张海
- 作品数：139 被引量：398H指数：10
- 供职机构：第四军医大学实验动物中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学一般工业技术更多>>
- 结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠免疫应答及其保护力被引量：16
- 2006年
- 目的:研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护能力。方法:用预先转移到硝酸纤维素膜条的ES-AT6-CFP10融合蛋白采用皮下包埋的方法免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原,用ELISA法测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。末次免疫后,取部分免疫小鼠脾淋巴细胞,体外用ESAT6-CFP10融合蛋白刺激后,以MTT比色法检测淋巴细胞增殖反应,同时检测免疫小鼠IFN-γ和IL-2水平及脾细胞杀伤效应。另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4周后计数脾脏中的细菌数。结果:ESAT6-CFP10融合蛋白免疫小鼠血清特异性抗体的滴度为1∶6400。淋巴细胞刺激增殖指数为1.90±0.15,明显高于生理盐水组(0.90±0.15);IFN-γ和IL-2的含量分别为1.792±19ng/L和0.211±11ng/L,显著高于生理盐水对照组,但不及BCG免疫组;同时融合蛋白诱导的脾细胞杀伤率为36%。与生理盐水免疫组(细菌负荷6.51±0.13)相比较,融和蛋白免疫的BALB/c小鼠,对攻击感染后MTB在脾脏中增殖有显著作用(细菌负荷为5.24±0.15,P<0.05),但与BCG免疫组相比脾脏中细菌负荷减少甚微。结论:ESAT6-CFP10融合蛋白可作为新型结核疫苗的候选组分。
- 张海师长宏薛莹柏银兰王丽梅徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT6CFP10重组融合蛋白
- sGLP-1对GK糖尿病大鼠治疗效果的研究
- 目的 研究人工合成胰高血糖素样截短肽(sGLP-1)对Ⅱ型糖尿病大鼠的治疗效果.方法 GKⅡ型糖尿病大鼠随机分为三组,以合成的GLP-1为阳性对照,观察sGLP-I对GKⅡ型糖尿病大鼠血糖水平、胰岛素分泌以及糖耐量的影响...
- 师长宏张海赵勇石童李元李别虎
- 关键词：胰高血糖素样肽糖尿病血糖
- 结核分枝杆菌HSP65亚单位疫苗和基因疫苗的构建及免疫学特性被引量：2
- 2008年
- 目的:构建HSP65蛋白的亚单位疫苗和基因疫苗,并与BCG相比较,评价这两种疫苗在小鼠体内的免疫学特性.方法:从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出hsp65基因,连接进入pMD18-T载体中,测序后,利用不同酶切位点将完整的hsp65基因分别克隆到pProEX HTb原核表达载体和pcDNA3.1(-)真核表达载体,前者在大肠杆菌中诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot分析后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化;后者通过阳离子聚合物瞬转P815细胞,用间接免疫荧光检测细胞内HSP65蛋白的表达.用上述原核表达蛋白和真核质粒(分别为亚单位疫苗和基因疫苗)免疫BALB/c小鼠,ELISA测定特异性抗体的滴度,MTT测定脾淋巴细胞特异性增殖指数.结果:获得的结核分枝杆菌hsp65基因序列与GenBank公布的完全一致;Western Blot结果显示,在Mr约65000处有与鼠抗HSP65 mAb和临床结核患者血清的特异性结合带;免疫荧光结果显示转染重组质粒的P815细胞的表达蛋白与HSP65 mAb有特异性结合.两种疫苗免疫小鼠体内产生特异性抗体,经蛋白刺激后可引起脾淋巴细胞特异性增殖.结论:所构建的两种疫苗能引起免疫动物的特异性体液和细胞免疫反应,应进一步研究其抵抗结核分支杆菌感染的保护力机制,以用于结核病的防治研究.
