曹云新
- 作品数：208 被引量：1,023H指数：16
- 供职机构：第四军医大学基础医学部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学电子电信自动化与计算机技术更多>>
- 人肝再生磷酸酯酶2(PRL-2)的原核表达及其鸡卵黄抗体的制备被引量：1
- 2004年
- 目的 :原核表达人肝再生磷酸酯酶 2 (PRL 2 )与谷胱甘肽S转移酶 (GST)和 6个串联组氨酸 (6×His)的融合蛋白 ,并制备GST PRL 2特异性鸡卵黄抗体。方法 :将人PRL 2cDNA的全长蛋白编码序列 ,克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pET2 1a中 ,在大肠杆菌BL2 1中诱导表达融合蛋白。用Glu tathioneSepharose 4B和Ni NTAagarose亲和柱分别纯化目的蛋白。以纯化的GST PRL 2融合蛋白免疫产蛋母鸡制备多克隆抗体 ,应用 6×His PRL 2对抗体进行亲和层析纯化 ,纯化产物用Westernblot进行分析。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化后获得较高纯度的GST PRL 2和 6×HisPRL 2融合蛋白。以GST PRL 2融合蛋白免疫鸡得到抗PRL 2的多克隆抗体 ,Westernblot证实 ,经 6×HisPRL 2亲和层析纯化的抗体 ,能够识别 6×His PRL 2和GST PRL 2融合蛋白 ,但不同GST蛋白起反应 ,表明具有较高的特异性。结论 :利用原核表达的人PRL 2融合蛋白制备的抗PRL 2多克隆抗体具有较好的特异性 ,为研究PRL
- 郭爱林曹云新王文丁波黄郁强文剑明
- 关键词：融合蛋白鸡卵黄抗体
- IFN-α对肿瘤细胞上TRAIL受体DR4和DR5表达的调节及意义被引量：3
- 2005年
- 目的 研究IFN- α对肿瘤细胞Colo205TRAIL功能受体DR4和DR5表达的调节作用,以及IFN -α刺激与肿瘤细胞对rTRAIL诱导凋亡敏感性的影响。方法 Colo205细胞以IFN- α刺激 0、24、48和 72h;采用RT PCR方法检测DR4和DR5基因表达;用间接免疫荧光染色结合流式细胞技术检测细胞表面DR4和DR5分子表达;采用annexinV和碘化丙锭双染色试剂盒检测细胞凋亡。结果 IFN -α刺激后,DR4和DR5的mR NA在细胞表面的表达均有增加,刺激 48h,膜型DR4和DR5表达达到高峰值 (16. 7%和 29. 8% );rTRAIL凋亡诱导效应在IFN- α刺激 48h的Colo205细胞中最高。结论 IFN -α上调死亡受体DR4、DR5的表达可能是其促进rTRAIL诱导肿瘤凋亡的重要机制。
- 李妍曹云新张赟黄海燕金伯泉
- 关键词：IFN-ΑDR4DR5肿瘤
- 左旋卡尼汀对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤的保护作用被引量：6
- 2004年
- 目的 :探讨左旋卡尼汀 (L carnitine)对乳鼠心肌细胞在模拟缺血 (缺氧 )再灌注 (缺氧 复氧 )状态下发生损伤的保护作用及其可能的机制 .方法 :培养出生 1 3d的SD乳鼠心肌细胞 ,建立缺血再灌注损伤 (I/R)模型 ,实验分 3组 :①正常对照组 (Control) ;②I/R组 :缺氧 1 2 0min ,复氧 2 4 0min;③左旋卡尼汀组 :I/R之前 2h加入不同浓度左旋卡尼汀 ,使其终浓度分别为 1组 2 0mg/L ,2组 5 0mg/L ,3组 1 0 0mg/L ,4组2 0 0mg/L .观察指标包括 :①超氧化物酶 (SOD)活性 ;②丙二醛 (MDA)含量 ;③琥珀酸脱氢酶 (SDH)活性 ;④流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡率 .结果 :I/R组心肌细胞内MDA含量明显升高 ,SOD活性显著下降 ,琥珀酸脱氢酶 (SDH)活性明显变低 ,而且细胞凋亡率也显著增加 ,与Control组比较具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;但是在药物治疗组 ,随给药浓度的增加 ,MDA含量逐渐恢复正常 ,SOD活性逐渐回升 ,SDH活性明显升高 ,而且细胞凋亡率呈下降趋势 ,各药物治疗组与I/R组比较各实验指标均具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,表明心肌细胞在经左旋卡尼汀预处理之后 ,抗损伤能力加强 ,发生损伤的程度减少 .结论 :左旋卡尼汀对心肌细胞具有保护作用 。
- 杨勇贾国良郭文怡张荣庆曹云新王琼杨省利
- 关键词：细胞低氧再灌注损伤脱噬作用
- 毛乳头细胞诱导表皮干细胞向毛囊分化
- 目的利用毛乳头细胞诱导表皮干细胞分化为毛囊,解决组织工程皮肤缺乏皮肤附件的问题。方法Ⅳ型胶原快速贴附法体外分离和培养胎儿的表皮干细胞,改良法分离培养胎儿毛乳头细胞,以纤雏蛋白凝胶为真皮支架,种植毛乳头细胞,外覆表皮干细胞...
