孔冬妮
- 作品数：38 被引量：88H指数：4
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 鸡传染性支气管炎病毒H120株和H52株种毒的制备与鉴定
- 2019年
- 鸡传染性支气管炎病毒H120株、H52株种毒由中国兽医药品监察所制备和供应,种毒的保存期为10年,为了保证种毒的质量和供应,需要定期制备种毒。将H120株、H52株毒种接种SPF鸡胚进行传代培养,收获鸡胚尿囊液,与50 g/L牛乳蔗糖溶液等体积混匀,进行分装和冷冻真空干燥。对其进行剩余水分测定、真空度测定、病毒含量、安全性、免疫原性、纯净(无菌检验、支原体检验、外源病毒)和特异性检验,检验结果表明,各项检验均符合规定。同时为了区分H120株、H52株种毒,用实验室已建立的RT-PCR和酶切方法对两种种毒进行鉴别检验,结果表明能准确区分H120株和H52株种毒。试验结果为疫苗生产提供了能长期保存且稳定性好、高滴度的生产用种毒,也可为其他禽源病毒种毒的制备提供借鉴。
- 孔冬妮侯力丹刘丹李启红杨承槐黄小洁
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒种毒
- 禽多瘤病毒VP4蛋白单克隆抗体的制备及其间接免疫荧光检测方法的初步建立
- 2024年
- 为制备禽多瘤病毒(avian polyomavirus,APV)VP4蛋白单克隆抗体,初步建立APV的间接免疫荧光检测方法,本研究通过原核表达APV VP4蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,以制备的VP4单克隆抗体为一抗,FITC-山羊抗小鼠IgG为二抗,优化反应条件。结果表明,筛选获得15株阳性细胞株,经亚型鉴定,其中2株单克隆抗体的重链为IgG2b类型,13株重链为IgG1类型,轻链均为κ型。选择3株细胞制备单克隆抗体,这3株抗VP4单克隆抗体浓度分别为2.9、2.6、3.2 mg/mL;亲和常数分别为1.06×10^(10)、2.95×10^(9)、9.60×10^(9)。其中两株效价均为1∶204800,另一株的效价为1∶51200。经Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,这3株单克隆抗体均能与APV发生特异性反应;本研究建立的间接免疫荧光检测方法的最适条件为:Anti-A-VP4-151∶1000倍稀释,4℃条件下过夜孵育,二抗1∶200稀释,37℃条件下孵育1 h。以建立的方法检测细胞中的减蛋综合征病毒(EDSV)、网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)和APV,只有APV的检测结果显示阳性,检测其他病毒的结果均为阴性。应用该单克隆抗体建立的间接免疫荧光方法在细胞上能检出至少5 TCID50 APV感染。本研究制备的单克隆抗体和建立的间接免疫荧光方法为APV感染的流行病学调查和实验室诊断奠定了基础。
- 汪溪翟天舒许冠龙王嘉孔冬妮邓永闫佳佳薛青红印春生何后军陈小云毛娅卿
- 关键词：原核表达单克隆抗体间接免疫荧光试验
- 禽多瘤病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2023年
- 为建立检测禽多瘤病毒(avian polyomavirus,APV)的快速诊断方法,根据APV VP4基因的保守序列设计并合成引物和探针,建立了TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,验证了其特异性、敏感性和重复性,并利用建立的方法对采集的临床样本组织进行检测。结果显示,建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的C_(t)值与标准品在1.0×10^(9)~1.0×10^(2)copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.996,斜率为-3.021,检测下限为1.0×10^(1)copies/μL,与其他禽源病毒未发生交叉反应,重复性试验的变异系数均小于2%,重复性好,并且该方法在实际临床检测中可行。上述结果表明,建立的方法可用于禽多瘤病的早期诊断和APV快速检测。
- 闫佳佳翟天舒许冠龙王嘉孔冬妮邓永汪溪薛青红程佳毛娅卿印春生
- 关键词：VP4基因
- 羊痒病诊断方法研究进展被引量：1
- 2014年
- 羊痒病是传染性海绵状脑病的原模型,主要感染绵羊、山羊和欧洲盘羊,羊痒病至今还没有有效的治疗措施。因此,快速、敏感、特异性的诊断方法对羊痒病的监测和防控有着极其重要的意义。世界动物卫生组织推荐的羊痒病诊断方法包括免疫印迹、组织病理学、免疫组化及毒株鉴定。2012年,我国将羊痒病列入重大外来动物疫病监测计划。与其他的朊蛋白病一样,羊痒病是一种渐进性、致死性的中枢神经系统变性疾病。目前认为传染性海绵状脑病的病原因子是一种编码宿主蛋白的PrPC转变为异常细胞型PrPSC沉积在大脑,导致疾病。论文对羊痒病诊断技术的研究进展做一概述,为该病的进一步研究及防控提供参考。
