李静远
- 作品数：19 被引量：22H指数：3
- 供职机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金浙江省科技厅重点资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人端粒结合因子在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位与周期性表达的研究被引量：3
- 2004年
- 目的 :研究人端粒结合因子 1(telomere repeatbinding factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达。方法 :应用分子克隆技术扩增 TRF1基因全长 (TRF1FL )和 N、C端缺失突变体(TRF1ΔNC)序列 ,并克隆入 p EGFP- C2真核表达载体 ,表达绿色荧光 (GFP)融合蛋白 ;将含目的基因质粒转染端粒酶阳性 Hela细胞和端粒酶阴性 WI38- 2 RA细胞 ,Western Blot验证目的蛋白分子量 ,荧光显微镜观察 TRF1在间期细胞和染色体的定位 ;利用药物阻断 He La细胞于不同周期 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,半定量 Western Blot检测 TRF1在不同细胞周期中的表达。结果 :TRF1FL、TRF1ΔNC序列长度分别为 1.3kb和 0 .9kb;GFP融合TRF1FL、TRF1ΔNC分子量大小分别为 80 k D和 6 0 k D。TRF1FL在间期细胞胞核内呈点状表达 ,在染色体则表达于染色体未端 ,TRF1ΔNC在细胞核内呈弥散性表达 ;TRF1在端粒酶阴性细胞中与早幼粒细胞白血病小体(promyelocytic leukemia body,PML )共定位 ,在端粒阳性细胞中则没有共定位。TRF1在 He La细胞中以 M期表达量最高 ,G1/ S表达最低 ,M期表达量是 G1/ S期的 3.9倍 (t=12 .92 ,P<0 .0 1)。结论 :TRF1在端粒酶阳性和阴性细胞中有不同的定位模式 ,在 He L a细胞中
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- 关键词：端粒基因TRF1细胞周期
- 人骨髓间充质干细胞端粒酶活性的表达被引量：6
- 2004年
- 目的 :探讨人骨髓间充质干细胞 (human mesenchymal stem cells,h MSCs)端粒酶活性的表达以及深低温冻存和向脂肪细胞诱导分化对基因表达的影响。方法 :联合应用密度梯度离心法和贴壁培养法分离人 h MSCs,传代培养。深低温冻存 h MSCs或诱导其向脂肪细胞分化 ,以 TRAP(Telomerase repeatamplification protocol assay)法分别检测新鲜的不同传代次数的 h MSCs、冻存复苏后培养的 h MSCs和诱导分化为脂肪细胞的 h MSCs的端粒酶活性。结果 :用 TRAP法检测 h MSCs(n=19)端粒酶活性 (RTA)是 (1.4 6± 0 .6 7) % ,分化成脂肪的 h MSCs(n=3)的RTA为 (11.80± 2 .5 2 ) % (P<0 .0 0 1) ;不同传代次数 MSCs端粒酶活性的比较中 ,早期 h MSCs(n=10 )的 RTA为(1.4 6± 0 .83) % ,晚期 h MSCs(n=9)的 RTA为 (1.4 6± 0 .4 7) % (P=0 .99) ;在低温冻存对 h MSCs端粒酶活性的影响中 ,新鲜的 h MSCs(n=13)的 RTA为 (1.4 1± 0 .4 4) % ,低温冻存的 h MSCs(n=6 )的 RTA为 (1.5 7± 1.0 7) %(P=0 .6 4)。结论 :h MSCs的端粒酶呈阴性 ,传代培养和低温冻存不影响基因表达水平。向脂肪细胞分化后 h MSCs端粒酶活性表达水平增高 ,其确切机制尚需进一步研究。
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- 关键词：骨髓细胞干细胞间充质干细胞端粒酶低温冻存脂肪细胞
- Tara,一个可能人端粒结合因子TRF1相互作用蛋白的分离和克隆
- 目的:人端粒结合因子TRF1(Telomere repeat binding factor 1)是一个重要的端粒调控蛋白,为进一步研究TRF1的蛋白作用网络,本研究分离和鉴定TRF1免疫共沉淀蛋白复合物并克隆其基因,同时...