- 丁国斌陈璧韩军涛王洪涛曹云新
- 关键词：毛乳头细胞
- 文献传递
- 拓扑异构酶Ⅰ抑制剂对K562细胞的杀伤与诱导凋亡作用被引量：13
- 2002年
- 背景与目的:近年发现,拓扑异构酶Ⅰ抑制剂对加速期或急变期的慢性髓细胞白血病有较好疗效。为了深入理解拓扑异构酶Ⅰ抑制剂这一新的药理作用,本研究采用具有慢性髓细胞白血病特征性异常染色体犤t(9;22)犦的K562细胞株为实验对象,进一步探讨拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康(topotecan)对靶细胞的杀伤与诱导凋亡活性。方法:采用MTT法测定拓扑替康对K562细胞的杀伤作用;通过形态学与AnnexinVFITC染色,研究拓扑替康对靶细胞的促凋亡活性;采用caspase-8特异性抑制剂IETD-fmk,分析拓扑替康介导的细胞杀伤或凋亡和caspase活化的关系。结果:经0.15μmol/L拓扑替康处理至12、24、48及72h时,K562细胞的存活率与对照相比,逐渐降至(92±36)%犤P>0.05vs(94±27)%犦、(68±21)%犤P<0.05vs(119±13)%犦、(54±15)%犤P<0.05vs(132±31)%犦及(21±10)%犤P<0.01vs(114±19)%犦;同时,靶细胞出现磷脂酰丝氨酸外翻、细胞固缩、染色质边集、核碎裂,最终解离为大量凋亡小体;经caspase-8抑制剂与拓扑替康联合处理至24、48h时,K562细胞的存活率依然维持在(95±29)%与(87±11)%,后者显著高于单用拓扑替康者犤P<0.05vs(54±15)%犦,且无明确的凋亡小体形成。
- 陈协群万幼峰白庆咸曹云新
- 关键词：拓扑替康K562细胞凋亡杀伤CASPASE-8拓扑异构酶I抑制剂
- 次声作用对大鼠海马细胞凋亡的影响被引量：4
- 2004年
- 目的:探讨8Hz,90dB次声作用对海马细胞凋亡的影响。方法:将48只雄性SD大鼠单纯随机分为6个组,即对照组、次声作用1,7,14,21,28d组,每组8只。采用急性细胞分离技术,通过流式细胞仪观察大鼠脑海马细胞凋亡状况。结果:频率8Hz,声压级90dB次声分别作用2h/d后,次声暴露组与对照组比较,1d组未见海马细胞凋亡增高(P>0.05),7d组可见海马细胞凋亡增高(F=42.18,P<0.01),14d组明显升高(F=42.18,P<0.01),21d组凋亡细胞较14d组明显减少(F=42.18,P<0.01)但仍高于对照组(F=42.18,P<0.05),至28d组与对照组已差异无显著性意义(P>0.05)。结论:次声8Hz,90dB作用一定时间后可导致海马细胞凋亡数量有不同程度增高;随作用时间延长,海马细胞对次声作用产生适应性。8Hz,90dB次声作用对大鼠海马细胞具有一定的损伤效应。
- 曹云新刘朝晖陈景藻金伯泉
- 关键词：次声作用海马细胞细胞凋亡流式细胞仪
- 次声作用对大鼠海马细胞凋亡的影响及其作用规律被引量：1
- 2004年
- 目的:探讨8Hz,130dB次声作用对海马细胞凋亡的影响。方法:将雄性SD大鼠48只随机分为6个组,即对照组、次声作用1,7,14,21,28d组,每组8只。采用急性细胞分离技术、荧光染色和流式细胞仪观察大鼠脑海马细胞凋亡率。结果:频率8Hz,声压级130dB次声分别作用2h/d后,次声暴露组与对照组比较,1d组和7d组未见海马细胞凋亡率增高(P>0.05),14d组海马细胞凋亡率显著升高(F=423.05,P<0.01),21d组凋亡细胞稍有回落,但仍显著高于对照组(F=423.05,P<0.01),至28d组与对照组差异无显著性意义(P>0.05)。结论:8Hz,130dB次声作用一定时间后可导致海马细胞凋亡数量显著增高;8Hz,130dB次声作用对大鼠海马细胞具有损伤效应。随作用时间延长,海马细胞对次声作用产生一定适应性。
- 刘朝晖曹云新陈景藻