- 席丽师长宏靳亚平张海张廷芬赵勇岳晨莉
- 关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白质类亚单位疫苗基因疫苗
- 犬副流感弱毒株的分离与鉴定被引量：6
- 2000年
- 目的 分离并鉴定犬副流感弱毒株 ,供疫苗制备 .方法 根据犬副流感的血球吸附特性、细胞培养特性以及异种病毒抗血清阻断法分离病毒 (简称为 CPIV- XN4病毒 ) .并对其进行形态学、生物学特性等系统鉴定 .结果 病毒分离后其毒力可达 10 - 6 TCID5 0 .在电镜下可见较典型的犬副流感病毒形态结构特征 ;免疫电镜下见到抗体分子已被吸附在病毒颗粒表面 ;在几种细胞上盲传结果 MDCK和 Vero细胞出现程度不同的病变 (CPE) ;血清中和抗体效价 (SN)可达149.6 2 ;CPIV- XN4与国际标准毒株 D- 0 0 8之间有交叉中和反应 ;病毒接种到健康幼犬后 15 d内未发现仔犬死亡 ;攻毒实验结果 ,对照组有 2条在攻毒后 9d出现神经症状 ,第 14日衰竭而死 ,实验组动物均未出现临床症状 .结论 CPIV-
- 金昌德李六金李秦施新猷张海娄清林押宗保
- 关键词：犬副流感病毒弱毒
- 犬瘟热病毒流行株的驯化与鉴定被引量：2
- 2000年
- 目的 驯化并鉴定犬瘟热病毒疫苗候选毒株 .方法 犬瘟热流行毒株经鸡胚绒毛尿囊膜→ MA10 4→ Vero→ MDCK→ MA10 4上依次连续传 112代 ,传代过程中进行蚀斑克隆、扩增以及每代 TCID5 0 效价测定 .驯化获得 1株弱毒株 (简称CDV- XN1 1 2 ) ,然后进行电镜观察及抗原性、遗传稳定性、神经毒力等试验 .结果 分离到的犬瘟热流行毒株 ,驯化到 90代时失去对犬的致病性 ,TOID5 0 效价达 10 - 5 .5 · m L- 1 ,电镜负染观察可见此毒株具有较典型的犬瘟热形态结构 ;免疫电镜观察发现 CDV- XN1 1 2 的兔抗 Ig G与国际标准毒株 Onder stepoot病毒粒子有清晰可见的桥连支架 .其病毒的中和抗体效价(SN)达 5 12 .CDV- XN1 1 2 和 SH- CDV以及 onder stepoot- CDV等 3种毒株之间均有程度不同的交叉中和现象 .在 MA10 4细胞传代过程中未发现返祖现象 .结论 CDV- XN1 1 2
- 李六金金昌德李秦施新猷张海师长宏张志培
- 关键词：病毒驯化
- 犬细小病毒弱毒株的分离及疫苗应用被引量：9
- 2000年
- 目的 从犬四联弱毒样品中分离获得一株细小病毒(CPV)弱毒株 ,用于疫苗制备 .方法 根据犬副流感的血球吸附特性、细胞培养特性以及异种病毒抗血清阻断法分离病毒 .该病毒简称为 CPV- XN1 株 .并对犬细小病毒疫苗的免疫性和动物安全性进行了研究 .结果 病毒分离后其血凝效价(HA)值为 1∶ 10 2 4～ 1∶ 40 96或 10 7.0 TCID5 0 ;在电镜下可见较典型的犬细小病毒形态结构特征 ;免疫电镜下见到抗体分子已被吸附在病毒颗粒表面 ;病毒接种到健康幼犬后 15 d内未发现仔犬死亡 ;实验组犬均未出现临床症状 ;疫苗保存 6mo,其效价只降低一个滴度 .
