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α-HNP-1转基因细胞系的建立: 2007年; 目的构建稳定表达人α-HNP-1的转基因细胞系,为稳定生产α-HNP-1并将其应用于医药开发提供生产细胞源。方法真核表达载体pcDNA3.1(-)/HNP-1经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染昆明白小鼠胚胎干细胞来源的上皮细胞,通过不同浓度的G418加压筛选,建立稳定转染的胚胎干细胞来源的上皮细胞系,用RT-PCR及抑菌试验检测α-HNP-1的表达。结果建立了稳定转染的ES来源的上皮细胞系,成功地表达目的基因,其培养上清液及细胞冻融液具有抑菌作用,结论真核表达载体稳定转染胚胎干细胞来源的上皮细胞系,为进一步研究α-HNP-1的功能奠定了基础。; 高其双黄海军欧阳静萍吴建英陶弼菲杨悦张德玲蒋思文; 关键词：真核表达载体 ES细胞上皮细胞系稳定转染基因表达

ES细胞快速建立人抗HIV天然蛋白的羊乳腺反应器研究: 高其双欧阳静萍程百炼杨保国喻婷章娅琳龚余亮李邦佑王春芳黄海军周木清韩艳云童伟文阮征宫时玉陈华华杨悦杨红文刘则学; 立项背景与技术原理：乳腺生物反应器技术被认为是今后生产各种珍稀药用蛋白和特异性功能蛋白的经济、高效、表达准确、符合可持续发展战略的一门新兴的高新技术。然而，由于乳腺细胞的体外培养非常困难、建立转基因乳腺细胞表达外源基因的...; 关键词：; 关键词：胚胎干细胞乳腺生物反应器动物模型

论生态影片中的视觉修辞运用——以系列影片《大自然在说话》为例分析: 在视觉文化时代,人们认知、解释和理解世界愈发依赖于视觉化的影像文本,“视觉性”逐步成为文化的主因。影像符号借助视觉修辞的方式建构起的“劝服性话语”,在环境议题的建构、传播与环保行动的动员中扮演愈发重要的角色。在当前的生态...; 杨悦; 关键词：环境传播视觉修辞; 文献传递

人α-防御素-1(α-HNP-1)基因真核表达载体的构建及在大鼠骨髓间充质干细胞中的转染表达: 2005年; 目的构建人α-防御素-1(α-HNP-1)基因的真核表达载体,并且转染大鼠骨髓间充质干细胞。方法提取人外周血粒细胞中的总RNA,反转录为cDNA作为模板,采用PCR的方法扩增得到人α-防御素-1(α-HNP-1)的基因片断。将扩增产物连接入pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,蓝白筛选,对PCR及酶切鉴定含有目的片断的克隆进行测序。经测序证实无误后,将获得的pGEM-T-HNP-1重组质粒上的α-HNP-1基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)上,构建HNP-1的真核表达载体pcDNA3.1-HNP-1。将真核表达载体pcDNA3.1-HNP-1用脂质体法转染原代大鼠骨髓间充质干细胞,用免疫组化法检测α-HNP-1的表达。结果获得预期大小为303bp的RT-PCR产物;经PCR、酶切鉴定和DNA测序分析证实重组质粒载体pcDNA3.1-HNP-1构建正确;免疫组化法显示转染细胞呈阳性反应。结论成功构建HNP-1基因的真核表达载体,并且在大鼠骨髓间充质干细胞中能成功表达。; 陈华华欧阳静萍王保华杨悦郑汉巧; 关键词：骨髓间充质干细胞基因真核表达载体广谱抗菌活性多形核中性粒细胞转染

人α-防御素-1(α-HNP-1)基因乳腺定位表达载体的构建及表达被引量：1: 2005年; 目的:将人α-防御素-1(α-HNP-1)基因与山羊β-乳球蛋白(Beta-Lac-toglobulin,BLG)基因5’调控区序列融合,构建α-HNP-1基因的乳腺定位表达载体并对其进行检测。方法:用PCR方法获得α-HNP-1基因片断并克隆于pMD18-T载体,经DNA测序证实α-HNP-1基因序列无误后,再将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1-HNP-1重组质粒。用PCR方法扩增出BLG基因5’区调控序列并克隆到pcD-NA3.1-HNP-1中,构建乳腺定位表达载体pcDNA3.1-BLG-HNP-1,该载体经脂质体包裹后,经乳腺导管注入妊娠中后期大鼠乳腺中进行表达。结果:经酶切鉴定和DNA测序分析证实重组质粒载体pcDNA3.1-BLG-HNP-1构建正确,经ELISA检测,大鼠乳汁中有α-HNP-1表达,其48h表达量为27.67ng/ml,72h表达量为49.00ng/ml。结论:成功构建了α-HNP-1基因乳腺定位表达载体并最终在乳腺获得一定量表达,说明乳腺导管注入法是一种较理想的评价乳腺特异表达载体的可行性方法。; 杨悦欧阳静萍王保华陈华华郑汉巧高其双; 关键词：多形核中性粒细胞小分子多肽基因细胞毒性作用半胱氨酸哺乳动物

人α-防御素-1（HNP-1）基因乳腺定位表达载体的构建: 目的：α-防御素又名人中性粒细胞肽(HNP)，是由数十个氨基酸残基组成的阳离子多肽，在哺乳动物中性粒细胞中含量丰富，具有广谱抗微生物和细胞毒活性，是机体天然免疫的重要介质。同时α-防御素-1在抗人类免疫缺陷病毒(HIV)...; 杨悦; 关键词：防御素基因克隆 Β-乳球蛋白; 文献传递

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杨悦