李慧萍
- 作品数：8 被引量：14H指数：3
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- 基于冰核蛋白的狂犬病毒糖蛋白细菌表面展示被引量：3
- 2010年
- 为验证冰核蛋白表面展示系统的可行性与优越性,将编码狂犬病毒(Rabies virus,RV)主要免疫保护性抗原糖蛋白G基因片段融合到丁香假单胞菌冰核蛋白截断的N端,构建表面展示载体pET28a-INP-RVG。转化大肠埃希菌BL21(DE3)后16℃低温诱导表达,SDS-PAGE检测表明在约78 ku和56 ku处有明细的蛋白带出现,大小与理论值相符。完整细胞ELISA实验结果表明,重组蛋白在大肠埃希菌表面成功展示。为进一步研制基于沙门菌的多抗原表位展示性重组疫苗、新型狂犬病疫苗奠定基础。
- 郭恒刘娟李慧萍王学林孙树民张茂林高丽芳徐德启刘明远
- 关键词：狂犬病毒大肠埃希菌
- 牛肉中阿苯达唑及其代谢产物残留的检测被引量：2
- 2011年
- 阿苯达唑是一种广谱抗蠕虫药,但是由于用药不当等原因,其在动物可食性组织中的残留可能刺激神经系统及消化系统、触发过敏反应甚至出现肝功能异常。本试验基于5μg/kg的检验限建立牛肉中的阿苯达唑及其代谢产物的检测方法——高效液相色谱法。样品中残留的阿苯达唑及其主要代谢产物阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜,经乙醚提取,乙腈和己烷萃取,由高效液相色谱(配紫外检测器)测定得到阿苯达唑及其亚砜与砜的平均回收率分别为71.8%～88.6%、78.1%～85.6%和83.1%～91.9%,变异系数分别为2.8%～9.2%、0.9%～4.9%和1.4%～4.8%。
- 李慧萍毕文岩郭恒刘娟王学林孙树民刘明远
- 关键词：阿苯达唑HPLC药物残留
- NirB启动子调控下鼠沙门氏菌体内诱导型表达载体的构建
- 2011年
- 目的构建遗传稳定性良好的沙门氏菌体内诱导型表达载体。方法以克隆载体pGB2为基础,将沙门氏菌厌氧启动子PnirB和EGFP基因串联,并在其多克隆位点MCS下游引入rrnbT1T2转录终止序列,构建沙门氏菌低拷贝体内诱导型表达载体pGnirB-EGFP-rrnb,电转化入鼠伤寒沙门氏菌phoP/phoQ株,对质粒的稳定性及蛋白表达情况进行检测。结果含有低拷贝重组质粒的沙门氏菌在缺失抗生素选择压力下盲传100代后质粒稳定性高于95%,在厌氧静置72 h培养后激光共聚焦显微镜下可观察到明显绿色荧光。结论高度稳定的沙门氏菌体内诱导型表达载体构建成功,为研制以鼠伤寒沙门氏菌为活载体的新型口服疫苗奠定了基础。
- 郭恒王学林李慧萍刘学张凌怡唐艺芝高鹤杨秀丽徐德启刘明远王光明
- 关键词：沙门氏菌疫苗
- 喜树碱对NIH／3T3细胞TLR3表达及活化的影响
- 2012年
- 为研究喜树碱(CPT)对小鼠成纤维细胞NIH/3T3中Toll样受体3(TLR3)的表达及活化的影响,本实验利用CCK-8试剂盒测定了CPT在不同浓度下、不同作用时间对NIH/3T3细胞的毒性作用,并确定CPT对NIH/3T3细胞的基本无毒浓度为1μg/mL。通过流式细胞术检测CPT作用NIH/3T3细胞表明,TLR3平均荧光强度与对照组相比显著增强,表明TLR3表达增加。此外,ELISA试剂盒检测结果显示CPT作用后IFN-β表达量增加,并高于阳性对照组,差异极显著(p<0.01)。本研究表明CPT对NIH/3T3细胞的TLR3具有显著的激动作用。
- 刘学张馨月吴秀萍白雪李慧萍郭恒孙树民王学林刘明远
- 关键词：喜树碱激动剂
- 旋毛虫A200711蛋白的原核表达、纯化及其对H7402细胞增殖的影响被引量：3
- 2012年