- 李六金金昌德李秦押宗保施新猷张海张志培
- 关键词：犬细小病毒疫苗弱毒株
- 四种动物传代细胞染色体遗传变异率分析被引量：2
- 2000年
- 目的 分析制苗用传代细胞染色体的变异稳定性 ,以判定其质量 .方法 采用直接法制取传代细胞染色体标本 ,用常规 Giemsa染色 ,10 0 0倍光学显微镜下计数中期分裂相染色体数目 ,求出染色体变异率 (% ) ,并进行核型分析 .结果 F81为亚二倍体细胞系 ,染色体众数为 30 ;Vero是超二倍体细胞系 ,染色体众数为 73～ 75 ;MDCK属于亚四倍体细胞系 ,染色体众数为 12 5～ 135 .BHK2 1 为亚二倍体或亚四倍体细胞系 ,亚二倍体众数为 42 ,亚四倍体细胞众数为 72～ 74.四种细胞系的染色体畸变率为 0 %～ 6 % ,均较低 .结论 四种传代细胞遗传学特性相对稳定 ,各代次间无本质差异 。
- 李六金李秦施新猷张海赵世君师长宏金昌德胡春雷
- 关键词：传代细胞染色体动物
- 犬腺病毒Ⅰ型流行毒株的分离与鉴定被引量：3
- 2000年
- 目的 分离、鉴定犬腺病毒 型流行毒株 .方法 将处理过的病犬肝组织悬液 ,感染原代犬胎肾细胞 .用血凝试验、中和试验、回归试验以及电镜观察等方法 ,分离、鉴定 .结果 分离出一株犬腺病毒 型流行毒株 ,命名为 CAV1 -XN3株 .
- 李秦金昌德李六金张海师长宏赵世君
- 关键词：流行毒株
- 四种传代细胞株软琼脂抛锚能力观察被引量：1
- 2000年
- 目的 观察传代细胞在软琼脂中生长情况 .方法 将4种细胞与软琼脂混合均匀 ,铺于平皿中 ,置 37℃ ,5 0～ 10 0m L·L- 1 CO2 环境中培养 .观察细胞集落形成情况 .结果 本实验室的五株非洲绿猴肾细胞 Vero- XAYU ,Vero- XAYE,Vero- XAH,Vero- XAJN和 Vero- XAM,三株猫肾细胞 F81 -XAJU,F81 - XAM和 F81 - XAK不呈现致瘤性独立抛锚生长 ;犬肾细胞 MDCK- XAYE,MDCK- XAYU,MDCK- XAJN,MD-CK- XAJA和 MDCK- XAM五株则呈现较低的致瘤性独立抛锚生长 ;两株金黄地鼠肾细胞 BHK2 1 - XAYU和 BHK2 1 - XAM及两株非洲绿猴肾细胞 Vero- XAYU和 Vero-
- 李六金李秦施新猷张海张志培师长宏赵世君押宗保
- 关键词：克隆致瘤性
- 五种动物传代细胞系对裸鼠的致瘤性被引量：10
- 2000年
- 目的 观察 5种动物传代细胞系对裸鼠是否具有致瘤性 .方法 犬肾细胞系 (MDCK)、非洲绿猴肾传代细胞系(Vero)、猫肾细胞系 (F81 )、地鼠肾传代细胞系 (BHK2 1 )和恒河猴肾细胞系 (MA- 10 4)分别培养后 ,选择对数生长期的细胞进行消化、离心、计数后 ,制备细胞悬液 ,接种裸鼠 ,定期观察 ,通过病理组织形态学观察判定结节是否具有肿瘤的特性 .结果 Vero、F81 、MA- 10 4接种裸鼠后全部有肿块形成 ,经病理形态学检查 ,均为炎性组织 ,其致瘤率为零 .MDCK在 30代以内 ,致瘤率为零 ,第 30～ 6 6代致瘤率为 10 %～ 40 % ,BHK2 1 致瘤率为 10 0 % .结论 F81 ,Vero和 MA- 10 4属非致瘤性细胞系 ,MDCK属低致瘤性细胞系 ,但经冻融或超声波裂解后对裸鼠无致瘤性 ,BHK2 1 属致瘤性细胞系 ,其正常细胞经裂解后仍具有致瘤性 。
- 李六金李秦施新猷赵世君张海师长宏
- 关键词：致瘤性裸鼠动物
