cubilin基因设计并构建siRNA真核表达载体pSUPER EGFP-C1和pSUPER EGFP-C2,转染HKC,经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测cubilin mRNA的表达、不同浓度的人血清白蛋白(HSA)刺激正常HKC及转染重组质粒的HKC24h后cubilin mRNA的表达,并通过激光共聚焦扫描荧光显微镜观察HKC对白蛋白摄取情况的变化。结果FQ-PCR显示HSA刺激正常HKC后cubilin mRNA表达具有剂量依赖性。与正常对照组相比,两个重组质粒均可部分抑制HKC cubilin表达,抑制效率分别为66%和37%,HSA刺激转染pSUPER EGFP-C1、pSU-PER EGFP-C2的HKC后cubiin mRNA水平较正常对照组比较分别下降50%、34%,转染了重组质粒的HKC对白蛋白的摄取明显减少。结论成功地构建了针对人cubilin基因的RNA干扰真核表达载体,表达型siRNA可抑制肾小管上皮细胞cubilin基因的表达及对白蛋白的摄取。
- 林静何娅妮杨聚荣李新伦梁海君吴劲松李开龙丁涵露张建国
- 关键词：CUBILINRNA干扰SIRNA人近端肾小管上皮细胞
- 人cubilin蛋白功能片段原核表达系统的建立被引量：2
- 2006年
- 目的构建编码白蛋白吞饮受体人cubilin(hcubilin)蛋白配体结合域CUB78基因片段的原核表达载体,诱导表达并鉴定表达产物。方法重组DNA技术构建原核表达载体pGEX hCUB78,IPTG诱导表达,SDS PAGE与免疫印迹法鉴定表达产物,Pulldown实验验证融合蛋白是否与白蛋白结合。结果双酶切和测序鉴定表明CUB78片段插入正确,诱导表达后获得分子量为52×103的融合蛋白,该融合蛋白可以被抗GST抗体识别,并且可以和白蛋白结合。结论CUB78基因片段编码的蛋白质能在原核细胞中正确表达,并且可以和白蛋白结合,这为进一步研究该功能域的结构与功能奠定了基础。
- 李新伦何娅妮杨聚荣梁海君林静李开龙丁涵露张建国
- 关键词：CUBILINPGEX-4T-1融合蛋白白蛋白
- Cubilin白蛋白结合域重要功能残基的研究
- 目的Cubilin是肾近曲小管上皮细胞负责重吸收白蛋白等大分子物质的吞饮受体,研究发现其在蛋白尿相关性肾损害中具有重要作用。本研究结合生物性信息学、基因工程以及生物传感器技术对cubilin白蛋白结合域重要氨基酸残基进行...
- 杨聚荣何娅妮李新伦梁海君林静吴小玮
- 文献传递
- 腺病毒介导Cubilin反义RNA对肾小管上皮细胞Cubilin蛋白诱导表达的抑制作用被引量：2
- 2006年
- 目的构建细菌内同源重组型的Cub ilin反义RNA腺病毒表达载体并研究其对肾小管上皮细胞Cub ilin蛋白诱导表达的影响。方法PCR扩增大鼠Cub ilin起始编码区767 bp的DNA片段,与T载体连接,测序鉴定连接方向,通过选择反向和同向的双酶切位点与腺病毒穿梭载体pAdtack-CMV同时酶切和连接,构建反向插入(正向插入作为对照)的腺病毒穿梭载体。将Pm eⅠ线性化的腺病毒穿梭载体pAdtack-ACUB和pAdtack-CUB转染包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的受体菌B J5183(AdEasyTMXL)进行同源重组。用含有卡那霉素的LB平板筛选同源重组阳性的克隆,PacⅠ酶切和测序鉴定后,转染包装细胞(293细胞),经病毒扩增和纯化后,再以OD法和GFP法计算重组腺病毒的滴度。经免疫印迹法分析Cub ilin反义RNA对Cub ilin蛋白质诱导表达的抑制作用。结果成功构建了Cub ilin的反义RNA腺病毒表达载体(pAdEasy-ACUB)和对照正义RNA腺病毒表达载体(pAdEasy-CUB),滴度为2.0×1010pfu/m l、1.8×1010pfu/m l;Cub ilin反义RNA腺病毒表达载体转染可明显抑制大鼠肾小管上皮细胞的Cub ilin蛋白的诱导表达。结论Cub ilin的反义RNA腺病毒表达载体的成功构建以及对肾小管上皮细胞Cub ilin蛋白诱导表达的明显抑制作用,为在基因水平的研究和治疗蛋白尿引起的肾间质损伤奠定了良好的基础。
- 梁海君何娅妮杨聚荣丁涵露李开龙张建国李新伦林静刘俊
- 关键词：CUBILIN腺病毒反义RNA肾小管上皮细胞
- 人NaDC1基因启动子序列转录调控元件的初步分析
- 2007年
