岳建华
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
- 供职机构：南京军区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EBV转化B型健康人B淋巴细胞构建噬菌体抗体库被引量：4
- 2006年
- 目的构建人源抗红细胞A抗原单链噬菌体抗体库。方法应用EB病毒转化方法和噬菌体抗体库技术,从EB病毒转化成功的B型个体淋巴细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,PCR分别扩增VH和Vκ基因,经重叠延伸拼接法(SOE)组成ScFv基因并将其克隆入pCANTAB5E,转化E.coliTG1,加入辅助噬菌体M13KO7援救,构建人源抗红细胞A抗原单链噬菌体抗体库,并测定文库的库容、滴度及ScFv基因的插入率。使用完整A型红细胞对该库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,细胞ELISA、红细胞血凝实验对所获抗体进行初步鉴定。结果所构建的噬菌体抗体库,其库容为1.2×106,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为0.90,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为2.52×1010PFU/mL的初级噬菌体抗体库。以完整A型红细胞进行四轮淘筛,出现特异性富集。经细胞ELISA、红细胞血凝实验鉴定,得到2株与A型红细胞特异结合的ScFv噬菌体抗体。结论EB病毒转化方法联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库切实可行,可进行亲和筛选以得到人源抗红细胞A抗原的基因工程抗体。
- 岳建华潘秀珍王长军李先富唐家琪
- 关键词：EB病毒转化SCFV噬菌体展示技术
- 抗Rh(D)血型抗体制备的研究进展被引量：3
- 2005年
- 岳建华潘秀珍唐家琪
- 关键词：D抗原EB病毒转化基因工程抗体
- 人源抗Rh(D)单链抗体基因的克隆和表达被引量：3
- 2006年
- 目的:构建人源抗红细胞Rh(D)抗原单链噬菌体抗体库。方法:应用噬菌体展示技术,从分泌抗Rh(D)抗体的细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,多次PCR扩增和克隆抗体可变区基因(VH/VLcDNA),经重叠延伸拼接(SOE)用编码连接肽(Gly4Ser)3的互补序列组成scFv基因,经酶切克隆入载体pCANTAB5E,使之呈现于噬菌体表面。使用完整Rh+型红细胞进行四轮淘汰筛选,ELISA对所获抗体进行初步鉴定。结果:构建的噬菌体抗体库库容为1.2×107,噬菌体DNA中全长scFv基因的插入率为0.80,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为3×108pfu/ml的初级噬菌体抗体库。以完整Rh+型红细胞进行四轮淘汰筛选,出现特异性富集。经DotELISA实验鉴定,得到1株与Rh+型红细胞特异结合的scFv噬菌体抗体。结论:运用噬菌体抗体库技术构建了人源抗红细胞Rh(D)抗原的噬菌体抗体库,为进一步对所获克隆株进行序列分析、可溶性抗体表达和纯化奠定了基础。
- 岳建华潘秀珍王长军李先富唐家琪
- 关键词：噬菌体展示技术
- 分泌血型特异性抗体人B淋巴细胞系的建立被引量：3
- 2008年
- 目的:建立Epstein-Barr病毒(EBV)转化的分泌血型特异性抗体的永生化B淋巴细胞系。方法:采用EBV转化外周血B淋巴细胞,加入环孢素抑制T淋巴细胞,建立B血型人B淋巴细胞系(B-LCL),红细胞凝集试验检测细胞培养上清与血型红细胞结合活性。结果:共采集B血型健康人全血15份,成功转化12份,转化率为80%;获得9株分泌抗A抗体的人B淋巴细胞系。结论:建立了分泌抗A抗体B淋巴细胞系,为进一步研制人源血型特异性单克隆抗体奠定基础。
- 潘秀珍岳建华李先富王长军唐家琪
- 关键词：EPSTEIN-BARR病毒B淋巴细胞血型
- 核糖体展示小分子抗体的研究进展
- 2006年
- 岳建华潘秀珍王长军唐家琪
- 关键词：核糖体展示技术小分子抗体蛋白相互作用高亲和力特异结合
- 抗人红细胞抗原A和Rh（D）噬菌体抗体库的构建及鉴定
- ABO血型系统和Rh血型系统是人类最为重要的两个血型系统，高度的免疫原性使它们具有重要的临床意义，尤其是与临床急救输血、器官移植等关系较为密切。因此，开展ABO血型及Rh血型抗体的研究对临床血型鉴定、血型理论研究及应用血...
- 岳建华
- 关键词：噬菌体展示技术SCFV
- 文献传递
