李涛
- 作品数：13 被引量：37H指数：4
- 供职机构：福建农林大学更多>>
- 发文基金：福建省农业科技重点项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 肠炎沙门菌鞭毛蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备被引量：4
- 2016年
- 利用PCR技术成功扩增到了肠炎沙门菌鞭毛蛋白fliC基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a(+)-fliC。将pET-32a(+)-fliC转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,并在30℃下用终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导表达9h。表达的重组蛋白通过镍离子亲和层析和分子筛的方法进行纯化,获得的蛋白用SDS-PAGE方法进行分析。对纯化的重组蛋白进行定量和内毒素测定后,用其免疫SPF鸡,制备超免疫血清。纯化的FliC蛋白与其受体之间的相互作用通过流式细胞仪进行分析。结果显示,成功扩增到了长度为1518bp的全长fliC基因,该基因编码的蛋白在30℃下以可溶性形式表达,经过镍离子亲和层析与分子筛的方法获得的FliC蛋白的纯度高,其内毒素的含量低于0.5EU/mL,并能够结合该蛋白在细胞上的受体。用纯化的重组蛋白免疫鸡获得的阳性血清的效价为1∶12 800。上述结果为进一步研究FliC蛋白的免疫学功能奠定了基础。
- 史冰田王高玲郭杰司微李涛王斌刘恒贵
- 关键词：肠炎沙门菌鞭毛蛋白原核表达阳性血清
- 犬细小病毒多重PCR检测方法的建立和临床应用被引量：2
- 2014年
- 犬细小病毒病是由犬细小病毒（Canine paryovir—us，CPV）引起的多发生于幼犬的致死性传染病，主要表现为出血性肠炎和心肌炎。CPV属于细小病毒科细小病毒属猫细小病毒亚群，其基因组为单股负链DNA。该病毒最早由美国学者A．K．Eugster等。
- 李涛王高玲王斌修金生胡崇伟马金友
- 关键词：犬细小病毒病PCR检测方法出血性肠炎心肌炎
- 猪嵴病毒实时荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：9
- 2012年
- 目的本研究根据GenBank中登录猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)株的3D蛋白序列基因特征,设计特异性引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测PKV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果该方法检测PKV的3D基因在6.42×102～6.42×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,其扩增相关系数为0.999,扩增效率为100%,扩增产物的融解曲线分析只出现1个单特异峰,融解温度为(84.94±0.24)℃,对传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒均检测不到荧光信号,特异性强。所建立实时荧光定量RT-PCR方法组内变异系数为0.26%～1.14%,组间变异系数0.63%～1.79%,重复性好。结论本方法的建立为PKV的早期诊断及定量分析PKV感染水平和确定感染靶器官提供新的检测方法。
- 修金生陈小权王斌李涛
- 关键词：SYBR实时荧光定量RT-PCR
- 猪B7-H4的克隆鉴定与单克隆抗体制备
- B7家族分子是T细胞免疫应答的重要调控分子之一,在抗病毒和抗肿瘤免疫应答中发挥重要的免疫调节作用.B7-H4分子是新发现的B7家族成员之一,在人和小鼠中研究表明,它对T细胞免疫应答具有负调控功能.目的:克隆鉴定猪B7-H...
- 刘培欣李涛彭金美田志军刘恒贵
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- hilA基因两端51bp序列对示踪标记性绿色荧光蛋白在禽肠炎沙门氏菌中倍增表达效率的鉴定被引量：2
- 2015年
- 为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插入p MD18-T载体中构建p MD-e GFP原核表达重组质粒,将其转化于S.enteritidis。结果显示e GFP能够在S.enteritidis中持续表达。进一步将S.enteritidis hil A基因两端的51 bp序列分别添加到p MD-e GFP中e GFP表达盒的两端,构建p MD-He GFP重组质粒。荧光显微镜观察和流式细胞仪分析与p MD-e GFP相比,p MD-He GFP转化S.enteritidis后,其e GFP的荧光强度提高约30倍。通过在无抗生素选择压力下连续传20代次,重组S.enteritidis中e GFP仍然能够稳定表达。本研究结果为进一步研究S.enteritidis在动物体内的分布和定植规律等提供了一种具有荧光示踪标记的目标菌,并为其他细菌的同类研究提供了借鉴。
- 王高玲李涛史冰田司微王斌刘恒贵
- 关键词：肠炎沙门氏菌绿色荧光蛋白荧光标记
- 重组牛白细胞介素-2的高效表达及其生物学活性的测定被引量：8
- 1998年
- 以ＰＣＲ方法扩增重组牛白细胞介素２基因，获得带有ＡＴＧ的完整牛白细胞介素２基因片段。以ｐＢＶ２２０为表达质粒，成功地构建了重组牛白细胞介素２的高效表达载体ｐＢＶｍＢｏＩＬ２，并转入Ｅ．ｃｏｌｉ。诱导表达结果表明，表达的重组牛白细胞介素２占总菌体蛋白的２２％以上，比原来提高２倍。活性测定结果表明，表达的重组牛白细胞介素２具有极显著的体外增殖活化淋巴细胞的活性，重组牛白细胞介素２的分子量约为１５４８８。
- 金红李祥瑞李涛于康震卢景良
- 关键词：白细胞介素2MTT比色法
- 基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)HN随机酵母展示文库的建立
- 病毒感染宿主后,病毒蛋白在体内可以诱导体液免疫应答,因此,揭示各种病原蛋白在体内诱导体液免疫应答的机制是病毒抗原学研究的重要内容之一.随着免疫技术的发展与应用,目前研究报道了多种研究抗原学的高通量技术,其中酵母展示表达技...
