张光红
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- p27Kip1基因shRNA表达质粒的构建鉴定及功能研究被引量：4
- 2007年
- 目的构建细胞周期性激酶抑制剂p27Kip1的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对牛角膜内皮细胞增殖能力的影响。方法设计有发夹状结构的3条p27Kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照。转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGenSil-1质粒,构建重组质粒pGenSil-1/p27Kip1-1、pGenSil-1/p27Kip1-2、pGenSil-1/p27Kip1-3、pGenSil-1/HK。转化DH5α菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定。以脂质体法将4个重组质粒分别导入牛角膜内皮细胞。转染后48h以Western blot法检测p27Kip1蛋白水平及MTT法检测各实验组和对照组细胞增殖情况。结果酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功。3个实验组p27Kip1蛋白水平分别下降了66.41%、61.51%、71.32%,shRNA可显著促进牛角膜内皮细胞增殖。结论成功构建了针对p27Kip1的RNA干扰表达载体。
- 黄渝侃张明昌王勇张进祥范可顺张光红
- 关键词：RNA干扰P27KIP1质粒
- 压力对体外培养的牛角膜内皮细胞的影响
- 2008年
- 目的观察压力对体外培养的牛角膜内皮细胞形态结构及细胞活力的影响。方法对体外培养的牛眼角膜内皮细胞施以2.67kPa、5.33kPa及8.00kPa的压力各6、12、24、36、48h,以不加压组作为对照组。用倒置相差显微镜及电镜观察细胞形态结构,以台盼蓝染色观察比较48h时各组细胞活力的差别,用单因素方差分析比较不同压力下阳性细胞率。结果当作用于细胞的压力为2.67kPa(1kPa=7.5mmHg),作用时间为6、12、24、36、48h时,与对照组比较,细胞形态结构均无明显变化;48h时台盼蓝计数与对照组比较差异无统计学意义(P=0.776)。当压力为5.33kPa,作用时间为24h时,细胞形态结构出现轻度的损伤,在36、48h时加重;48h时台盼蓝计数与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.00)。当压力为8.00kPa时,6h时即出现明显细胞形态结构损害,随着压力和作用时间的进一步增加,细胞的损伤程度也进一步加重;48h时台盼蓝计数与对照组比较差异有统计学意义(P=0.000)。结论牛角膜内皮细胞在加压48h时只能承受2.67kPa的压力,当压力为5.33kPa及8.00kPa,施压48h时,将造成细胞损伤及细胞活力下降。
- 黄渝侃张明昌范可顺张光红
- 关键词：角膜内皮细胞角膜水肿
- 针对p27Kip1基因的小发夹RNA对牛角膜内皮细胞增殖的影响被引量：3
- 2009年
- 目的探讨针对p27Kip1基因的小发夹RNA（shRNA）表达质粒对牛角膜内皮细胞（bCEC）增殖能力的影响。方法实验研究。设计有发夹状结构的3条p27Kip1—shRNA对应模板DNA序列，并构建无关序列HK—shRNA作为阴性对照。构建并鉴定重组质粒Pgenesil-P1、Pgenesil-P2、Pgenesil—P3及Pgenesil-HK。以脂质体法将以上4种质粒分别转染bCEC，并设立空白组。稳定转染后采用RT-PCR和Westem免疫印迹法检测bcEc内p27Kip1的mRNA及其蛋白水平，筛选出抑制效果最好的阳性siRNA质粒。用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测该质粒组、Pgenesil-HK组及空白组的细胞生长情况。流式细胞术检测各组细胞周期的分布。以上数据结果均采用单因素方差分析。结果酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功。与空白组比较，Pgenesil-P1、Pgenesil—P2、Pgenesil—P3各组mRNA的抑制效率分别为32．71％、67．76％及80．28％（F=453．102，P=0．000），蛋白表达水平降低为29．27％、64．73％及76．13％（F=75．385，P=0．000），以Pgenesil—P3抑制效果最明显。空白组与Pgenesil—HK组比较蛋白水平（P=0．356）和mRNA水平（P=0．246）均差异无统计学意义。与空白对照和阴性siRNA相比，Pgenesil—P3组bCEC增殖能力提高，G1期细胞比例下降（F=134．224，P=0．000），S期比例增加（F=334．957，P=0．000）。结论针对p27Kip1的shRNA可有效降低p27Kip1基因及其蛋白的表达水平，并可提高bCEC增殖能力。RNA干扰介导的p27Kip1基因沉默可能是促进角膜内皮细胞再生的有效手段。
- 黄渝侃张明昌王勇范可顺姜冬玲张光红周龚莉
- 关键词：小分子干扰周期素依赖激酶抑制剂P27内皮细胞增殖
- 肝细胞生长因子对培养的人晶状体上皮细胞增生及移行作用的研究被引量：2
- 2007年
- 目的研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对体外培养的人晶状体上皮细胞(hu-man lens epithelial cells,HLECs)增生及移行的作用。方法在无血清培养液培养的HLECs中分别加入不同浓度的HGF(2.5、5、10、20、40、50、100μg/L),MTT法测定促细胞增生的情况;流式细胞仪分析细胞周期;HLECs损伤愈合模型,观察不同浓度HGF(10、20、50μg/L)处理24h后HLECs的移行情况。结果HGF浓度处于10、20、40、50μg/L时对HLECs具有促增生作用(P<0.05或P<0.01),增生率分别为10.5%、30.2%、28.3%和11.1%;当浓度为20μg/L作用24h能达到最大促增生效果(P<0.01),增生率为29.6%;HGF通过促进细胞G0向G1的转化来促进细胞的增生;HGF可明显促进HLECs的移行,其移行能力分别为22.1%(10μg/L)、57.7%(20μg/L)和208.6%(50μg/L)。结论HGF可促进HLECs的增生和移行,是HLECs的有丝分裂原和强有力的促移行因子。
- 王智张光红
- 关键词：肝细胞生长因子晶状体上皮细胞增生
