徐树莹
- 作品数：17 被引量：47H指数：4
- 供职机构：首都医科大学附属北京佑安医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细胞间粘附分子5(ICAM-5)在HIV相关神经损伤中的保护性作用
- 2013年
- 为探究细胞间粘附分子5(intercellular adhesion molecule 5,ICAM-5)在HIV相关神经认知损伤中的作用,用ELISA法测定HIV感染者脑脊液样本和体外动物神经细胞培养体系中可溶性细胞间粘附分子5(ICAM-5s)的含量;蛋白印迹法检测ICAM-5蛋白表达;免疫荧光法观察神经细胞形态学变化;用CytoTox 96非放射性细胞毒性实验检测神经细胞死亡率.抗ICAM-5单克隆抗体Cy3标记的免疫荧光染色结果显示,ICAM-5可在神经元细胞的胞体和突起表达,且经HIV神经毒性蛋白gp120 500pmol/L处理的神经细胞平均突起长度显著小于无gp120处理的对照组;体外神经细胞培养体系中,gp120+基质金属蛋白酶3(MMP3)实验组的ICAM-5s含量显著高于gp120组,且前者神经元细胞的死亡率高于后者;在HIV感染者中,HIV相关神经认知障碍(HIV associated neurocognitive disorder,HAND)患者脑脊液中ICAM-5s的水平显著高于认知功能正常的患者.结果表明,ICAM-5可能具有标记神经细胞突起的潜能,但其确切性有待进一步实验验证;ICAM-5与HIV相关神经认知功能损伤相关,具有潜在的神经元细胞保护作用.
- 宋凤丽袁霖丁渭乔录新徐树莹陈德喜张玉林
- 关键词：人类免疫缺陷病毒
- 一例HIV-1急性感染者奠基病毒的gp160基因序列特征及其假病毒构建
- 2014年
- 目的观察急性感染期艾滋病病毒I型（HIV-1）gp160的全长基因序列及感染特征。方法从一例处于Feibig I期HIV-1感染者血浆中提取RNA,扩增gp160全长基因并测序,分析其生物学信息;将gp160全长基因与pcDNA3.1His/V5真核表达载体连接,构建Env-pcDNA3.1真核表达质粒,与骨架质粒pNL4-3.Luc.R-E-共转染293细胞,包装出假病毒。用包装的假病毒感染ghost细胞,测定感染细胞的荧光素酶活性（RLU）,鉴定假病毒的感染活性。结果成功扩增出gp160全长基因,嗜性预测为CCR5,N-糖基化位点数与标准株HXB2相同,但gp120糖基化程度更高,氨基酸变异主要集中在V1-V5区。假病毒感染试验显示,RLU值达到7log。结论获得了处于急性感染期的HIV-1gp160基因序列和高感染活性的假病毒。
- 刘志英李甜寇卜心徐萌徐树莹陆小凡焦艳梅张彤陈德喜吴昊
- 关键词：艾滋病病毒I型假病毒
- 细胞粘附分子5单克隆抗体、制备方法及应用
- 本发明公开了细胞粘附分子5（ICAM5）单克隆抗体、制备方法及应用，其杂交瘤细胞株保藏编号为CGMCC No.5798。本发明提供ICAM5单克隆抗体，可用于针对ICAM5抗原的免疫荧光和蛋白印迹（Western blo...
