孙达权
- 作品数：11 被引量：53H指数：4
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- 通用型高效真核表达载体p3I－GFPN及采用该载体构建的抗乳腺炎的转基因载体
- 本发明公开了一种通用型高效真核表达载体p3I－GFPN及采用该载体构建的抗乳腺炎的转基因载体，本发明构建的抗乳腺炎转基因载体pCMV/CSN2－hLY－hIFA，在乳腺细胞中能高水平表达绿色荧光蛋白，在泌乳期的乳腺细胞中...
- 孙达权陈兴启张涌刘凤军杨鹭张东
- 文献传递
- 人溶菌酶基因真核表达载体构建及其在牛乳腺上皮细胞中的表达被引量：7
- 2008年
- 构建真核表达载体pEGFP-C1-hLYZ,并从基因水平研究人溶菌酶基因在体外培养的牛乳腺上皮细胞中的表达,为核移植提供转基因供体细胞。采用PCR的方法从人溶菌酶质粒中扩增854 bp人溶菌酶基因(包括完整的编码框446 bp)。并克隆到pMD18-T载体上,用限制性内切酶HindⅢ和BamHⅠ双酶切。将人溶菌酶基因的酶切片段(883 bp)定向克隆到pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组表达质粒pEGFP-hLYZ,并进行HindⅢ和BamHI双酶切鉴定。转染体外培养的牛乳腺上皮细胞,48 h后观察其表达情况。PCR检测溶菌酶基因的表达。成功构建了人溶菌酶真核表达载体,观察到表达绿色荧光蛋白的牛乳腺上皮细胞,并检测到溶菌酶基因。
- 张勃伟权富生赛务加浦孙达权马会明张涌
- 关键词：绿色荧光蛋白基因表达人溶菌酶
- 水通道蛋白与植物的抗旱性被引量：29
- 2005年
- 水通道蛋白(aquaporin,AQP)构成水分运输的特异性通道,促进水的长距离运输,调节细胞内外水分平衡,并运输其它小分子物质。有专一性、高效性、可调控性和活性差异性等特点。本文就近几年来AQP的结构、功能、调节机理及其与植物抗旱性研究进展作一简要综述。
- 杨淑慎山仑郭蔼光高梅孙达权邵艳军
- 关键词：水通道蛋白水分运输植物抗旱性
- 山羊乳腺特异性载体的构建及细胞转染
- 基因打靶通过DNA转移手段将外源DNA导入靶细胞或组织中，利用外源DNA序列与靶细胞内基因组中部分DNA序列间的同源性使它们在分裂前期发生DNA间的同源重组，从而对靶细胞基因组上的某一确定位点或座位进行精确的遗传修饰的一...
- 孙达权
- 关键词：胎儿成纤维细胞人溶菌酶基因基因打靶乳腺生物反应器细胞培养液
- 文献传递
- 通用型基因打靶载体的构建及其功能鉴定被引量：4
- 2008年
- 为了构建适合大多数基因座位点打靶的通用型基因打靶载体及打靶成功后去除正选择标记基因,以克隆载体pGEM-3Z为骨架,插入了一个正选择标记基因新霉素磷酸转移酶基因(neo)、两个相同的负选择标记基因单纯疱疹病毒胸苷激酶基因HSV-tk1和HSV-tk2,并在neo的两侧各添加了一个方向相同的LoxP(locus of crossing-over(x)in P1)序列及两个不同的多克隆位点序列,从而构建了载体pA2T。插入的两个不同的多克隆位点序列中,neo和HSV-tk1之间的多克隆位点序列有8个稀少的酶切位点、neo和HSV-tk2之间的多克隆位点序列有5个稀少的酶切位点,neo、HSV-tk1和HSV-tk2有各自独立的转录单元。脂质体法转染山羊成纤维细胞,用遗传霉素(G418)和丙氧鸟苷(GAC)进行正负筛选,验证了正负选择标记基因的生物活性,证明通用型基因打靶载体pA2T构建成功。载体pA2T转化组成性表达Cre重组酶(Cyclization recombination protein)的大肠杆菌BM25.8,检测到LoxP序列的生物活性,结果表明pA2T中的正选基因可以被Cre重组酶去除。因此,本研究所构建的通用型基因打靶载体pA2T,根据不同的基因座设计同源臂后,插入到MCS中可直接用于不同基因座位点的打靶,并能够在打靶成功后用Cre重组酶去除基因组中插入的neo基因,为用基因打靶的方法制作转基因动物提供了便利。
- 陈兴启孙达权刘凤军贾淑玲张涌
- 关键词：转基因动物CRE重组酶
- 通用型基因打靶载体的构建方法
- 本发明公开公开了一种通用型基因打靶载体的构建方法，该方法选择正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)，其中，在正选基因(neo)的两端加入Loxp序列，将正选基因(neo)和两个负选基因(HSV-tk1)分别连...
