周旭
- 作品数：69 被引量：172H指数：6
- 供职机构：上海生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家科技重大专项甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HCV核心区全基因片段的表达及产物抗原活性分析被引量：2
- 2003年
- 目的 表达并纯化核心基因全片段,以得到良好特异性的核心蛋白。方法 自克隆载体pUC19/HCV-C中切下核心基因全片段,将其插入带有His 6纯化标签的融合表达质粒pTrcHisA中,转化入大肠杆菌,经IPTG诱导,通过SDS-PAGE、中和抑制ELISA和Western blot对占菌体总蛋白15％以上的表达产物进行鉴定,用IMAC一步法纯化,纯化产物检测HCV阴阳性血清标本,并与日本东燃公司核心抗原C_(11)检测结果进行比较。结果 核心基因全片段插入pTrcHisA载体,转化入大肠杆菌TOP10后构建成功稳定的表达株PTrcHisA/HCV-C/TDP10,用纯化产物检测血清标本,与日本东燃公司核心抗原C_(11)检测结果的阳性均值与阴性均值之比及A值分布基本相同。结论 表达抗原具有良好的免疫反应性和特异性。
- 张新芳李益民张俭丁进芳周旭
- 关键词：抗原活性丙型肝炎
- 重组质粒二级结构对丙型肝炎病毒E2蛋白基因表达的影响被引量：1
- 2003年
- 将含HCV/E2基因的重组质粒 pUC18/HCV -E2的BamHI酶切基因片段和NcoⅠ +HindⅢ酶切基因片段分别克隆到原核表达载体pRSETHis中 ,构建两株重组HCV/E2重组表达质粒 pRSET·C/E2和 pRSET·A/E2。在诱导表达中 pRSET·A/E2的外源基因获得了高效表达 ,而 pRSET·C/E2的外源基因完全未得到表达。
- 周旭李益民夏宁邵
- 关键词：丙型肝炎病毒重组质粒基因表达E2蛋白
- 呼吸道合胞病毒减毒活疫苗研制进展
- 2015年
- 人呼吸道合胞病毒（resipiratory syncytial virus，RSV）是世界范围内儿童下呼吸道感染的主要病原体，但其疫苗的开发面临许多困难和挑战。随着反向遗传学及相关技术和工具的应用，RSV疫苗，尤其是减毒活疫苗的研制已经取得很大进展。此文就RSV减毒活疫苗研发的主要突破和研究进展进行综述。
- 傅生芳余黎周旭
- 关键词：呼吸道合胞病毒反向遗传学疫苗减毒
- 四价轮状病毒灭活疫苗的制备及应用
- 本发明涉及一种四价轮状病毒灭活疫苗的制备方法，该方法将胰酶消化分散的小牛肾细胞或Vero细胞培养成片后以不同的感染复数分别接种G1、G2、G3、G4型轮状病毒，用无血清D-MEM培养液至细胞出现明显病变后收获病毒液并经浓...
- 周旭
- 文献传递
- 人呼吸道合胞病毒截短F1重组蛋白包涵体的制备、纯化和复性被引量：5
- 2015年
- 目的将前期在大肠埃希杆菌中获得表达的A型人呼吸道合胞病毒兰州分离株截短的F1重组蛋白进行纯化和复性,为后期动物免疫制备抗原。方法 37℃诱导重组菌体p ET-42b-F1J/Rossata,诱导完毕后离心收集菌体,高压破碎菌体并收集包涵体后用不同浓度的Triton X-100(细胞裂解液)洗涤包涵体3次。洗涤的包涵体用8 mol/L尿素进行溶解并用镍离子亲和层析方法进行初步纯化,用阳离子交换层析方法对初步纯化蛋白进行最终的纯化。亲和层析纯化蛋白用3种不同的复性液进行了稀释复性。结果 37℃诱导5 000 m L重组菌p ET-42b-F1J/Rossata共收获37 g湿菌体,经过不同浓度Triton X-100洗涤包涵体后纯度可达75%。包涵体用8 mol/L尿素溶解后经镍离子亲和层析纯化纯度约为40%,再用阳离子交换层析介质SP HP进一步纯化样品后纯度可达90%。纯化蛋白以3种不同的复性液都能得到复性,其中复性液3的复性效果相对较好。结论实验中探索了人呼吸道合胞病毒截短F1重组蛋白包涵体的纯化方法及步骤,为后期的蛋白制备及动物免疫奠定了基础。
- 傅生芳朱传凤姜英安静余黎周旭
- 关键词：包涵体复性
- 气相色谱法对轮状病毒疫苗中β-丙内酯测定的研究被引量：6
- 2010年
- 用气相色谱法对轮状病毒疫苗生产过程中采用的β?丙内酯灭活剂进行残留量的检测,检测结果表明:采用HP-INNOWAX毛细管色谱柱(15m×0.53mm×1.0μm),氢火焰检测器检测轮状病毒疫苗中β?丙内酯是极其灵敏的,该法最低检测限为:1.43×10-4μl/μl。实验还证明:轮状病毒疫苗中已不存在β?丙内酯。
- 徐英魏然姜英周旭高雪军朱莉萍
- 关键词：气相色谱法轮状病毒疫苗
- 人呼吸道合胞病毒(hRSV)兰州株的黏附蛋白(G)片段的表达、纯化和鉴定
- 目的:克隆并表达了人呼吸道合胞病毒(hRSv)兰州株的黏附蛋白(G)基因。方法:利用PCR技术扩增hRSV兰州株的G基因,克隆于原核表达载体pET-42b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,镍离子...