- 陈德喜张玉林李宁石英宋凤丽丁谓乔录新侯庆生徐树莹
- 文献传递
- 带有CFP标签的LC3自噬表达载体的构建被引量：1
- 2012年
- 目的构建带有樱桃红色荧光蛋白(cherry fluorescent protein,CFP)标签的微管相关蛋白1轻链3(LC3)自噬真核表达载体,并进行初步表达鉴定。方法采用PCR方法,从质粒载体pCMV-GFP-LC3为模板扩增LC3片段,通过T4 DNA连接酶将纯化后的PCR产物LC3与经过ApaI和BamHI双酶切的pm-cherry-c1载体连接,命名为PM-CFP-LC3。该载体经酶切及测序验证后,在fugene6转染试剂介导下转染293细胞,通过荧光显微镜观察CFP在细胞内的分布来观察LC3表达情况。结果带有CFP标签的LC3表达载体构建成功,在荧光显微镜下可观察到转染细胞中樱桃红色荧光以及细胞自噬现象。结论成功构建了带有CFP标签LC3的重组质粒并成功表达,为深入研究细胞的自噬奠定了实验基础。
- 徐树莹乔录新丁渭陈德喜
- 关键词：自噬
- 采用集合转化的方法构建HIV-1蛋白酶区和反转录酶区T-A克隆载体
- 2014年
- DNA重组技术是将两个或多个单独的DNA片段连接起来产生一个能在特定宿主中自主复制的DNA分子。重组DNA分子最简单的构建方法是将基因片段克隆到质粒或噬菌体等克隆载体上。常用的质粒载体有pBR322、pUC和pGEM等。这些载体含有不同的多克隆位点，适于将含有不同酶切位点的DNA片段连接起来[1]。
- 徐萌徐树莹袁霖陈德喜
- 关键词：克隆载体反转录酶DNA重组技术DNA分子DNA片段
- DNA损伤后细胞凋亡与周期停滞中Δ40P53的作用
- 2013年
- 目的探讨HCT116p53-/-细胞Δ40P53在脱氧核糖核酸(DNA)损伤时细胞凋亡和细胞周期停滞中的作用,明确Δ40P53与野生型P53的不同作用。方法荧光素酶报告基因和免疫印迹法检测Δ40P53在DNA损伤后转录活性和表达情况,流式细胞技术检测DNA损伤后细胞周期停滞情况,乳酸脱氢酶(LDH)检测分析DNA损伤后细胞凋亡情况,分析Δ40P53的生物学功能。结果 HCT116p53+/+细胞中bax和p21基因的启动子活性在甲烷磺酸甲酯(MMS)刺激时比无MMS刺激时高3～5倍,HCT116p53-/-细胞中bax和p21基因的启动子活性在有无MMS刺激时无显著不同;免疫印迹表明有和无MMS刺激的细胞Δ40P53保持在较高水平,野生型P53经MMS刺激过度表达;LDH法检测50μg/ml的MMS刺激后52.2%的HCT116p53+/+细胞凋亡,而只有32.5%的HCT116p53-/-细胞凋亡,差异有统计学意义(t=84.2,P<0.05);流式细胞仪检测MMS处理后88%的HCT116p53-/-细胞进入G2/S期细胞,66%的HCT116p53+/+细胞进入G2/S期细胞。结论经MMS刺激的HCT116p53-/-细胞的Δ40P53不能诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。
- 刘道洁徐树莹丁渭宋凤丽汪志鹏张超乔录新
- 关键词：DNA损伤细胞凋亡
- 短期使用齐多夫定抑制p53R2表达及诱导小鼠神经元凋亡的研究
- 2014年
- 目的探讨齐多夫定(AZT)的中枢神经毒性及其相关机制。方法原代培养小鼠大脑皮层神经元,分别用0 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L的AZT作用于细胞,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光观察细胞形态,实时定量PCR(qPCR)检测依赖p53的p53R2、抑癌基因p21、胸苷激酶(TK2)mRNA表达及线粒体DNA含量,蛋白印迹检测p53R2与p21蛋白的表达。结果 AZT 0mmol/L组(对照组)、50 mmol/L组和100 mmol/L组细胞凋亡率分别为(11.9±3.37)%、(24.3±8.94)%和(54.7±17.9)%,差异具有统计学意义(χ2=5.19、19.33,P均<0.01);突起长度分别为(869.21±177.75)mm、(495.76±175.20)mm和(120.38±47.12)mm,且差异均具有统计学意义(F=19.558,P=0.002);real-time qPCR检测结果显示AZT 50 mmol/L和100 mmol/L组p53R2、TK2 mRNA拷贝数分别是对照组的0.42和0.04倍、0.52和0.29倍,组间差异均具有统计学意义(Z=-4.54、-6.65、-4.33和-5.24,P均<0.01);AZT 50 mmol/L和100 mmol/L组p21 mRNA拷贝数分别是对照组的0.98和0.86倍,差异无统计学意义(P>0.05)。