- 赵柏林宋晓晖胡冬梅曲萍孙雨孔冬妮王功民
- 关键词：传染性海绵状脑病
- 犬细小病毒2c亚型毒株的分离与鉴定被引量：1
- 2019年
- 采集一疑似犬细小病毒(CPV)患犬的粪便,用纳米PCR方法对病料进行CPV检测,并应用猫肾细胞F81进行病毒分离培养,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒在F81细胞中的增殖动态。利用PCR扩增分离病毒的VP2基因,测序结果用DNAMAN软件对获得的VP2基因序列进行拼接,并与NCBI上已经公布的犬细小病毒的全基因组序列以及相关蛋白的核酸序列进行比较,确定其所分离的病毒株型并推导氨基酸序列。结果表明,纳米PCR检测结果为CPV核酸阳性,病料接种到F81细胞培养后出现明显细胞病变(CPE),血清学鉴定为CPV抗原阳性,序列测定分析表明,该毒株VP2基因开放阅读框(ORF)为1755 bp。进化分析显示,该毒株属于CPV-2c型,并命名为CPV-2c-Guangxi23。
- 邓永孔冬妮侯力丹毛娅卿王嘉
- 关键词：犬细小病毒
- 抗鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及其应用研究
- 2024年
- 为制备针对鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)的单克隆抗体,以CIAV的VP2原核表达蛋白作为抗原免疫小鼠,经杂交瘤技术获得3株能稳定分泌抗VP2蛋白特异性抗体的细胞株,进一步经IFA筛选出特异性和灵敏度俱佳的杂交瘤细胞Mab-VP2-4株,制备的小鼠腹水效价达到1∶2000。结果显示,制备的抗VP2蛋白单克隆抗体可与多株CIAV感染的MDCC-MSB1细胞发生特异性反应,而对EDSV、ALV、ILTV、ARV以及空白MDCC-MSB1细胞、CEF细胞等均无交叉反应,特异性良好,且应用于IFA方法时对CIAV感染的最低检出限为5 TCID 50。以该单克隆抗体对市场上10种不同来源的禽活疫苗进行病毒分离结合单克隆抗体IFA检测,同时与《中国兽药典》规定的鸡检查法进行对比检测,结果一致,均未检出CIAV污染。本研究制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性单克隆抗体,为该病特异性诊断方法的建立奠定了基础。
- 侯力丹薛麒王嘉孔冬妮吴宏举翟天舒邓永毛娅卿吴华伟孙瑶刘丹
- 关键词：鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体间接免疫荧光
- 一种抗鸡传染性贫血病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株、单克隆抗体、试剂或试剂盒及其应用
- 本发明属于兽用生物技术检测领域，具体涉及一种抗鸡传染性贫血病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株、单克隆抗体、试剂或试剂盒及其应用。本发明提供了一株抗鸡传染性贫血病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株CIAV Mab‑VP2‑...
- 刘丹吴华伟侯力丹黄小洁薛麒孔冬妮薛青红邓永陈晓春
- 我国禽用生物制品现状及禽用病毒类生物制品质量情况分析
- 2024年
- 对我国禽用生物制品基本现状及2013-2022年禽用病毒类生物制品的质量情况进行总结,分析存在的问题,提出强化SPF鸡(鸡胚)质量控制、持续开展风险监测方法研究、完善禽用标准物质、推动禽用新型生物制品研制的建议。
- 吴华伟刘丹王嘉陈晓春黄小洁孔冬妮苏佳侯力丹薛麒邓永翟天舒赵炜白洪旭薛青红
- 鸡减蛋综合征灭活抗原不同保存方式的分析比较
- 2017年
- 为比较不同保存方式对鸡减蛋综合征灭活抗原的影响,采用禽腺病毒京911株(CVCC AV70)经尿囊腔接种易感鸭胚,收获感染鸭胚液,经β-丙内酯灭活后,对该抗原的保存条件及其稳定性等方面进行优化。冻干抗原与未冻干抗原在相同温度下,冻干抗原HA效价下降较慢。冻干抗原在2~8℃和-15℃以下保存,HA效价没有明显差异。因此,生产的鸡减蛋综合征灭活抗原要在冻干后保存在2~8℃最佳。保存条件的优化不仅可以减少经济损失,而且还有助于更好的控制禽腺病毒疫情的暴发。
- 王嘉顾庆云金红岩毛娅卿吴涛王哲孔冬妮李岭
- 关键词：鸡减蛋综合征禽腺病毒HA效价
- 一种副流感病毒5型TaqMan荧光定量RT-PCR检测试剂盒
- 本发明涉及一种副流感病毒5型的TaqMan荧光定量RT‑PCR检测试剂盒，所述试剂盒含有用于检测副流感病毒5型的一对特异性引物和TaqMan探针。本发明的试剂盒检测结果特异性好，PIV5扩增曲线良好，其他兽用病毒生物制品...
- 吴华伟刘丹秦义娴陈晓春高金源孔冬妮高月异黄小洁
- 文献传递
