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空肠弯曲菌“活的非可培养状态”研究进展: ＜正＞空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是重要的人兽共患病原菌,是全球范围内引起人胃肠道感染最常见的病原菌之一。细菌活的非可培养状态（VBNC）是指细菌仍然保持活力（比如基本的代谢活动）,但是不能在人...; 张弓黄金林焦新安; 文献传递

空肠弯曲菌flaa—PCR—RFLP分子检测技术的初步应用被引量：3: 2009年; 空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是导致细菌性肠炎的常见病原菌，作为食源性病原菌，主要是由于食用了被污染的食物、水等而感染，建立快速、准确的分子亚分型方法对于追踪污染来源和监控暴发流行具有重要意义。PCR-RFLP（PCR restriction fragment length polymorphism）是针对单基因的一种亚分型方法，能够在短时间内对大量菌株进行调查研究，不需要特殊设备，普通临床实验室即可开展，已被应用于多种人兽共患病原菌的流行病学监测和溯源性分析。本研究选择空肠弯曲菌鞭毛基因，应用限制性内切酶Dde Ⅰ，建立针对空肠弯曲菌的flaA—PCR-RFLP方法，并对来源于腹泻病人和鸡的280株空肠弯曲菌分离株进行分子亚分型研究分析。; 黄金林许海燕尹衍新张弓潘志明刘秀梵焦新安; 关键词：空肠弯曲菌分子检测技术常见病原菌食源性病原菌流行病学监测

江苏奶牛空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况及耐药性分析被引量：18: 2007年; 目的了解江苏省奶牛空肠、结肠弯曲菌流行及耐药状况。方法采用多重PCR方法对10个奶牛场的产奶牛、育成牛和饲养环境进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况调查,采用琼脂扩散法测定分离株的耐药性。结果1531份样品中,119份空肠弯曲菌阳性,平均阳性率7.77%;3份结肠弯曲菌阳性,平均阳性率0.20%;空肠弯曲菌、结肠弯曲菌阳性率最高分别为30.91%、3.57%。在三类样品中,产奶牛空肠弯曲菌、结肠弯曲菌阳性率分别为5.02%、0.32%,育成牛空肠弯曲菌阳性率为8.70%、未检出结肠弯曲菌,环境样品空肠弯曲菌、结肠弯曲菌阳性率为10.28%、0.18%。35株奶牛空肠弯曲菌分离株对8大类21种抗生素高度敏感率的是:阿莫西林100%、阿齐红霉100%、链霉素97.14%、庆大霉素94.29%、红霉素91.43%、头孢噻肟82.86%、克林霉素82.86%;高度耐药率的是:头孢哌酮100%、恩诺沙星100%、环丙沙星97.14%、复方新诺明97.14%、左旋氧氟沙星94.29%、萘啶酸94.29%、头孢拉定94.29%、诺氟沙星91.43%、头孢克罗88.57%。菌株耐药谱显示,35株分离株的耐药主要集中在9耐到12耐,占88.57%,产奶牛分离株的多重耐药性较其它分离株更严重。结论我国奶牛群中空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的流行和耐药状况呈现多样化和复杂化,研究结果为正确评价我国奶牛群弯曲菌的流行状况和制定切实可行的防控措施提供科学依据。; 黄金林许海燕张弓苏洁潘志明姜峰刘秀梵焦新安; 关键词：空肠弯曲菌多重PCR 流行病学分析耐药试验

扬州市区腹泻人群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况及耐药性分析被引量：34: 2008年; 目的了解扬州市区腹泻人群中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的感染流行和耐药性状况。方法采用多重PCR方法对扬州市区两所医院门诊部和住院部的腹泻人群进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌感染状况调查,采用琼脂扩散法测定分离株的耐药性。结果在2937份粪便样品中,142份空肠弯曲菌阳性、平均阳性率4.83%,10份结肠弯曲菌阳性、平均阳性率0.34%。不同医院间感染率差异不显著(P>0.05),门诊部感染率极显著高于住院部(P<0.01),7岁以下幼儿感染率极显著高于其它人群(P<0.01),6月-8月感染率显著高于其它月份(P<0.05)。93株空肠弯曲菌分离株对21种抗生素高度敏感的是:庆大霉素91.40%、阿齐红霉素89.25%、红霉素88.46%、阿莫西林87.10%、链霉素83.87%、头孢噻肟81.72%、卡那霉素81.72%,高度耐药的是:头孢哌酮100%、复方新诺明100%、头孢拉定97.85%、头孢克罗93.55%、环丙沙星91.40%、萘啶酸91.40%、左旋氧氟沙星88.17%、土霉素87.50%。耐药菌株耐药谱主要集中在9耐至14耐,达81.71%,两医院分离株多重耐药性无显著性差异(P>0.05),不同诊区分离菌多重耐药性存在显著性差异(P<0.05)。结论扬州市区腹泻人群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行及耐药状况呈现多样化和复杂化,研究结果为正确评价腹泻人群弯曲菌的流行状况和制定切实可行的防控措施提供了科学依据。; 许海燕黄金林包广宇高玉张弓苏洁姜峰潘志明刘秀梵焦新安; 关键词：空肠弯曲菌多重PCR 腹泻耐药性