线粒体含量用环氧化酶2(COX-2)拷贝数评估,AZT 50 mmol/L组和100 mmol/L组分别是对照组的0.92和0.87倍,差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白印迹显示对照组、AZT 50 mmol/L组和100 mmol/L组p53R2蛋白含量依次降低,而p21蛋白含量无差异。结论 AZT可诱导神经元凋亡,抑制突起形成,推测其机制与p53R2表达降低有关。短期接触AZT可抑制TK2的表达,但对线粒体DNA含量无影响。
- 宋凤丽张玉林丁渭乔录新徐树莹张彤吴昊陈德喜
- 关键词：齐多夫定NUCLEOSIDEANALOGREVERSEACQUIRED
- 早期自噬在非酒精性脂肪肝中的保护作用被引量：14
- 2011年
- 目的探讨非酒精性脂肪肝细胞模型中早期自噬的发生及作用。方法用含浓度为400μmol/L油酸的DMEM高糖培养基培养肝癌HepG2细胞,制作体外非酒精性脂肪肝细胞模型。向肝癌HepG2细胞转染GFP-LC3质粒,通过观察LC3Ⅱ绿色荧光斑点确定自噬的发生。采用PI3k抑制剂LY294002抑制自噬。CalceinAM和碘化丙啶(PI)对培养的细胞进行染色来确定活细胞和晚期凋亡细胞。荧光定量PCR确定促凋亡基因BAX的表达。结果油酸刺激的肝癌HepG2细胞在第8小时可以出现强烈的自噬反应,但未刺激细胞没有出现LC3Ⅱ绿色斑点。CalceinAM/PI染色未观察到第8小时出现晚期凋亡细胞。但通过LY294002抑制自噬后第8小时自噬水平明显下调,并且有7.8%的细胞出现晚期凋亡。荧光定量结果显示LY294002抑制自噬的第8小时BAX出现高表达。结论油酸刺激肝癌HepG2细胞的早期,自噬的发生可能对细胞有一定的保护作用,其机制可能与减少促凋亡基因的表达有关。
- 刘凯徐树莹徐斌陈德喜李宁
- 关键词：非酒精性脂肪肝自噬凋亡
- 晚期自噬在非酒精性脂肪肝中的促凋亡作用被引量：11
- 2011年
- 目的在非酒精性脂肪肝体外模型中研究油酸长期刺激对自噬的影响及其作用。方法用含浓度为400μmol/L油酸的DMEM高糖培养基培养肝癌HepG2细胞,制作体外非酒精性脂肪肝细胞模型。向肝癌HepG2细胞转染GFP-LC3质粒,通过观察LC3Ⅱ绿色荧光斑点确定自噬的发生。采用PI3k抑制剂LY294002抑制自噬。用抗M30抗体对培养的细胞爬片做免疫组化来确定凋亡细胞。荧光定量PCR确定凋亡相关基因BCL2和BAX的表达。结果油酸刺激肝癌HepG2细胞12h时自噬水平很低,36h后自噬水平再次显著升高。抗M30抗体免疫组化结果显示12h时肝癌HepG2细胞开始凋亡,至36h时有52%细胞出现凋亡。LY294002处理可使12h和36h的自噬消失,并且也明显减弱了凋亡的发生。凋亡相关基因BCL2和BAX的基因转录水平在油酸处理的12h和36h无显著性差异,LY294002处理也未引起两者转录的显著改变。结论油酸长期刺激肝癌HepG2细胞可以引起自噬介导的凋亡,但该凋亡发生的机制可能和BCL2/BAX基因转录水平的调节无关。
- 刘凯徐树莹徐斌陈德喜李宁
- 关键词：非酒精性脂肪肝自噬凋亡
- HIV-1假病毒包装方法的探讨被引量：3
- 2014年
- 目的通过不同方案包装HIV-1假病毒,确定获得高重复性、高稳定性和高滴度假病毒的方法。方法从转染效率影响因素出发,通过不同的转染方案,利用pNL4-3 LucR-E-质粒与VSV-G质粒共转染293细胞包装病毒,分别于48 h和72 h收取假病毒并重新感染293细胞,48 h后测荧光素酶报告基因。结果成功包装出HIV-1假病毒,不同包装方案的病毒滴度不同,测得报告基因最高接近107 RLUs。结论应用PEI转染试剂、大提质粒pNL4-3︰VSV-G为4︰1时,转染效率最高,包装的假病毒滴度最高。
- 徐树莹乔录新史宣玲徐萌魏飞力袁霖石英陈德喜
- 关键词：假病毒HUMANVIRUS
