姜小磊
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 秀丽隐杆线虫全身性与组织特异性表达重组载体的构建
- 2009年
- 利用PCR技术从秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)基因组DNA中扩增获得Act-1基因的核心启动子序列、T07F10基因的核心启动子序列与3UTR的Poly(A)信号序列以及从表达载体pEGFP-N1上扩增获得SV40早期mRNA的Poly(A)信号序列与EGFP基因.以克隆载体pBluescript SK+为基本骨架,分别构建由Act-1基因的核心启动子序列、T07F10基因的核心启动子序列调控的、EGFP作为报告基因的秀丽隐杆线虫全身性表达重组载体和组织特异性表达重组载体,为研究不同类型载体在秀丽隐杆线虫体内的表达模式提供基础.
- 周前进姜小磊张红丽杜爱芳
- 关键词：秀丽隐杆线虫核心启动子EGFP基因组织特异性表达
- 捻转血矛线虫微粒体氨肽酶基因的获得方法及应用
- 本发明提供一种获取捻转血矛线虫(H.contortus)微粒体氨肽酶基因的方法，通过总RNA的抽提和H11 cDNA序列的克隆，H11 cDNA序列同源性比较及氨基酸序列分析，H11基因组序列的克隆及结构分析。本发明参考...
- 杜爱芳周前进张红丽姜小磊
- 文献传递
- 捻转血矛线虫ES15//ES24在秀丽隐杆线虫体内的表达特性研究
- 捻转血矛线虫病是危害牛、羊等反刍动物的主要寄生虫病,其病原是捻转血矛线虫,成虫以宿主的血液和粘膜为食,导致动物贫血、消瘦、发育不良、生长缓慢甚至死亡,给畜牧业带来重大损失。目前捻转血矛线虫的控制主要靠广谱驱虫药物,化学药...
- 姜小磊
- 关键词：捻转血矛线虫秀丽隐杆线虫分泌排泄抗原启动子克隆
- 文献传递
- 捻转血矛线虫病的疫苗防治研究被引量：4
- 2009年
- 疫苗是捻转血矛线虫病防治研究中的热点之一,已有多种疫苗候选抗原得到鉴定,多数抗原在线虫的肠道表达,其天然提取物能够提供有效的免疫保护,减卵率可达70%～95%.由于糖基化作用、空间构象的错误折叠等因素的影响,疫苗候选抗原的重组形式不能为动物提供有效的免疫保护;免疫策略难以制定、佐剂难以选择也成为疫苗研制中的桎梏.因此,开发与天然提取物具有相似功能的转基因蛋白成为目前疫苗研究中的焦点,秀丽隐杆线虫表达系统和寄生性线虫细胞系的培育是研究中比较有潜力的两个方向;同时,RNAi技术等新方法的运用也加快了新的疫苗候选抗原的鉴定进程.
- 杜爱芳周前进张红丽姜小磊
- 关键词：捻转血矛线虫重组抗原秀丽隐杆线虫细胞系
- Act-1核心启动子转录的EGFP基因在秀丽隐杆线虫体内的表达
- 2009年
- 克隆获得的秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)Act-1基因的核心启动子,经BglⅡ和HindⅢ限制性内切酶消化后,与用相同酶消化的pEGFP-4.1载体连接(由pEGFP-N1去掉CMV启动子形成),构建重组表达载体Pact-EGFP。通过脂质体介导转染Vero细胞,结果发现EGFP在Vero细胞中有表达,但表达量很低。通过显微注射将Pact-EGFP与pRF4共注射到C.elegans性腺,结果发现EGFP能够在C.elegans的皮层、副皮层以及咽部表达,根据表达部位不同,获得了2种转基因线虫株。研究结果显示:EGFP在C.elegans体内的表达水平明显高于在Vero细胞内的表达,表明C.elegansAct-1基因的核心启动子区域可能存在与转录水平密切相关的独特的转录调节元件。该研究为进一步实现寄生性线虫基因在C.elegans表达提供了参考。
- 周前进姜小磊张红丽杜爱芳
- 关键词：EGFP秀丽隐杆线虫显微注射
- 捻转血矛线虫H11部分功能域基因的原核表达与分析被引量：3
- 2008年
- 生物信息学软件分析表明，捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）ZJ株的H11抗原基因含有4个糖基化位点与1个锌结合区，为分析这些功能域在H11天然抗原诱导的免疫保护中的作用，对H11部分基因进行克隆和表达．参照本实验室在GenBank上登录的捻转血矛线虫ZJ株的H11基因序列设计引物，扩增H11开放阅读框670～1710bp的部分基因序列，命名为HPS（H1jpartial sequence）．基因片段与表达载体pET-28b分别以NdeI、XhoI酶切后构建重组表达载体pET28bHPS，并将其转入大肠杆菌BL21中，提取质粒经PCR和酶切鉴定获得阳性质粒并对其进行测序．结果表明，扩增得到的目的基因片段为1041bp，与已发表的ZJ株和国外株参考序列比较，核苷酸同源性分别为100％和98．8％将重组表达载体用IPTG诱导表达，表达产物利用SDS-PAGE和Western-blotting检测表明，HPS基因在大肠杆菌中成功表达，融合蛋白的分子量约为37．34kDa，诱导6h的蛋白表达量可达到58．9％．
- 张红丽姜小磊周前进杜爱芳
- 关键词：捻转血矛线虫
