张红
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人源受体相关蛋白的原核表达优化及功能检测
- 受体相关蛋白(Receptor associated protein,RAP)是一种常驻内质网蛋白,分子量39kDa,目前已证实是低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDL...
- 张红刘志国屈伸
- 关键词：受体相关蛋白原核表达纯化拮抗
- 文献传递
- 人源受体相关蛋白的原核表达及功能检测
- 2006年
- 目的研究人源受体相关蛋白(RAP)的表达并鉴定表达产物的功能。方法用IPTG诱导培养含有人源RAP重组表达载体(pET-28 a(+)-RAP)的BL21转化菌,利用融合蛋白中6个组氨酸纯化标签,经N i+-NTA树脂亲和层析、SDS-PAGE分离鉴定表达产物,并经脱盐、浓缩、冻干处理获得RAP融合蛋白冻干品。将RAP融合蛋白与富含LDLR家族受体的巨噬细胞进行结合实验,分析RAP融合蛋白的功能。结果经亲和层析分离纯化后获得可溶性表达的RAP融合蛋白。实验显示,表达的RAP融合蛋白可竞争性抑制VLDL与巨噬细胞的结合。结论实验获得的RAP融合蛋白具有正常的结合活性,可用于相关研究,为RAP蛋白生产开发奠定了良好的基础。
- 刘志国张红吕玲肖屈伸
- 关键词：受体相关蛋白原核表达
- 人源受体相关蛋白在大肠杆菌中表达的优化及纯化被引量：3
- 2004年
- 目的 获得人源受体相关蛋白 (RAP) ,对表达条件进行优化。方法 RAPcDNA被插入到原核表达质粒pT7 PL和pET 2 8a (+)中 ,分别构建成RAP重组表达载体 ,转化两种BL2 1菌株后 ,转化菌用异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,选择 pT7 PL RAP质粒进行表达条件的优化 ,采用镍离子亲和层析纯化所获得的RAP ,通过检测与巨噬细胞的结合能力评估其生物活性。结果 两个重组质粒均获得了RAP的高表达 ,对于pT7 PL RAP质粒 ,RAP在BL2 1(DE3,plysS)菌株中的表达显著高于在BL2 1(DE3)菌株的表达 ;有氯霉素存在时表达高于无氯霉素时 ;诱导表达的RAP大部分为可溶性的 ;镍离子亲和层析树脂纯化所获得的RAP ,可与富含低密度脂蛋白受体(LDLR)家族受体的小鼠巨噬细胞系RAW 2 6 4 7结合。结论 本实验获得了有生物学功能的RAP ,为进一步开发生产此蛋白打下良好的基础。
- 张红刘志国屈伸
- 关键词：RAP受体相关蛋白纯化原核表达质粒IPTG
