宋海燕
- 作品数：13 被引量：100H指数：5
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- 高低转移潜能肝癌细胞系差异糖蛋白质组学研究
- 目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种由多因素引发的恶性肿瘤,其转移和复发是影响患者预后和生存期限的重大障碍.肝癌发生中细胞表面的糖链通常发生变化,而该变化与HCC的转移关系密切...
- 代智刘银坤冯巨涛宋海燕申华丽张丽君崔杰峰
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- 不同转移潜能人肝癌细胞系酪氨酸磷酸化蛋白质差异分析
- 蛋白质的磷酸化是翻译后修饰的常见类型,能够敏感而可逆地调节蛋白质功能。其中蛋白质的酪氨酸磷酸化修饰在调控细胞增殖、分化、信号传导和代谢等生命过程以及某些疾病的发生发展中都起着非常重要的作用,在恶性肿瘤的转移和复发过程中通...
- 张丽君宋海燕申华莉冯巨涛代智刘银坤
- 文献传递
- 转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白Annexin1的功能解析被引量：5
- 2005年
- 解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白Annexin1的生物学功能,证实其是否在肝癌转移复发中发挥作用.分别以RT-PCR、蛋白质印迹及细胞免疫化学对差异蛋白Annexin1在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证,然后构建Annexin1反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过对MHCC97H细胞的运动、侵袭、凋亡、生长周期、MMPs分泌、克隆形成等系列检测,观察目的蛋白表达降低对其生物学行为的影响,特别是转移特性的影响.验证结果均证实Annexin1在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达.转染Annexin1反义重组表达质粒后,MHCC97H细胞中Annexin1的表达被成功抑制.依据MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASAnnexin1,MHCC97H/pcDNA3.1(+),MHCC97H的检测排序,转染反义重组质粒后的MHCC97H细胞穿过上室底膜的细胞数(运动实验)分别为:11.13±3.31,18.88±2.03,21.86±3.38;穿过人工基底膜细胞数(侵袭实验)分别是:16.43±2.23,16.40±1.57,16.86±1.52;细胞平均集落形成率(克隆形成实验)分别为:(14.33±0.46)%,(19.35±0.49)%,(20.25±0.35)%;MHCC97H细胞凋亡比例(FCM分析)依次为22.2%,6.44%,6.97%;细胞周期各时相的比例依次为:G0-G1期79.5%/76.34%/80.5%,S期13.26%/14.4%/9.69%,G2-M期7.25%/9.26%/9.81%;细胞培养上清MMP9的定量结果依次为:26.37!g/L,28.00"g/L,31.90#g/L;MMP2定量结果依次为29.46$g/L,26.37%g/L,26.53&g/L.明胶酶谱分析细胞培养上清显示,转染Annexin1反义重组表达质粒的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性与对照比变化不明显.综合上述结果发现,转染Annexin1反义表达质粒MHCC97H细胞运动能力及集落形成率明显降低,凋亡细胞的比例增加,而侵袭潜能,细胞周期时相,细胞分泌MMP2、MMP9的量均变化不明显.提示,差异蛋白Annexin1可能通过影响细胞凋亡和细胞运动在肝癌细胞侵袭转移过程中发挥作用.
- 崔杰峰刘银坤代智周海君宋海燕张丽君张予孙瑞霞陈洁汤钊猷
- 关键词：人肝癌细胞系
- 上海市集成电路行业协会的知识产权管理
- 集成电路产业是一个快速发展的技术密集型产业,随着技术创新对产业发展的重要性日益突显和市场竞争日趋加剧,知识产权与产业发展已不可分割。如何从行业协会的角度理解这一命题是本文主要关注的内容。
首先,论文对世界集成电路产...
