方盼盼 作品数:5 被引量:10 H指数:2 供职机构: 郑州大学第三附属医院 更多>> 发文基金: 河南省基础与前沿技术研究计划项目 河南省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
急进高原后外周血单个核细胞内相关易感基因表达与急性高原反应分析 2013年 目的探讨低氧诱导因子1(HIF-1α)、P38 MAPK和血管内皮生长因子(VEGF)在急进高原后外周血单个核细胞的表达变化,以及其与急性高原反应(AMS)的关系。方法对某部队赴青海省玉树抗震的官兵分别于进入高原前后48 h采集外周血,提取单个核细胞用RT-PCR法检测P38 MAPK及HIF-1αmRNA表达,Western blot法检测HIF-1α及VEGF蛋白表达。按照《急性高原反应的诊断和处理原则》诊断AMS。结果与进入高原前相比,HIF-1αmRNA和蛋白表达水平及P38 MAPK mRNA表达水平均明显增高(P<0.001);VEGF蛋白水平也上调(P<0.01);HIF-1α及VEGF蛋白表达水平与AMS的发病程度高度相关,相关系数分别为0.875和0.675(P<0.001)。结论 HIF-1α、P38 MAPK和VEGF在急进高原48 h后表达水平均显著增加,HIF-1α和VEGF蛋白表达水平与AMS发病呈显著正相关。 方盼盼 宫璀璀 仓宝成 李正民 李宗杰 李文莉 朱传杰 王迎涛关键词:急性高原反应 低氧诱导因子1 HIF-1α和RelA基因在急进高原正常人外周血单个核细胞中的表达及其与急性高原反应的关联性 被引量:2 2013年 目的:观察急进高原前后正常人单个核细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和核转录因子NF-κB p65亚基(RelA)表达水平的变化,探讨HIF-1α和RelA在急性高原反应(AMS)发生中的作用及机制。方法:对某部赴玉树抗震的士兵分别于进入高原前和进入高原后48h采集外周血,提取单个核细胞中的mRNA和蛋白,采用RT-PCR方法检测RelA和HIF-1αmRNA表达水平,Western blotting法检测HIF-1α蛋白表达水平。Spearman相关分析法分析RelA和HIF-1α基因表达与AMS发生的相关性。结果:与急进高原前比较,进入高原后HIF-1α和RelA mRNA及HIF-1α蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);HIF-1αmRNA和RelA mRNA表达呈正相关关系(r=0.806,P<0.01);HIF-1α蛋白表达与AMS的发生率呈正相关关系(r=0.875,P<0.01);HIF-1α和RelA表达不同性别之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HIF-1α蛋白表达水平可作为预测和干预AMS的监测指标。急进高原后HIF-1α和RelA mRNA表达水平显著增加且呈显著正相关关系,提示在其信号传导通路之间存在cross-talk现象。 方盼盼 宫璀璀 仓宝成 李正民 李宗杰 李文莉 朱传杰 王迎涛关键词:急性高原反应 核转录因子KAPPAB CROSS-TALK 抗凝血酶基因10381T缺失导致的Ⅰ型抗凝血酶缺陷症 被引量:3 2014年 目的对1例遗传性抗凝血酶(AT)缺陷症先症者及其家系进行表型诊断和基因诊断,并探讨其家系成员发病机制。方法用发色底物法检测该家系9名成员的AT活性(AT∶A)、蛋白S活性(PS∶A)、蛋白C活性(PC∶A),用免疫比浊法检测AT抗原量(AT∶Ag),用Western blot检测血浆中的AT分子质量和含量,抽提外周血基因组DNA,用PCR对AT基因的7个外显子及其侧翼序列进行扩增,用直接测序法对该家系所有成员的扩增产物进行测序分析并进行基因突变检测,同时筛查100例正常人以排除基因突变的多态性。结果该家系先症者AT∶A和AT∶Ag分别为48%和121 mg/L,先症者AT基因的第6外显子发现10381T del。其家系的部分成员检测到相同的移码突变。结论该家系先症者及部分成员存在Ⅰ型遗传性抗凝血酶缺陷症,是由AT基因10381T del移码突变所致。 李正民 宫璀璀 吕金利 方盼盼 王广兰 伦永志 白洁关键词:抗凝血酶 基因突变 易栓症 人sCR1转化克隆菌的快速筛选和鉴定 被引量:3 2013年 目的用G418快速筛选及鉴定重组人可溶性补体受体1型(sCR1)高拷贝转化克隆菌。方法采用的sCR1重组质粒,经电转化将其克隆入酵母SMD1168细胞株中,利用G418的抗性,快速筛选转化克隆菌,并对克隆菌株提取基因组DNA进行聚合酶链反应(PCR)鉴定;该克隆菌经甲醇诱导培养后,对其表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot鉴定分析。结果从G418快速筛选的毕赤酵母克隆菌株中提取的基因组DNA进行PCR鉴定,获得了高拷贝整合的重组毕赤酵母克隆菌株,经诱导培养后,对其表达产物进行SDS-PAGE及Western blot鉴定分析,该表达蛋白在SDS-PAGE上表现为相对分子质量大于30 000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别,成功获得高拷贝整合的重组毕赤酵母细胞株,可表达出重组人sCR1融合蛋白。结论经高浓度G418药物快速筛选的高拷贝毕赤酵母SMD1168细胞株,用于表达人sCR1融合蛋白。 周明武 李琛琪 徐立博 罗彦平 张威 方盼盼 王广兰关键词:毕赤酵母菌 G418 遗传性抗凝血酶缺陷症基因突变的研究进展 被引量:2 2014年 人体的抗凝系统主要有抗凝血酶(antithrombin,AT)系统(包括抗凝血酶和肝素,主要抑制具有丝氨酸蛋白酶活性的凝血因子,如:FXa,凝血酶等)和蛋白 C 系统(包括蛋白 C,蛋白 S,血栓调节蛋白,内皮细胞蛋白 C 受体等,主要灭活凝血因子Ⅴ和Ⅷ等),而抗凝血酶系统中的抗凝血酶是人体最重要的抗凝因子之一,约占抗凝活性的70%。抗凝血酶是一种丝氨酸蛋白酶(serpins)抑制剂,主要具有抑制丝氨酸蛋白酶活性的凝血酶、FXa 等因子,在人体抗凝系统中发挥着重要作用。 李正民 宫璀催 方盼盼 徐立博关键词:基因突变 丝氨酸蛋白酶 蛋白酶活性 SERPINS 抗凝系统