- 目的原核表达旋毛虫抗肿瘤基因A200711,并纯化该蛋白,CCK-8检测其对H7402人肝癌细胞的生长抑制作用。方法 PCR获得A200711基因片段,构建重组表达载体pET-28a(+)-A200711,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)。SDS-PAGE及Western blot检测IPTG诱导后重组菌,采用Ni-NTA亲合层析柱纯化并柱上复性目的蛋白。细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测A200711蛋白对H7402细胞的生长抑制作用。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-A200711,目的蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE及Western blot分析显示,相对分子量约22KD处出现目的蛋白条带,与理论值相符;经Ni-NTA亲合层析柱获得了高纯度可溶性的A200711蛋白;H7402细胞增殖抑制率与A200711蛋白浓度存在量效关系,同时随作用时间的延长增殖抑制率也明显增加。结论成功克隆、表达并纯化了旋毛虫A200711蛋白。A200711蛋白可抑制H7402细胞的增殖,且呈现时效和量效关系,本研究表明旋毛虫A200711蛋白作为潜在的抗肝癌生物制剂有进一步研究的价值。
- 李慧萍刘学张馨月郭恒赵丽晶刘攀孙树民褚丽新刘娟刘明远王学林
- 关键词：旋毛虫抗肿瘤原核表达
- siRNA特异性抑制犊牛原代肝细胞SREBP-1c基因的表达被引量：3
- 2011年
- 固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)是脂肪合成基因的重要转录调节因子,又称脂肪细胞决定和分化因子1。SREBP-1c主要在动物肝脏和脂肪细胞中表达,是脂肪代谢中重要的核转录因子,它可以通过调节脂肪代谢相关酶基因的表达来调控动物体内的脂肪合成。本试验设计合成了SREBP-1c的siRNA,通过脂质体转染将siRNA转染进犊牛原代肝细胞,用实时荧光相对定量PCR检测siRNA对SREBP-1c基因表达量的影响。结果显示:siRNA通过脂质体成功转入犊牛原代肝细胞;与对照组相比,一组转染细胞在mRNA水平检测到较低的SREBP-1c基因表达量。这表明siRNA可以稳定地在犊牛原代肝细胞中表达,并且对靶基因呈现出抑制作用。该研究为在基因水平防治奶牛肝脂沉积提供了基础。
- 邓清华付世新刘国文刘磊王建国白鸽朱晓岩李慧萍李小兵王哲
- 关键词：SIRNARNA干扰固醇调节元件结合蛋白-1C
- RV-G/LTB双基因融合真核表达质粒的构建及其在Vero细胞中的表达被引量：2
- 2011年
- 目的构建RV-G/LTB双基因融合真核表达质粒,并在Vero细胞中表达。方法应用重叠延伸PCR方法,采用一定的linker序列(Gly4Ser)2将已克隆的狂犬病病毒糖蛋白(Rabies virus glycoprotein,RV-G)基因片段和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(E.coli heat-labile enterotoxin subunit B,LTB)基因片段进行融合,扩增融合基因G-linker-LTB,并插入真核表达质粒pVAX1中,构建重组真核表达质粒pVAX1-G-linker-LTB,转染Vero细胞,间接免疫荧光试验和Western blot法检测融合蛋白的表达。结果重组真核表达质粒pVAX1-G-linker-LTB经双酶切及测序鉴定证明构建正确,转染Vero细胞后,可检测到融合蛋白的表达。结论已成功构建了RV-G/LTB双基因融合真核表达质粒,并在Vero细胞中表达了融合蛋白。
- 刘娟刘明远于录郭恒李扬赵丽晶孙树民李慧萍刘学王学林
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白类VERO细胞
- 旋毛虫抗肿瘤蛋白基因的克隆、表达及其诱导H7402细胞凋亡研究
- 世界卫生组织公布数据显示，世界每年新增肝癌患者超过100万人，死亡人数达61万人。中国每年新增肝癌人数34万人，肝癌死亡人数11万，是全球肝癌发病率和死亡率最高的国家。目前手术切除对早期肝癌患者的治疗效果显著，但由于肝癌...
- 李慧萍
- 关键词：旋毛虫原核表达细胞凋亡
- 文献传递