- 关键词：次声作用海马细胞细胞凋亡荧光染色流式细胞仪
- 抗人CD100单克隆抗体的制备与初步鉴定被引量：16
- 2003年
- 目的:研制可识别天然CD100分子的单克隆抗体(mAb)。方法:采用真核表达的CD100分子免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤,并分别用人急性T淋巴细胞性白血病细胞系MOLT-4、猿T淋巴细胞系MLA-144及猴EB病毒转化的B淋巴细胞系(BLCL),进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性。结果:共获得7株可稳定分泌 mAb的杂交瘤细胞株。所有mAb均可识别人和猴细胞系的膜表面天然CD100分子,其中6株可识别猿细胞系膜表面的天然CD100分子。结论:成功地制备了7株抗CD100分子的特异性mAb,为研究人和猿、猴CD100分子的结构与功能提供了新的手段。
- 许晓光朱勇刘雪松田莹曹云新刘莹户义金伯泉
- 细胞因子调节血管内皮细胞凋亡相关配体和受体在大骨节病病理机制中的作用被引量：2
- 2005年
- 目的探讨细胞因子调节血管内皮细胞凋亡相关配体和受体在大骨节病病理机制中的作用。方法用IFN-γ、IFN-α和TNF刺激ECV304细胞48 h后,采用流式细胞术分析细胞膜表面Fas、TRAIL、DR4和DR5的表达水平。结果静止ECV304细胞膜表面有Fas、TRAIL、DR4和DR5等分子不同水平的组成性表达,IFN-γ、IFN-α和TNF等细胞因子刺激后,Fas、TRAIL和DR4表达增加,其中IFN-γ对Fas的上调作用最显著,可使表达Fas细胞的阳性率从77.8%上升至98.4%;3种细胞因子对DR5的上调作用不明显。结论IFN-γI、FN-α和TNF等细胞因子通过上调内皮细胞死亡配体/受体Fas、TRAIL、DR4和DR5的表达,诱导内皮细胞凋亡,影响软骨细胞的血液和氧供应,导致软骨细胞发生坏死,很可能参与大骨节病的病理损伤的分子机制。
- 朱参胜金伯泉欧阳为明曹云新冯清华白广禄梁晓聪
- 关键词：细胞因子内皮细胞大骨节病
- FAP-1反义寡核苷酸联合卡铂对卵巢癌细胞SKOV3凋亡的作用被引量：2
- 2004年
- 背景与目的实验已证明,Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)在卵巢癌细胞SKOV3中有高表达,可能对卵巢癌的发病与耐药具有重要意义。本研究应用反义核酸技术探讨FAP-1反义寡核苷酸(FAP-1ASODN)联合卡铂对SKOV3细胞凋亡的作用。方法反义核苷酸技术将FAP-1ASODN转染SKOV3细胞。采用逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测转染前后FAP-1mRNA的表达,采用流式细胞术(FCM)分析细胞周期与细胞凋亡率,噻唑蓝法(MTT法)测定FAP-1ASODN与40μg/ml卡铂共同作用后对SKOV3细胞生长的影响。结果经FAP-1ASODN处理24h后,与对照组及FAP-1正义寡核苷酸(SODN)组比较,反义组的FAP-1mRNA表达明显减弱。FCM结果显示,卡铂+FAP-1ASODN组在24～72h的细胞凋亡率明显高于单用ASODN组及单用卡铂组,差异有显著性(P<0.05),且可将细胞周期阻滞于G1期;MTT结果显示,卡铂+FAP-1ASODN组12～96h的细胞抑制率约为单用ASODN组的1.5～2倍,约为单用卡铂组的1.5倍,明显高于后两者,差异有显著性(P<0.05);而在单用卡铂组与卡铂+FAP-1SODN组间无显著性差异(P>0.05)。结论FAP-1ASODN转染可以有效抑制FAP-1基因的表达,同时可以增强卵巢癌细胞对卡铂诱导凋亡的敏感性。
- 王滨郑维国辛晓燕齐荣义于月成曹云新
- 关键词：FAS相关磷酸酯酶-1反义寡核苷酸卡铂凋亡
