杨星 作品数:7 被引量:9 H指数:2 供职机构: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 更多>> 发文基金: 云南省社会发展科技计划 云南省应用基础研究计划面上项目 云南省应用基础研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 化学工程 更多>>
秋冬季婴幼儿轮状病毒感染分子流行病学调查 被引量:5 2012年 目的监测2010年云南昭通地区秋冬季腹泻患儿感染轮状病毒的流行趋势,了解流行毒株的基因型特征。方法 2010年9—12月在云南省昭通市第一人民医院采集94份就诊的腹泻患儿粪便,应用胶体金法、逆转录聚合酶链式反应及PAGE电泳等方法,对样品进行轮状病毒抗原检测,其中8份阳性样品进行VP7基因测序分析及基因型分型。结果腹泻病患排泄物中轮状病毒抗原阳性比例为54.3%(51/94);8份轮状病毒基因序列分析,其中7份为G1型,1份为G3型;核苷酸同源性分析发现检测样品中轮状病毒主要与在中国辽宁、印度和泰国发现的流行株相似。结论 2010年昭通地区秋冬季患儿腹泻主要由轮状病毒引起,其中以G1型为主,其次为G3型。 赵晓南 李鸿钧 吴晋元 张光明 易山 杨星 郜岩 贾琴妹 木国法 孙茂盛关键词:轮状病毒 婴幼儿 基因型 轮状病毒灭活疫苗纯化、灭活及抗原定量检测方法的建立 杨星文献传递 离子交换层析纯化制备人轮状病毒灭活疫苗的方法 离子交换层析纯化制备人轮状病毒灭活疫苗的方法,涉及病毒制备灭活疫苗的方法。本发明包括浓缩病毒收获液,经QsepharoseFastFlow离子交换柱层析纯化,纯化产物透析脱盐,过滤除菌灭活等得到人轮状病毒灭活疫苗;进一步... 孙茂盛 李鸿钧 吴晋元 杨星 易山 张光明人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及小鼠血清免疫学评价 被引量:1 2011年 目的:研究人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及在实验小鼠中的免疫原性评价。方法:轮状病毒ZTR-5株在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫荧光定量检测病毒的感染性滴度,对收获的病毒液进行离心、超滤、分子筛纯化,甲醛灭活,抗原定量检测Al(OH)3吸附制备的实验性疫苗。使用不同剂量(8EU、32EU、128EU、256EU)经肌内注射免疫小鼠,共免疫三次,免疫间隔2周。采用间接ELISA法检测血清特异性抗体效价。结果:通过蚀斑纯化,筛选得到一株纯化的病毒株ZTR-5纯-1,在Vero细胞上适应性后感染性滴度达7.35logCCID50/ml;大量培养收获的病毒原液滴度为7.57logCCID50/ml,制备获得轮状病毒样品抗原含量为2 560EU/ml;经肌内注射,初次免疫后,所有剂量组动物均获得抗体阳转,阳转率为100%;第一次加强免疫后,各组血清特异性抗体水平均明显增高,免疫剂量为128EU和256EU的两组小鼠血清抗体效价均达1∶10 240;第二次加强免疫后,各剂量组(8EU、32EU、128EU、256EU)血清抗体效价依次达1∶5 120,1∶7 456,1∶14 481.54,1∶14 481.54。结论:人轮状病毒ZTR-5株可在Vero细胞上稳定增殖,所制备的疫苗具良好免疫原性,用128EU/2次免疫即可获得良好的免疫效果。 贾琴妹 吴晋元 易山 张光明 郜岩 杨星 赵晓南 孙茂盛 李鸿钧关键词:人轮状病毒 VERO细胞 灭活疫苗 免疫试验 两种层析方法纯化轮状病毒效果的比较 被引量:2 2012年 目的比较两种不同的凝胶层析纯化方法对人轮状病毒(Rotavirus,RV)的纯化效果及其对病毒抗原性和免疫原性的影响。方法病毒收获液经超滤浓缩后,分别采用Q Sepharose Fast Flow(QFF)离子交换层析和Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶过滤层析纯化,采用A群轮状病毒诊断试剂盒(胶体金)检测纯化病毒的抗原性;电镜观察病毒的形态;荧光灶法测定病毒纯化前后的感染性滴度;双抗体夹心ELISA法测定抗原含量;Lowry法测定纯化前后样品的蛋白含量;SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的病毒蛋白;纯化病毒经灭活后,PAGE分析病毒的核酸带型,免疫小鼠,检测纯化病毒的免疫原性。结果QFF洗脱峰1和4FF洗脱峰1为RV抗原阳性,电镜观察可见完整的、大小约70 nm的RV颗粒;经QFF和4FF层析纯化后,病毒的感染性滴度分别为7.10和4.50 lgCCID50/ml,最终抗原回收率分别为65.3%和11.8%,病毒液总蛋白去除率分别为99.68%和99.52%;SDS-PAGE分析显示,经QFF和4FF纯化的样品未见明显杂蛋白条带,且特异性良好;纯化病毒灭活后,病毒基因组带型未发生改变,且保持了良好的抗原性和免疫原性。结论两种凝胶层析方法均能纯化人轮状病毒,综合比较,QFF离子交换层析纯化效果优于4FF凝胶过滤层析。 杨星 吴晋元 易山 李鸿钧 张光明 郜岩 贾琴妹 赵晓南 孙茂盛关键词:轮状病毒 纯化 离子交换层析 凝胶过滤层析 离子交换层析纯化制备人轮状病毒灭活疫苗的方法 离子交换层析纯化制备人轮状病毒灭活疫苗的方法,涉及病毒制备灭活疫苗的方法。本发明包括浓缩病毒收获液,经QsepharoseFastFlow离子交换柱层析纯化,纯化产物透析脱盐,过滤除菌灭活等得到人轮状病毒灭活疫苗;进一步... 孙茂盛 李鸿钧 吴晋元 杨星 易山 张光明文献传递 两株灭活轮状病毒疫苗的免疫效果 被引量:1 2012年 目的研究轮状病毒(Rotavirus,RV)P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗的免疫原性及不同血清型间的交叉识别作用。方法采用Vero细胞转瓶培养RV,经纯化灭活、佐剂吸附等工艺,制备RV P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗,分别经肌内免疫Wistar大鼠和猕猴,采用ELISA法和微量病毒中和试验检测大鼠和猕猴血清中RV特异性抗体效价和中和抗体效价,流式细胞术检测猕猴血液中CD4+和CD8+T细胞的数量。结果 P[8]G1和P[2]G3株疫苗样品的RV抗原含量分别为10 240和5 120 EU/ml;免疫2次后,P[8]G1和P[2]G3株疫苗诱导大鼠产生的血清IgG抗体GMT分别为(43 407.71±1 654.51)和(41 520.61±2 047.61),诱导猕猴产生的血清IgG抗体GMT分别为(13 654.45±3 125.27)和(10 350.68±997.83);单一血清型疫苗免疫后产生的中和抗体具有型间交叉识别作用;2株疫苗免疫猕猴后均能刺激其CD4+T淋巴细胞增殖,CD8+T淋巴细胞无明显变化。结论 2株RV灭活疫苗均具有良好的免疫原性及型间交叉识别作用。 吴晋元 易山 张光明 李鸿钧 谢天宏 李思成 郜岩 贾琴妹 杨星 赵晓南 孙茂盛关键词:轮状病毒疫苗 灭活疫苗 免疫反应