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TALE重复单元四聚体库的构建方法、TALEN表达载体的构建方法及其应用: 本发明TALE重复单元四聚体库的构建方法、TALEN表达载体的构建方法及其应用，属于基因工程技术领域。所述四聚体库的构建包括构建TALE单个重复单元、构建TALE单体质粒以及在T4DNA连接酶缓冲液中加入TALE单体质粒...; 张智英张志强李铎辛颖麻丽霞王昕张涛徐华荣; 文献传递

人工转录激活因子激活小鼠内源Oct4基因的研究: 基因组靶向修饰是研究生物分子遗传与进化中的一种新方法，具有巨大的应用前景。传统基因组修饰是利用自发同源重组或逆转录病毒法，引入随机的突变，效率极低且存在安全隐患。现代的基因组修饰利用基因组靶向工具，不仅可以在特定的位点引...; 李铎; 文献传递

大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC多抗的制备及初步应用被引量：1: 2012年; 【目的】制备大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC的多克隆抗体,并用其检测酵母和肿瘤细胞中目的蛋白的表达。【方法】以WDSV基因组序列为模板,PCR扩增WDSVorfA和orfC基因,分别构建其原核表达载体,转化Rosseta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白后,采用皮下多点注射结合耳静脉加强免疫的方法免疫新西兰白兔,制备抗orfA和抗orfC的多克隆抗体,用Western blot法检测抗体的特异性。用制备的多克隆抗体检测orfA和orfC融合蛋白在酵母和HeLa299、SPC-A-1肿瘤细胞中的表达。【结果】PCR扩增获得了WDSVorfA和orfC基因。成功构建了orfA和orfC基因的原核表达载体并进行了诱导表达,orfA和orfC重组融合蛋白以包涵体形式存在;采用皮下注射结合耳静脉加强免疫有效地提高了抗体效价,成功制备得到了兔抗orfA和兔抗orfC血清,抗体效价达1∶8 000～1∶10 000;通过Western blot法,利用上述抗血清分别检测到了原核表达的目的蛋白及酵母和肿瘤细胞中表达的目的蛋白。【结论】制备得到的抗orfA和抗orfC多克隆抗体具有很好的特异性,能够用于原核表达、酵母和肿瘤细胞中表达的目的蛋白的Western blot检测。; 李铎徐坤王亮亮周罡麻丽霞张智英

利用结构优化的TALE-TF高效诱导MEF细胞内源基因Oct4的表达（英文）: 2017年; 转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)已用于基因组编辑,而TALE转录激活因子(TALE-TFs)可用于内源基因的调控。通过修饰的TALE蛋白与内源基因的启动子特异性结合来激活或抑制基因的表达。但是,对于截短了N端的TALE是否会影响TALENs的效率还不确定。本文设计了不同长度N端的TALENs哺乳动物及酵母表达载体,对应哺乳动物绿色荧光报告载体及酵母报告载体。分别在哺乳动物细胞和酵母细胞上对不同长度N端TALENs的活性进行了检测。检测结果发现,含120个氨基酸N端的TALEN在酵母AH109细胞中的活性最高,N端长度为153个氨基酸的TALENs在293T细胞中表现最高的活性,但N端长度为153、140和160个氨基酸的TALENs的活性差异不显著(P>0.05)。随后,将结构优化了的TALE-TF用于小鼠胎儿成纤维细胞中激活Oct4基因。相对阴性对照组,TALE-TF将Oct4基因表达量上调了418倍。本研究结果表明,在哺乳动物细胞和酵母细胞中,具有最高活性TALENs的N端长度是不同的。本研究用结构优化的TALE-TF诱导内源基因高水平的表达,为从体细胞中获得iP S细胞提供了研究策略。; 吴芸张志强李铎徐坤韩芙蓉任充华闫强王昕张智英

一种自制的RNA分离试剂及其在鱼组织总RNA提取中的应用被引量：1: 2012年; 【目的】尝试自制一种价格低廉的RNA分离试剂,并检验其应用效果。【方法】以商业化的TRizolReagent为对照,使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA,采用分光光度计法、变性琼脂糖凝胶电泳法和RT-PCR检测其品质,并用提取的总RNA合成草鱼皮肤cDNA。同时使用自制RNA分离试剂提取斑马鱼总RNA,通过RT-PCR进行E2F5基因全长(1 092bp)的克隆,构建其真核和酵母表达载体并测序。【结果】使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA的品质与用TRizol Reagent提取的总RNA品质相当,用之成功地合成了草鱼皮肤cDNA。使用自制RNA分离试剂提取得到了更高品质的斑马鱼总RNA,用之成功地克隆了斑马鱼E2F5基因,构建了其真核表达载体pcDNA3.1-flag-Zf E2F5和酵母表达载体pGAD GH-Zf E2F5。【结论】自制RNA分离试剂能够用于鱼类组织总RNA的提取,提取的总RNA能满足后续cDNA合成及RT-PCR克隆特定基因的需要。; 徐坤李铎张优优李陇平麻丽霞张智英; 关键词：总RNA

一种由口服基因工程发酵酵母介导的小鼠肠道DC细胞表达外源和内源基因的方法及应用: 本发明涉及一种由口服基因工程发酵酵母介导的小鼠肠道DC细胞表达外源基因和内源基因的方法及应用，属于免疫学和基因工程技术领域。所述基因工程发酵酵母含有真核基因表达载体JMB84-CMV-β-catenin-HA-T2A-G...; 张智英赵蕊张婷婷麻丽霞张优优李欣憶张龙李铎; 文献传递

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李铎