- 宋海燕
- 关键词：集成电路行业协会知识产权
- 文献传递
- 人肝细胞性肝癌组织转移相关分子的比较蛋白质组学研究被引量：33
- 2005年
- 目的应用比较蛋白质组学方法研究肝细胞性肝癌(HCC)转移相关的关键蛋白分子。方法用双向凝胶电泳(2DE)对有转移的HCC组织和未发生转移的HCC组织总蛋白进行分离,两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定,并在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。结果鉴定出16个差异表达蛋白,包括S100钙结合蛋白(S100)、热休克蛋白27(HSP27)、细胞角蛋白18(CK18)等。对在转移性HCC组织中表达显著增高的HSP27,应用western blot分析在蛋白水平上验证了2-DE结果,RT-PCR检测出两组间mRNA水平也存在差异,但不显著,免疫组织化学检测显示HSP27主要定位于肝细胞胞浆内。结论HCC转移与多种蛋白表达相关,其中HSP27高表达可能在转移中发挥作用,可能为潜在的判断HCC 转移的分子标记或控制转移的治疗靶点。
- 宋海燕刘银坤崔杰峰张丽君代智冯钜涛冯久贤申华莉杨芃原
- 关键词：肝癌组织癌转移蛋白质组学HCC热休克蛋白27
- 血清蛋白质组分析技术筛选肝癌自发抗体被引量：17
- 2005年
- 目的采用血清蛋白质组分析技术(SERPA)筛选、鉴定肝癌自发抗体。方法双向电泳分离肝癌细胞系HCCLM3的总蛋白后将其转膜,肝癌、肝炎和正常组血清各8份与膜免疫印迹,图像分析确定不同血清免疫印迹图谱间的差异点及其与双向电泳图谱的对应关系,最后用基质辅助激光解吸飞行时间质谱进行鉴定。结果建立了高重复性HCCLM3的双向电泳图谱及其肝癌、肝炎及正常组血清的免疫印迹图谱,图谱均点数分别为603、70.75±24.25、68.50±23.44和41.38±15.05,肝癌、肝炎组图谱点数明显多于正常组,但肝癌与肝炎组差异无统计学意义。质谱鉴定确定了核蛋白、细胞骨架、代谢酶及热休克蛋白等五类肝癌自发抗体。结论SERPA是一种高通量筛选、鉴定肿瘤自发抗体的新技术,大量肝癌自发抗体的发现为肝癌进一步的免疫诊断及治疗奠定了基础。
- 冯钜涛刘银坤代智周海军宋海燕钦伦秀金红陆豪杰汤钊猷
- 关键词：肝细胞自身抗体蛋白质组肝癌细胞系蛋白质组分析高通量筛选抗体
- 双向电泳-质谱技术筛选肝癌血清标记物被引量：28
- 2005年
- 采用双向电泳-质谱技术筛选肝癌特异的血清蛋白标记物,以利于肝癌的早期诊断和治疗.肝癌、肝炎和正常三组各20例血清先采用超声、高丰度蛋白去除、脱盐预处理以优化双向电泳,图像分析三组血清图谱寻找差异点,基质辅助激光解吸飞行时间质谱对差异点进行鉴定.结果显示,通过样品预处理,血清上样体积平均增加3～4倍,参考胶点数由218个增至332个,白蛋白和免疫球蛋白明显减弱,水平条带明显减少.图谱比较所得37个差异点,经鉴定为7种蛋白.与正常组比较,转铁蛋白、甲状腺素运载蛋白在肝炎和肝癌组低表达,α-1抗胰蛋白酶、凝聚素、铜蓝蛋白、触珠蛋白在肝炎和肝癌组均高表达.α-1抗胰蛋白酶在肝癌组较肝炎组高表达,而热休克蛋白27只在肝癌组表达.上述结果提示,双向电泳-质谱技术可发现肝癌发生发展过程中血清蛋白表达谱质或量的变化,从而为肝癌的早期诊断及治疗奠定基础.
