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一种移码差错率大幅度下降的聚合酶N端缺失体的研究: 1999年; 采用双引物定点突变法，构建了以２３６位氨基酸为起始密码子的Ｔａｑ酶（ＴａｑＮＤ２３６）的高表达质粒。并以－１移码突变质粒ｐＦＤＰＭＩ１８作为模板，建立了测定ＤＮＡ聚合酶的体外合成精确性的Ｇａｐｐｅｄ－ＤＮＡ系统。通过转化大肠杆菌ＴＧ１菌株后计数Ｘ－ｇａｌ平板上蓝白菌落的比例，测定了Ｔａｑ和ＴａｑＮＤ２３６两种ＤＮＡ聚合酶在ＤＮＡ体外合成中的移码突变率，发现缺失后的ＴａｑＮＤ２３６复制精确性提高了１０倍以上。; 张洁季朝能杜汉森郑佐华毛裕民; 关键词：定点突变

Taq DNA耐热聚合酶在大肠杆菌中的克隆和高表达被引量：8: 1996年; 从水生栖热菌(Thermus aquaticus)YT-1中分离得到的Taq DNA 聚合酶是一种广泛应用于PCR的耐热DNA聚合酶。由于天然菌株酶产量较低,培养条件要求严格,酶的纯化过程极为繁琐而使产品成本较高,因而促使人们构建适合于大规模生产的基因工程菌株。已有人分别通过不同的途径,使用不同的载体,成功地在大肠杆菌菌株中表达了Taq 耐热DNA聚合酶基因。我们通过与前人不同的途径,把这一基因克隆到大肠杆菌的载体质粒pJLA503上并使其得以高表达,为降低生产成本和进一步研究该酶的各种特性提供了有利条件。; 杜汉森季朝能徐迈马匆匆郑佐华毛裕民; 关键词：DNA聚合酶基因克隆

一个改进的PCR过程中聚合酶复制精确性测定系统的建立: 1997年; 在大肠杆菌中建立了一套用于测定ＤＮＡ聚合酶在ＰＣＲ过程中复制精确性的系统，并测定了耐热ＦＤＤＮＡ聚合酶在ＰＣＲ扩增过程中的复制精确性。这一系统主要包括以质粒ｐＵＣ１１８和ｐＵＣ１１９为出发质粒所构建的一套共６个突变质粒，分别为ｐＦＤＦＰ１１８和ｐＦＤＦＰ１１９（＋１移码突变）、ｐＦＤＦＭ１１８和ｐＦＤＦＭ１１９（－１移码突变）、ｐＦＤＦＵ１１８和ｐＦＤＦＵ１１９（碱基置换突变）。这些突变质粒均不能进行ｌａｃＺ－α互补反应，因此在含有Ｘ－Ｇａｌ和ＩＰＴＧ的培养基上菌落呈白色。同时还构建了ＰＣＲ产物克隆载体ｐＦＤＦＬ１１８和ｐＦＤＦＬ１１９。以上述突变质粒为模板进行ＰＣＲ反应，取反应产物和ｐＦＤＦＬ１１８或ｐＦＤＦＬ１１９连接后转化到大肠杆菌中。若在ＰＣＲ过程中发生回复突变，则转化子在含有Ｘ－Ｇａｌ和ＩＰＴＧ的培养基上呈蓝色。由转化子中蓝白菌落个数即可计算出ＤＮＡ聚合酶的复制差错率。用这一系统测得ＦＤＤＮＡ耐热聚合酶的复制差错率为１０－５～１０－６。; 杜汉森徐迈季朝能张洁毛裕民; 关键词：聚合酶链反应聚合酶移码突变

Taq DNA聚合酶功能区域的定位被引量：10: 1999年; 通过参Ｕ法定点突变产生了ＴａｑＤＮＡ聚合酶Ｎ端分别缺失３个，２３５个，２８７个和４４３个氨基酸的４个缺失体，利用Ｂａｌ－３１连续缺失法产生了ＴａｑＤＮＡ聚合酶的Ｃ端分别缺失了２个、１６个、２９个、３２个、３４个氨基酸的５个缺失体．经ＤＮＡ聚合酶活性测定表明Ｎ端缺失３个，２３５个，２８７个氨基酸后活力和完整的Ｔａｑ相近，而缺失４４３个氨基酸后则失去了ＤＮＡ聚合酶活力；Ｃ端的５个缺失体都失去了ＤＮＡ聚合酶活性．据此ＴａｑＤＮＡ聚合酶的功能区域被定位在２８７～８３２氨基酸之间．; 季朝能杜汉森郑佐华黄啸宇毛裕民; 关键词：TAQ DNA聚合酶

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杜汉森