- 朱传凤傅生芳寇桂英陈汉泉余黎周旭
- 关键词：呼吸道合胞病毒
- 文献传递
- Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗稳定性研究被引量：1
- 2009年
- 为了研究Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的稳定性,对2-8℃、25℃、37℃放置不同时间的9批成品疫苗定期取样观察外观物理性状、检测病毒滴度。结果表明,在2-8℃可保存两年以上,疫苗滴度保持不变;在25℃放置2周、37℃放置1周后疫苗滴度开始下降,因此,该疫苗在贮存、运输以及使用过程中环境温度应以2-8℃为宜。
- 寇桂英包红安红周旭
- 关键词：轮状病毒热稳定性病毒滴度
- 轮状病毒四价灭活疫苗的制备及在小鼠的免疫原性研究被引量：5
- 2008年
- 制备轮状病毒四价灭活疫苗,观察其在小鼠体内的抗体应答情况。实验采用轮状病毒原液经凝胶过滤层析纯化,灭活后配制四价疫苗,肌肉注射免疫小鼠,ELISA法测定小鼠血清IgA、IgG。将单价G1、G2、G3、G4型灭活病毒原液及四价轮状病毒灭活疫苗免疫小鼠后,均可刺激产生针对RV的高水平的特异性IgG抗体,但IgA应答较弱。表明四价轮状病毒灭活疫苗在小鼠中具备很好的免疫原性。
- 姜英王名强傅生芳安红周旭
- 关键词：小鼠免疫IGGIGA
- 口服轮状病毒活疫苗病毒滴度评价国家参考品的制备被引量：2
- 2016年
- 目的 制备口服轮状病毒（rotavirus,RV）活疫苗病毒滴度评价的国家参考品.方法 选取检定合格的口服RV活疫苗原液,加入保护剂,1.0 ml/安瓿分装,冷冻干燥,制备病毒滴度参考品.用微量细胞病变法检测参考品的病毒滴度,用Karber法计算半数细胞培养感染量（50％ cell culture infective dose,CCID50）.由3家实验室对参考品的病毒滴度进行协同标定,采用单因素方差分析和最小显著差数法对3家实验室的标定结果进行统计学分析.另外,将参考品于-20℃放置1年、4℃放置1年、37℃放置14d、-60℃放置2年,测定病毒滴度,分析参考品的热稳定性和长期稳定性.结果 经单因素方差分析比较,3家实验室检测结果的差异无统计学意义（F=0.379,P=0.686）.采用最小显著差数法对3家实验室检测结果的均值进行两两比较,差异亦无统计学意义（s（x）值均为0.078 2,P值均＞0.05）.参考品的平均病毒滴度为6.5 lgCCID50/ml,于不同温度放置一段时间后病毒滴度下降均未超过1.0 lgCCID50/ml.长期稳定性试验结果的变异系数为4.9％.结论 制备了可用于口服RV活疫苗病毒滴度检测的国家参考品.
- 刘艳高加梅周旭鱼柯石岩刘悦越杜加亮张韵祺范行良赵岩国泰
- 关键词：轮状病毒疫苗病毒滴度