空肠弯曲菌脉冲场凝胶电泳分子检测方法的建立及应用被引量：9: 2009年; 【目的】建立空肠弯曲菌脉冲场电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)图谱分型方法。【方法】在PFGE基本程序基础上,通过调整菌液浓度、Seakem Gold琼脂糖凝胶浓度、蛋白酶K浓度、洗涤方式和限制性内切酶SmaⅠ浓度,进行程序的比较与优化。应用PFGE技术对不同来源分离株进行分析。【结果】37株空肠弯曲菌脉冲场凝胶电泳图谱显示分离株均产生了6～24条电泳带,条带数量适中,清晰易读;系统进化树显示,可分为4个遗传谱系,分离株主要分布于PFGE遗传谱系Ⅳ,不同源分离株在各组群中呈交叉分布。【结论】PFGE对空肠弯曲菌具有很强的分型能力和良好的溯源性,初步数据显示鸡、牛等动物源空肠弯曲菌与腹泻病人空肠弯曲菌病密切相关。; 黄金林许海燕姜丰尹衍新张弓潘志明刘秀梵焦新安; 关键词：空肠弯曲菌脉冲场凝胶电泳分子分型

部分省市鸡群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行状况分析被引量：19: 2008年; 本研究采用多重PCR方法对我国部分省市不同品种、不同类型的鸡群进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行病学调查。结果发现,在3132份鸡肛门棉拭样品中,检测出583份空肠弯曲菌阳性样品,平均阳性率18.61%;48份结肠弯曲菌阳性,平均阳性率1.53%。鸡饲养环境样品217份,6份空肠弯曲菌阳性,阳性率2.76%。不同鸡群感染率悬殊较大,空肠弯曲菌阳性率从0%～73.3%、结肠弯曲菌阳性率从0%～7.4%。30个鸡群中空肠弯曲菌阳性率为86.67%,结肠弯曲菌阳性率43.33%。本调查结果表明我国鸡群中空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的流行呈现多样化。; 黄金林许海燕郑国军刘佩红苏洁姜峰潘志明张弓刘秀梵焦新安; 关键词：空肠弯曲菌多重PCR 流行病学分析

空肠弯曲菌FlaA单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2010年; 【目的】原核表达空肠弯曲菌鞭毛蛋白FlaA,并制备其单克隆抗体。【方法】克隆目的基因并将其构建到pET30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,分别以变复性纯化后的rHis-FlaA、rGST-FlaA蛋白为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA法测定细胞上清和单抗腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析单抗特异性。【结果】成功构建pET30a(+)-flaA和pGEX-6p-1-flaA重组原核表达质粒,并融合表达rHis-FlaA和rGST-FlaA蛋白,Western blot试验显示天然蛋白多抗血清能与体外表达的蛋白呈现特异性反应,表明表达蛋白具有免疫原性。筛选获得3株稳定分泌抗FlaA的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2D12、5E12、6A9,其Ig亚类分别为IgG2a、IgG1、IgG1,腹水效价分别为1∶102400,1∶102400和1∶51200;Western blot试验显示,3株单抗均能与表达rHis-FlaA重组蛋白的细菌发生特异性反应;Dot-ELISA试验表明,3株单抗均能与不同来源的空肠弯曲菌分离株发生特异性反应。【结论】本研究制备的单克隆抗体有较高特异性,具有良好的应用价值。为进一步研究空肠弯曲菌鞭毛蛋白的生物学特性、致病机理,以及建立快速检测技术奠定基础。; 黄金林尹衍新梅德霞张弓潘志明刘秀梵焦新安; 关键词：空肠弯曲菌单克隆抗体

空肠弯曲菌cjaA基因表达蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定被引量：1: 2011年; 目的:原核表达空肠弯曲菌CjaA蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法:克隆目的基因并将其构建到pGEX-6p-1和pET30a(+)表达载体,分别以变复性纯化后的rGST-cjaA、rHis-cjaA蛋白为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA法测定细胞上清和mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性。结果:成功构建pET30a(+)-cjaA和pGEX-6p-1-cjaA重组原核表达质粒,并融合表达rHis-cjaA和rGST-cjaA蛋白,Western blot试验显示全菌多抗血清能与体外表达的蛋白呈现特异性反应,表明表达蛋白具有免疫原性。筛选获得3株稳定分泌抗CjaA的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2B6、3C2、4F11,其Ig亚类均为IgG1,腹水效价分别为1∶1×105、1∶2×105和1∶4×105;Western blot试验显示,3株mAb均能与表达rHis-CjaA重组蛋白的细菌发生特异性反应;Dot-ELISA试验表明,3株mAb均能与不同来源的空肠弯曲菌分离株发生特异性反应。结论:本研究制备的mAb有较高特异性,具有良好的应用价值。为进一步研究空肠弯曲菌CjaA蛋白的生物学特性、致病机制,以及建立快速检测技术奠定基础。; 黄金林尹衍新胡元庆张弓刘秀梵焦新安; 关键词：空肠弯曲菌单克隆抗体

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张弓

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