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- 关键词：端粒免疫共沉淀质谱
- 文献传递
- 一个可能的与人端粒结合因子相互作用蛋白Tara的分离和克隆被引量：5
- 2004年
- 目的 :分离和鉴定端粒结合因子 (TRF1)免疫共沉淀蛋白复合物并克隆其基因。方法 :以 TRF1抗体应用免疫共沉淀方法 ,从细胞蛋白抽提物中分离 TRF1蛋白复合物 ,并作蛋白质肽指纹谱鉴定 ;应用温度梯度 PCR,从人 c DNA文库中扩增目的基因 ,并构建 p EGFP- C2真核表达载体 ;核苷酸测序和 Western blot验证目的基因序列和表达载体。结果 :从 TRF1免疫沉淀复合物中分离出了 Tara蛋白 ;人 c DNA文库中 PCR扩增所得产物为 1.7kb,与 Tara基因 CDS序列同源性为 99.9% ;GFP/ Tara融合蛋白约 10 0 k D,Tara在间期 He La细胞中弥散表达于胞浆 ,而有丝分裂细胞则定位于整个细胞。结论 :Tara是一个可能的 TRF1相互作用蛋白 ,其作用机制需进一步实验研究。
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- 关键词：端粒免疫共沉淀质谱
- 人骨髓间质干细胞中的端粒调控机制被引量：2
- 2007年
- 目的:研究人骨髓来源间充质干细胞(MSCs)端粒长度的调控机制。方法:以贴壁培养法从人骨髓中分离MSCs并用MSCs及造血干细胞相关表面抗体作表型鉴定,用Southern blotting检测MSCs的端粒长度;应用免疫荧光染色技术检测端粒重复序列结合因子1(TRF1)和早幼粒细胞白血病蛋白小体(PML)的定位;以端粒重复序列扩增法(TRAP)和/或Western blotting法检测传代及分化成脂肪细胞的MSCs和经同步化处理被阻断在S期的MSCs的端粒酶表达。结果:与端粒酶阴性ALT细胞株WI-38-2RA细胞相比,MSCs的端粒长度较短并且端粒长度变异度不大;端粒调控相关蛋白TRF1和PML在MSCs中的定位则与端粒酶阳性细胞HeLa细胞相同,两者呈非共定位,而在端粒酶阴性WI-38-2RA细胞中两者呈共定位状态。MSCs中不存在有染色体外端粒重复序列DNA(ECTR DNA)。TRAP法检测传代培养的MSCs端粒酶呈阴性表达,但分化成脂肪的MSCs端粒酶呈阳性表达。Western blotting检测同步化处理前MSCs端粒酶呈微弱表达,经同步化处理被阻断在S期时,MSCs的端粒酶表达明显增高,并且与S期的细胞比例呈正相关。结论:MSCs中不存在ALT相关的早幼粒细胞白血病蛋白小体(APBs)、染色体外端粒重复序列DNA(ECTR DNA)和端粒长度较长、端粒长度变异度大等ALT机制相关分子特征;非同步化在S期处理的MSCs,端粒酶呈微弱表达,但诱导向脂肪细胞分化或处在S期时,MSCs的端粒酶表达明显增高,并且与S期的细胞比例呈正相关。本研究提示MSCs是通过端粒酶机制而不是端粒延长旁路途径(ALT)机制调控其端粒末端。
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- 关键词：间质干细胞细胞周期
- 人骨髓间充质干细胞对外周血T淋巴细胞体外活化影响的研究
- 目的:研究人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)对人外周血T淋巴细胞体外活化的影响并初步探讨其中可能机理。方法:以植物血凝素(PHA)刺激人外周血T淋巴...
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- 文献传递
- 人端粒结合因子TRFl在端粒酶阳性和阴性细胞中定位与周期性表达的研究
- 目的:研究人端粒结合因子(Telomere Repeat Binding Factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达。方法:应用PCR技术扩增TRF1基因全长(TRF1FL)和N、C...
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- 关键词：端粒基因TRF1细胞周期
- 文献传递
- 人骨髓间充质干细胞端粒酶活性表达的研究
- 目的:间充质干细胞(Mesenchymalstemcells,MSCs)是一种具有多向分化潜能的细胞,可分化成多种间质细胞,如形成成骨细胞,脂肪细胞等。对hMSCs端粒酶活性的研究结果尚不一致,有报道呈阳性,也有报道呈阴...
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- 关键词：间充质干细胞端粒酶低温冻存脂肪细胞
- 文献传递
- Pin1在恶性血液病细胞中的表达及与细胞周期关系的研究
- 目的:Pinl(肽酰脯胺酰顺反式异构酶)是一种新近发现的端粒结合蛋白,其在许多肿瘤中被发现是高表达的,但是在恶性血液病中的表达尚不清楚。本研究探讨了Pinl在髓系、淋系十种恶性血液病细胞株以及正常人骨髓单个核细胞的表达情...
- 朱园园黄河孙洁蓝建平来晓瑜李静远施继敏余建谭亚敏林茂芳
- 关键词：白血病基因PINL细胞周期
- 文献传递
- 人端粒结合因子TRF1在端粒酶阳性和阴性细胞中定位与周期性表达的研究
- 目的:研究人端粒结合因子(Telomere Repeat Binding Factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达。方法:应用PCR技术扩增TRF1基因全长(TRF1FL)和N、C...
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- 文献传递