- 冯钜涛刘银坤MOHAMAD RADWAN ALMOFTI代智周海君宋海燕陆豪杰汤钊猷
- 关键词：肝癌蛋白质组学急性反应蛋白热休克蛋白
- 转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白S100A4的再验证及功能分析被引量：3
- 2005年
- 目的解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白S100A4的生物学功能,验证其是否在肝癌转移复发中发挥作用。方法用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、蛋白免疫印迹(WB)及细胞免疫化学法分别对差异蛋白S100A4在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证;然后,用构建S100A4反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过系列与侵袭转移有关的检测,观察S100A4表达降低对MHCC97H细胞生物学行为的影响。结果验证结果均证实,S100A4在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达。转染S100A4反义重组表达质粒后的侵袭试验显示,穿过人工基底膜细胞数分别是:5.0±1.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],16.4±1.6[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],16.9±1.5(MHCC97H);运动试验穿过上室底膜的细胞数为:11.1±3.3[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],18.9±2.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],21.9±3.4(MHCC97H);细胞培养上清液中MMP9的定量结果依次为18.2[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、28.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、31.9ng/ml(MHCC97H);MMP2定量结果依次为29.8[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、26.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、26.5ng/ml(MHCC97H)。明胶酶谱分析细胞培养上清液基质金属蛋白酶(MMP)显示,S100A4表达降低的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性明显弱于对照组。结论pcDNA3.1(+)ASS100A4转染MHCC97H细胞后,细胞的运动与侵袭潜能均明显降低。细胞MMP9分泌量也显著降低。而细胞分泌MMP2的量则变化不明显。提示差异蛋白S100A4通过增强肝癌细胞的运动侵袭能力和上调MMP的分泌参与肝癌细胞的侵袭转移过程。
- 崔杰峰刘银坤申华丽张丽君张予孙瑞霞陈洁代智宋海燕
- 关键词：S100A4人肝癌细胞系差异蛋白PCDNA3细胞培养上清液逆转录聚合酶链反应
- 不同转移潜能人肝癌细胞系的差异表达蛋白质组分析及意义被引量：11
- 2004年
- 目的 比较研究转移性肝癌细胞系中蛋白质表达谱的改变 ,筛查在转移中起重要作用的关键蛋白质分子。方法 用双向电泳 (2 DE)及液相色谱 电喷雾 串联质谱 (LC ESI MS/MS)对 3种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L、MHCC97H的差异蛋白质组进行分析。结果 Hep3B、MHCC9TL和MHCC9TH分别平均检测到 976± 112个蛋白点 (n =3)、10 92± 4 0个蛋白点 (n =3) ,和 888± 15个蛋白点 (n =3) ,以其中MHCC97L图谱为参考胶 ,Hep3B、MHCC9TL和MHCC9TH分别与其匹配的平均匹配点数为 6 37± 37个 (n =3)、771± 16个 (n =2 )和 5 89± 5 1个 (n =3) ,平均匹配率分别为6 5 7% ,72 1% ,6 6 2 %。不同胶间蛋白质斑点的位置偏差 [等电聚焦 (IEF) ]方向为 (2 95± 0 95 )mm ,聚丙烯酰胺凝胶电泳方向为 (2 87± 0 88)mm。Hep3B、MHCC97L、MHCC97H中有 35 9个蛋白质点匹配。与Hep3B比 ,MHCC97L有 10 3个点未匹配 ,相差 10倍以上的上调点和下调点分别为 5 7个和 4 9个 ;MHCC97H有 113个点未匹配 ,相差 10倍以上的上调点有 4 7个 ,相差 10倍以上的下调点有 5 2个。质谱可鉴定出S10 0A4 ,S10 0A6 ,S10 0A11,Annexin1等 2 6种胶内差异蛋白质。结论 与不转移肝癌细胞相比 ,转移性肝癌细胞有明显的差异性蛋白表达谱?
- 崔杰峰刘银坤宋海燕张予孙瑞霞陈洁冯钜涛于雁灵申华莉杨芃原
- 关键词：肝细胞癌细胞系
- 肝癌转移相关的核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的研究被引量：8
- 2005年
- 通过比较研究不同转移潜能肝癌细胞系中核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的差别,筛查与转移相关的重要糖蛋白.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向电泳(2-DE)和凝集素印迹技术联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析,建立3种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L和MHCC97H的核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱.比较研究发现,不同转移潜能肝癌细胞呈现不同的SDS-PAGE/LCA凝集素印迹图谱,MHCC-97H和MHCC-97L在35～45 ku和45～60 ku间出现了Hep3B未见的条带.在核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱中,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别平均检测到(55±7)个蛋白质点(n=3),(60±6)个蛋白质点(n=3),(61±4)个蛋白质点(n=3);以各自双向电泳图谱为参考胶,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别与其匹配的平均匹配点数为(25±3)个(n=3),(30±4)个(n=3),(28±3)个(n=3).该图谱中,与Hep3B相比,MHCC97L有13个点未匹配,其中9个点为Hep3B(-)/MHCC97L(+);MHCC97H有9个点未匹配,其中6个点为Hep3B(-)/MHCC97H(+),MALDI-TOF-MS/MS可鉴定出Annexin1、Keratin 8等12种差异蛋白质.这些结果证实了不同转移潜能的肝癌细胞有明显的核心岩藻基化糖蛋白差异性表达.提示肝癌转移可能与这些差异糖蛋白及其核心岩藻糖基化有关.
- 代智刘银坤崔杰峰冯钜涛宋海燕陈洁孙瑞霞李娜申华莉张予杨芃原
- 关键词：肝癌细胞