- 陈兴启张涌孙达权刘凤军张玉玲
- 文献传递
- 通用型基因打靶载体的构建方法
- 本发明公开了一种通用型基因打靶载体的构建方法，该方法选择正选基因(neo)和两个负选基因(HSV－tk1)，其中，在正选基因(neo)的两端加入Loxp序列，将正选基因(neo)和两个负选基因(HSV－tk1)分别连入克...
- 陈兴启张涌孙达权刘凤军张玉玲
- 文献传递
- 人-牛异种克隆胚构建及其线粒体来源
- 2008年
- 通过人-牛异种核移植技术获得异种克隆囊胚,便于在不消耗人类卵母细胞的情况下从异种克隆胚中分离出人类干细胞。通过透明带下注射法将人胎儿成纤维细胞和牛胎儿成纤维细胞分别注入去核牛卵母细胞中构建异种和同种胚胎,并比较两者之间的融合率、卵裂率、8-细胞发育率以及囊胚率。并对处于2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚、囊胚阶段的异种克隆胚的线粒体DNA来源进行检测。结果表明,异种克隆胚体外各个阶段的发育率均低于同种克隆胚,尤其是8-细胞到囊胚阶段的发育率,以及囊胚率都显著低于同种克隆胚(P<0.05)。异种克隆胚在2-细胞到桑椹胚阶段检测到人、牛线粒体DNA共存,囊胚阶段只检测到牛线粒体DNA。结果表明:牛卵母细胞可以重编程人胎儿成纤维细胞,完成异种克隆胚植入前的胚胎发育,异种克隆胚由于核质相互作用的不谐调,影响其发育能力,使其囊胚率显著低于同种克隆胚。牛线粒体DNA存在于植入前异种胚胎发育的各个阶段。异种克隆胚胎用于人类胚胎干细胞分离具有可行性。
- 杨鹭张东王勇胜孙达权张涌
- 关键词：异种克隆治疗性克隆体细胞核移植线粒体
- 通用型高效真核表达载体p3I-GFPN及采用该载体构建的抗乳腺炎的转基因载体
- 本发明公开了一种通用型高效真核表达载体p3I-GFPN及采用该载体构建的抗乳腺炎的转基因载体，本发明构建的抗乳腺炎转基因载体pCMV/CSN2-hLY-hIFA，在乳腺细胞中能高水平表达绿色荧光蛋白，在泌乳期的乳腺细胞中...
- 孙达权陈兴启张涌刘凤军杨鹭张东
- 文献传递
- 体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究被引量：8
- 2008年
- [目的]探讨供体细胞类型、移植胚胎发育阶段、数量及部位对山羊转基因克隆效率的影响。[方法]利用体细胞核移植技术将转染人乳铁蛋白基因hLF的山羊胎儿成纤维细胞（GFF）和乳腺上皮细胞（GMGE）移植到MII期去核卵母细胞内，经电融合、激活、体外培养后，2-8细胞期克隆胚被移植到同期发情山羊的输卵管内，囊胚被移植到子宫角内。[结果]GFF与GMGE的妊娠率相近（输卵管移植妊娠率分别为26.47%及20.00%）；在GFF，输卵管移植的妊娠率与子宫角内移植妊娠率接近（分别为26.47%及25.00%），输卵管移植胚胎平均数为21.2组的妊娠率显著高于5.93组和9.64组（40.00%及26.67%，21.43%）。[结论]供体细胞类型、移植胚胎的发育阶段及移植部位对山羊转基因克隆效率的影响不大，但对于输卵管移植，受体羊移植胚胎数量对妊娠率有明显的影响。此外，该研究还提示了利用成年羊乳腺上皮细胞制作转基因动物的可行性。
- 刘凤军张玉玲杨自军陈兴启孙达权王国华张涌
- 关键词：体细胞核移植转基因人乳铁蛋白基因乳腺上皮细胞
