张新涛
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家科技支撑计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H3N8亚型马流感病毒拯救体系的建立
- 2009年
- 利用反向遗传学操作技术,以马流感病毒(EIV)A/Equine/Fuyun/2008/(H3N8)为亲本株,采用RT-PCR技术对该毒株的8个基因片段分段进行扩增,通过与双向转录载体pHW2000连接,重组质粒转染293T和MDCK共培养细胞,成功拯救出全部基因均来自亲本株的EIVrH3N8,生物学试验结果表明,rH3N8在鸡胚半数感染量、组织培养半数感染量、稳定性试验等方面都与亲本株保持一致。以猪流感病毒(SIV)A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)内部基因的重组阳性质粒替换rH3N8的相应基因,成功拯救出重组病毒rgH3N8。两拯救毒株经鸡胚一次传代的血凝效价分别为1∶32、1∶64,最高可达1∶1024、1∶2048;接种MDCK细胞54h后的血凝效价最高均可达1∶512。rH3N8亚型EIV的成功拯救及基因的成功替换,为流感病毒突破种间屏障分子机制的研究和流感基因工程疫苗株的筛选奠定了基础。
- 杜金玲刘明刘春国李洪涛张新涛石薇琳
- 关键词：马流感病毒反转录聚合酶链式反应病毒拯救
- H1亚型猪流感病毒HA基因DNA疫苗的构建及其对Balb/c小鼠的免疫效果评价被引量：9
- 2009年
- 以A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)猪流感病毒HA基因为模板,通过RT-PCR技术扩增出HA基因,并将其克隆到pCI-neo真核表达载体中,成功构建重组表达质粒pCI-HA,瞬时转染vero E6和293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,iIFA)和蛋白免疫印迹(Westernblot,WB)实验证明,HA基因能够在哺乳动物细胞中有效表达并具有良好的生物学活性。将重组质粒三次免疫8w雌性Balb/c小鼠后,ELISA试验和中和试验结果表明该重组质粒能够诱导小鼠产生较高的抗体滴度,并具有良好的中和活性。因此为H1亚型猪流感DNA疫苗的研究奠定了理论基础。
- 刘春国刘明李洪涛杜金玲张新涛石薇琳
- 关键词：猪流感HA基因DNA疫苗
- 禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测
- 为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果，通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断，将其克隆剑原核表达载体，经酶切鉴定和DNA测序鉴定止确后，获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL...
- 刘明张新涛刘春国
- 关键词：禽流感病毒疫苗免疫原性
- 文献传递
- 禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测
- 为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL...
- 刘明张新涛刘春国
- 关键词：禽流感病毒疫苗免疫原性
- 文献传递
- 抗猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体重链基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2010年
- 为获得抗猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体(MAb)重链可变区基因,提取MAb杂交瘤细胞8C4总RNA,通过RT-PCR扩增其重链可变区基因。其DNA序列与GenBank数据库和IMGT/V-QUEST软件比对,序列包含CDR1、CDR2、CDR33个高变区,CDR1含GYTFTSYY 8个氨基酸、CDR2含IYPGDGST 8个氨基酸、CDR3含ARVMIAMDY 9个氨基酸。第22位和96位为骨架区的2个半胱氨酸,形成链内特征性二硫键。该序列符合鼠Ig重链基本框架结构,框架区内无终止密码子,为重排产生的序列。本实验获得的重链序列为研制基因工程抗体奠定了物质基础。
- 张新涛李洪涛刘明刘春国杜金玲
- 关键词：猪流感重链可变区
- 密码子优化的H5亚型流感病毒HA基因重组质粒在哺乳动物细胞中的高效表达及其免疫原性的研究被引量：1
- 2009年
- 为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pCI-wt-HA分别转染Vero或293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和蛋白免疫印迹(WB)实验比较HA蛋白的表达量.将两种重组质粒免疫Balb/c小鼠,比较两者诱导的抗体产生水平.三次免疫后两周用强毒攻击,通过体温和体重变化评价两种重组质粒的免疫保护效果.IP-MA和WB实验结果表明:密码子优化后,HA蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平显著提高.酶联免疫吸附实验(ELISA)结果表明:小鼠免疫后密码子优化的重组质粒诱导的特异性抗体效价较高.攻毒试验结果表明:两种重组质粒均能够提供较好的保护.
- 刘春国刘明孙恩成李洪涛杜金玲张新涛石薇琳谢金鑫刘大飞
- 关键词：H5亚型HA密码子优化DNA疫苗
- 禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测
- 为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL...
- 刘明张新涛刘春国
- 关键词：禽流感病毒疫苗免疫原性
- 文献传递
- A型禽流感病毒不同拷贝数基质蛋白胞外区基因的原核表达及免疫保护力研究被引量：11
- 2010年
- 为研究含禽流感病毒(AIV)不同拷贝数基质蛋白胞外功能区(M2e)亚单位疫苗在SPF鸡体中的免疫保护效力差异,根据已发表的高致病性AIV M2基因序列设计合成两对引物,利用PCR技术扩增单个M2e基因片段,以此为基础顺次串联得到不同拷贝数的M2e基因片段,并将其克隆到pMAL-C2x载体中,构建不同拷贝数的A型AIV M2e基因的重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定。表达产物经纯化后免疫家兔、SPF鸡,制备抗M2e融合蛋白的多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验检测纯化的融合蛋白免疫原性,间接ELISA测定鸡血清抗体水平,表明MBP-3M2e融合蛋白的抗体水平较高,且MBP-3M2e亚单位疫苗产生最好的免疫保护力。
- 李洪涛张新涛刘明刘春国杜金玲石薇琳孙恩成
- 关键词：A型禽流感病毒原核表达多克隆抗体免疫保护力
- 禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测
- 为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果，通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断，将其克隆到原核表达载体，经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后，获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL...
- 刘明张新涛刘春国
- 关键词：禽流感病毒疫苗免疫原性
- 文献传递
- A型流感病毒核蛋白结构和功能的研究进展被引量：3
- 2009年
- A型流感病毒为重要的传染性病原。流感病毒核蛋白是病毒转录装置中的结构成分,在病毒生活周期中执行多种重要功能,文章简要综述了核蛋白在流感病毒结构和功能方面的研究进展,以便为促进疫苗的设计和抗病毒治疗药物的研制提供借鉴。
- 杜金玲刘春国刘明李洪涛张新涛石薇琳
- 关键词：流感病毒核蛋白
