杨莉娜
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：西安交通大学医学院药理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 非诺贝特通过Sirt1-NF-κB途径调控肿瘤坏死因子α诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应被引量：2
- 2011年
- 目的探讨非诺贝特对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导3T3-L1成熟脂肪细胞中炎症相关蛋白CD40L/CD40表达的影响及其是否通过Sirt1-NF-κB途径调控TNF-α诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应。方法 3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化成为成熟脂肪细胞后,免疫荧光检测Sirt1及CD40L/CD40的表达定位。TNF-α刺激细胞以及加入非诺贝特、Sirt1特异性激动剂和抑制剂和NF-κB信号通路阻断剂后,采用免疫印迹法检测细胞内Sirt1、CD40和NF-κB蛋白表达水平,采用RT-Q-PCR检测Sirt1和CD40 mRNA表达水平。结果油红O染色结果表明成功建立诱导分化体系。Sirt1在3T3-L1成熟脂肪中有表达且主要定位于细胞核。免疫荧光和逆转录PCR结果表明,3T3-L1成熟脂肪细胞表达CD40且主要定位于细胞膜上,但不表达CD40L。非诺贝特剂量依赖性下调TNF-α(10μg/L)诱导的成熟脂肪细胞中CD40蛋白和mRNA的表达,上调TNF-α诱导的成熟脂肪细胞中Sirt1蛋白和mRNA的表达。Sirt1特异性激动剂白藜芦醇增强非诺贝特对TNF-α诱导的成熟脂肪细胞中CD40蛋白和mRNA表达的抑制作用,组蛋白去乙酰化酶抑制剂尼克酰胺和Sirt1特异性抑制剂Sirtinol减弱非诺贝特的抑制作用。且当NF-κB信号通路阻断后,CD40蛋白和mRNA表达水平显著降低。结论非诺贝特抑制TNF-α诱导3T3-L1成熟脂肪细胞中CD40的表达,且其可能通过Sirt1-NF-κB途径调控TNF-α诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应。
- 林琴琴林蓉张继业王维蓉杨莉娜张凯帆
- 关键词：非诺贝特肿瘤坏死因子Α3T3-L1脂肪细胞
- 稳定过表达人SIRT1基因的HEK293细胞系的建立被引量：1
- 2013年
- 目的:构建人沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)基因的真核表达载体,建立稳定过表达人SIRT1的HEK293细胞系。方法:将含有SIRT1的克隆载体pCR Ⅱ-TOPO-SIRT1双酶切后,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,连接产物经酶切鉴定后进行测序。构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-SIRT1转染HEK293细胞,G418进行筛选,Real-time PCR和Western Blot分别从mRNA和蛋白水平检测SIRT1的表达。结果:酶切分析和测序结果证实,SIRT1基因成功插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中。Real-time PCR和Western Blot结果显示稳定转染pc DNA3.1(+)-SIRT1的HEK293细胞SIRT1的表达水平明显高于未转染细胞(P﹤0.01)。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-SIRT1,并建立了稳定过表达SIRT1基因的HEK293细胞系,为进一步研究SIRT1基因在心血管疾病中的作用及其机制奠定了基础。
- 林蓉张凯帆王维蓉林琴琴杨莉娜任峰张建丰
- 关键词：心血管疾病SIRT1稳定过表达HEK293细胞
- 非诺贝特通过Sirt1途径调控血管外膜成纤维细胞凋亡被引量：1
- 2011年
- 目的探讨非诺贝特对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管外膜成纤维细胞凋亡的作用以及非诺贝特是否通过Sirt1途径调控TNF-α诱导的血管外膜成纤维细胞凋亡。方法原代培养血管外膜成纤维细胞,Western blot检测Sirt1在细胞中的表达,免疫荧光对Sirt1进行定位。预先1 h加入不同剂量的非诺贝特(25、50和100μmol/L),再用TNF-α(20μg/L)刺激细胞24 h。用MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blot检测Sirt1激动剂白藜芦醇,Sirt1抑制剂尼克酰胺和Sirtinol对血管外膜成纤维细胞Sirt1表达的影响。细胞加入非诺贝特(50μmol/L),1 h后加入白藜芦醇(20μmol/L)、尼克酰胺(10mmol/L)和Sirtinol(25μmol/L),1 h后再加入TNF-α(20μg/L)刺激24 h,流式检测细胞凋亡。结果 Sirt1在血管外膜成纤维细胞中有表达且主要位于细胞核中。与正常组比较,TNF-α能促进细胞增殖和诱导细胞凋亡(P<0.01),非诺贝特能够剂量依赖性抑制TNF-α诱导的细胞增殖和凋亡(P<0.01)。白藜芦醇能够上调细胞Sirt1蛋白的表达,尼克酰胺和Sirtinol对Sirt1蛋白的表达有抑制作用,且Sirtinol对Sirt1的抑制作用最为显著。白藜芦醇增强非诺贝特对血管外膜成纤维细胞凋亡的保护作用,而尼克酰胺和Sirtinol降低非诺贝特对血管外膜成纤维细胞凋亡的保护作用(P<0.01)。结论非诺贝特对TNF-α诱导的细胞增殖和凋亡有抑制作用。非诺贝特可能通过Sirt1途径调控血管外膜成纤维细胞,减少其凋亡。
- 王维蓉林蓉林琴琴杨莉娜张继业张凯帆
- 关键词：非诺贝特SIRT1肿瘤坏死因子Α血管外膜成纤维细胞
- Sirt1对动脉粥样硬化中脂肪细胞CD40的影响
- 目的:本研究利用小鼠3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化后的成熟脂肪细胞,建立肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的脂肪细胞模型,探讨组蛋白去乙酰化酶Sirt1对脂肪细胞CD40表达的影响,阐明Sirt1是否通过调控炎症因子CD...
- 林蓉林琴琴王维蓉杨莉娜张凯帆
- 文献传递
- Sirt1对动脉粥样硬化中血管外膜成纤维细胞凋亡的影响
- 目的:本研究利用大鼠胸主动脉原代培养的血管外膜成纤维细胞,建立肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管外膜成纤维细胞损伤模型,探讨组蛋白去乙酰化酶Sift1对血管外膜成纤维细胞凋亡的影响,阐明Sirt1是否通过调控血管外膜...
- 林蓉王维蓉林琴琴杨莉娜张凯帆任峰
- 关键词：动脉粥样硬化血管外膜成纤维细胞细胞损伤模型
- 文献传递