- 目的对hNaDC1基因启动子序列转录调控元件进行初步分析。方法构建hNaDC1基因5′侧翼序列系列缺失质粒,以双荧光素酶报告基因检测系统检测hNaDC1基因5′侧翼区(-2232/+136)的转录调控元件与转录调控蛋白之间的相互作用。结果pGL3-hNaDC1A质粒的转录活性最高,为(2.98±0.45);pGL3-hNaDC1D的转录活性最低,为(0.45±0.14)。以pGL3-hNaDC1A质粒的转录活性为基准(100%),其他4种质粒相应的转录活性分别为:pGL3-hNaDC1B86.7%,pGL3-hNaDC1C89.4%,pGL3-hNaDC1D15.8%,pGL3-hNaDC1E61.2%。MatInspector5.0软件预测结果显示hNaDC1基因5′侧翼启动子序列共含有22个14种转录因子结合位点。结论hNaDC1基因5′侧翼区-1084/-254和-12/+136区域可能存在有正性作用转录因子的结合位点。
- 杨聚荣何娅妮张剑凯李新伦梁海君林静吴小玮王惠明李开龙
- 关键词：转录调控
- 高海拔地区对慢性肾脏病的影响及机制被引量：4
- 2012年
- 高海拔对身体的不利影响已经证实,但高海拔对慢性肾脏病（CKD）患者肾脏损伤进展的风险评估及应对策略现所知甚少。正常肾组织由于其结构和功能的复杂性,自身对氧的需求量很大,而且耐受缺氧的能力较低,容易出现缺氧性肾损害,
- 梁海君格日力
- 关键词：高海拔地区慢性肾脏病缺氧性风险评估肾脏损伤肾组织
- Cubilin反义RNA对大鼠肾小管超负荷重吸收白蛋白的抑制作用
- 2007年
- 目的探讨经肾动脉灌注腺病毒载体介导Cubilin反义RNA对肾小管超负荷重吸收白蛋白的抑制作用。方法建立大鼠阿霉素肾病模型,正义RNA组和反义RNA组分别经肾动脉缓慢灌注GFP基因标记的pAdEasy-Cub和pAdEasy-ACub,对照组和模型组灌注等量生理盐水。激光共聚焦显微镜下观察GFP的表达,并监测24h尿蛋白量及其他生化指标;光镜下观察肾小管间质病理变化;免疫组化法观察肾小管Cubilin基因的表达以及肾小管上皮细胞内白蛋白的沉积。结果转染第4天,正、反义RNA组肾脏GFP基因有较强表达,11d达到高峰,可持续至实验结束;反义RNA组与其他各组相比,24h尿蛋白量明显增高(P<0.01),小管间质病变轻微,Cubilin阳性表达率最低,且与白蛋白的沉积呈显著正相关(r=0.896,P<0.01)。结论经肾动脉途径灌注重组腺病毒,能器官靶向性表达外源基因;Cubilin反义RNA对肾小管超负荷重吸收白蛋白有明显的抑制作用,并可以有效地减轻蛋白尿引起的肾间质损伤。
- 刘俊何娅妮杨聚荣李开龙丁涵露张建国梁海君詹俊
- 关键词：腺病毒载体CUBILIN白蛋白反义RNA蛋白尿
- 肾小管上皮细胞白蛋白超负荷在管周微血管网病变中作用的研究
- 一、研究背景 业已证实，肾小管间质损伤的严重程度与慢性肾脏疾病是否进展为肾衰竭相关更为密切。引起肾小管间质病变的原因比较复杂，其中蛋白尿的肾损伤作用已为大量临床和实验研究所证实。研究表明，白蛋白超负荷重吸收可以激活肾小管...
- 梁海君
- 关键词：肾小管上皮细胞肾小管间质损害肾活检病理诊断腺病毒感染
- 文献传递
- 人cubilin蛋白与其配体白蛋白结合特定结构域的预测
- 2007年
- 目的同源模建cub8功能域的三维模型,并以计算机辅助的分子对接方法预测cub8功能域与白蛋白的候选结合氨基酸残基。方法采用insightⅡ工作站对cub8蛋白进行同源模建,对cub8蛋白和白蛋白进行分子对接,寻找白蛋白和cub8的候选结合氨基酸残基。结果cub8蛋白三维结构为两个反平行的β片层结构,中间以β转角相连。cub8蛋白片段与白蛋白通过正负电势的吸引完成受体与配体的结合。Asp59-Tyr60-Leu61-Glu62-Leu63-Tyr64和Arg72-Tyr73肽段可能是cubilin与白蛋白结合的关键氨基酸残基。结论利用计算机辅助的分子对接技术,获得cub8和白蛋白相互作用的两个候选结合域,为进一步研究cubilin与白蛋白相互作用奠定基础。
- 杨聚荣何娅妮李新伦梁海君林静吴小玮
- 关键词：同源模建白蛋白
- 378例单纯性肾囊肿患者肾功能变化的病例对照研究被引量：5
- 2005年
- 目的本文通过病例对照研究探讨单纯性肾囊肿患者肾功能的变化及其可能机理.方法采用病例对照研究方法对我院2000年1月～2004年12月在院确诊为单纯性肾囊肿病人的年龄、性别、身高、体重、血压、尿常规、血肌酐等指标进行统计学分析.结果与对照组比较,单纯性肾囊肿组血肌酐值显著增高,eGFR显著降低,SBP、DBP显著升高;尿白细胞及红细胞的发生率显著增高.肾囊肿容量与eGFR呈负相关(r=-0.17,P＜0.05),但与血肌酐、SBP及DBP间无相关性.单纯性肾囊肿患者肾结石发生率为18.3%(69/378),显著高于对照组.多因素logistic回归分析结果显示年龄、SBP、肾囊肿容量、白细胞尿及肾结石是单纯性肾囊肿患者eGFR下降的危险因素.结论单纯性肾囊肿患者肾功能呈下降趋势,常伴高水平的血压值,易合并泌尿系感染、肾结石等疾病,这可能与其肾功能损害有关.
- 杨聚荣何娅妮李新伦梁海君林静周源张建国李开龙丁涵露王惠民
- 关键词：单纯性肾囊肿EGFR