- 李涛刘培欣王斌刘怀然刘恒贵
- 猪输血传播病毒2型福建株ORF1基因特征被引量：1
- 2013年
- 参照GenBank中登录的猪输血传播病毒2型(Torque Teno Virus genogroup 2,TTV2)ORF1基因序列特征设计特异性引物,采用PCR方法对从福建省某猪场采集的血液基因组DNA中扩增到猪输血传播病毒2型ORF1基因,并对目的片段进行克隆测序。结果表明,所扩增的目的片段编码有TTV2完整的ORF1基因开放阅读框,全长为1 875bp,编码有624个氨基酸。运用生物信息学软件,将获得猪TTV2福建株ORF1基因序列和GenBank中登录的猪TTV2进行分析比较,其和FJ/China/2010/TTV2/2(GenBank登录号JF937656)的同源性高达98.8%,和四川株(GenBank登录号HQ204188)核苷酸同源性最低,仅为83.5%。从遗传进化上看,猪输血传播病毒2型可以分为3个明显的分支亚群,福建分离株在基因1群和基因2群均有分布,推测福建省存在多亚群猪TTV2流行。
- 修金生陈如敬吴学敏王斌李涛林群群
- 关键词：ORF1基因
- 猪嵴病毒福建株全基因克隆及序列分析
- 2013年
- 目的为研究猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)福建株的基因组结构特征。材料与方法根据猪嵴病毒基因组特征设计特异性引物,运用RT-PCR方法,对猪嵴病毒福建株进行全基因克隆,并运用RACE方法对猪嵴病毒福建株的5’和3’末端进行扩增。结果与结论所获得的猪嵴病毒福建株基因组全长为8 210bp,其5’末端长度为576bp,3’末端长度为167bp,编码一个大的多聚蛋白,长度为7 467bp,编码2 488个氨基酸。其多聚蛋白核苷酸同源性和我国猪嵴病毒分离株CH/HNXX-4/2012(GenBank登录号JX401523)同源性最高,均为89.2%,和匈牙利猪嵴病毒分离株swine/S-1-HUN/2007/Hungary(GenBank登录号(GenBank登录号EU787450)同源性最低,达87.6%。
- 修金生胡崇伟陈如敬王斌李涛陈秋勇林群群
- 关键词：基因组基因结构
- 基于SYBR Ⅰ实时荧光定量PCR对猪流行性腹泻病毒野毒和疫苗弱毒鉴别诊断方法的建立被引量：7
- 2012年
- 本研究参考GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)野毒株和弱毒疫苗株(CV777弱毒疫苗株)在高度保守ORF3基因核苷酸序列的差异,设计一对特异性荧光定量引物,分别建立基于SYBRⅠ实时荧光定量RT-PCR方法。结合熔解曲线分析可见,其野毒株和弱毒疫苗株熔解温度(Tm)分别为(81.84±0.17)℃和(83.16±0.14)℃,扩增产物的熔解曲线分析均只出现1个单特异峰,对传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒均检测不到荧光信号。结合熔解曲线可直接鉴别猪群中PEDV的感染情况和程度,可对免疫猪群PEDV野毒感染和疫苗免疫做出快速准确的鉴别诊断,尤其是对PEDV弱毒疫苗免疫后仍爆发PEDV野毒感染的研究更有临床意义。
- 修金生陈小权王斌李涛
- 关键词：猪流行性腹泻病毒熔解曲线
