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实时定量PCR的原理及其在植物病理学研究中的应用被引量：9: 2007年; 实时定量PCR(Real-time quantitative)是一种利用荧光信号实时监测每个循环的扩增产物,从而实现对模板进行定量分析的新技术。它具有快速、灵敏、精确等优点。该技术在分子诊断、分子生物学研究、动植物检疫以及食品安全检测等方面有广泛的应用。本文综述了实时定量PCR的原理、影响因素及其在植物病理学研究中的应用。; 吴静吴茂森何晨阳; 关键词：实时定量PCR CT值

OsCtBP-A基因过量表达和RNAi沉默对水稻根系生长和抗性的影响被引量：2: 2010年; 为了阐明己克隆的水稻C端结合蛋白家族基因O sC tBP-A的功能,构建了该基因的过量表达和RNA i沉默载体,通过农杆菌介导转化水稻品种日本晴愈伤组织,分别获得了45个过量表达和75个RNA i沉默T0代转基因植株,并进行了PCR和GUS染色鉴定。T1代过量表达株O sC tBP-A基因表达量明显增加,苗期根系生长增加,对水稻白叶枯病抗性无明显变化;而基因沉默株O sC tBP-A基因表达量显著下降,苗期根系发育迟缓,抗旱性明显降低,抗病性减弱。表明O sC tBP-A基因的表达可能对水稻苗期根系发育、抗旱性和抗病性具有不同程度的调控作用。; 吴茂森李磊吴静陈华民何晨阳; 关键词：RNAI沉默根系发育抗性

OsBTF3过表达转基因水稻株系的创制及其分子鉴定被引量：4: 2012年; 本研究旨在创制OsBTF3过表达转基因水稻株系,为验证OsBTF3基因在水稻抗性和生长发育中的功能、评价其在水稻农艺性状遗传改良中的应用价值提供试验材料。通过基因过表达载体构建、水稻愈伤组织诱导、农杆菌介导愈伤组织转化、植株再生、潮霉素抗性(HygR)筛选及PCR验证、基因过表达RT-Q-PCR检测等方法,成功地获得了97个T0代和20个T1代过表达转基因株系,并分别得到分子验证。与野生型对照株相比,5个T1代过表达株系中的OsBTF3基因表达水平显著提高,平均高达3.58倍。因此,由组成型表达的35S启动子驱动的OsBTF3基因在转基因水稻株系中成功地得到了增量表达,并对水稻生长发育、抗病性和抗逆性具有调控作用。; 李广旭陈华民吴静吴茂森何晨阳; 关键词：过表达

受病原细菌诱导表达增强的水稻转录因子基因OsBTF3的分子鉴定被引量：13: 2009年; 【目的】分子克隆和定性分析受水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)诱导的水稻转录因子基因OsBTF3。【方法】用生物信息学和RT-PCR方法鉴定和分离OsBTF3基因全长cDNA序列;用原核表达和亚细胞定位方法分析产物表达及其定位;用RT-Q-PCR方法分析基因的组织表达特性和对Xoo侵染的的应答表达。【结果】从水稻品种日本晴cDNA中克隆了OsBTF3全长序列,它编码具有175个氨基酸的蛋白质,具有核定位信号和NAC保守结构域;OsBTF3与其它植物BTF3序列同源性可达79%～88%;在大肠杆菌中表达产生一个与预测分子量大小一致的27kD蛋白质;OsBTF3::GFP融合蛋白主要在细胞核和细胞膜出现;OsBTF3基因在水稻不同发育期和组织中均有表达,但显著地受Xoo侵染的诱导而增强。【结论】成功分离了一个受Xoo诱导表达增强的水稻转录因子基因OsBTF3;OsBTF3主要定位于细胞核和细胞膜,可能在水稻感病性表达中起调控作用。; 李广旭吴茂森吴静何晨阳; 关键词：水稻基因克隆感病性

一个受病原菌抑制的水稻结合蛋白基因OsCtBP-A的分离及其表达分析: ＜正＞C端结合蛋白（CtBPs）家族成员在动物发育过程中具有转录辅阻遏物的作用,可特异性地结合DNA转录阻遏物。拟南芥AN与CtBPs抑制转录功能相似,但缺乏CtBPs中保守的结构特征。AN基因能够调节叶细胞宽度,影响叶...; 李磊吴茂森吴静柏亚男李广旭陈华民何晨阳; 关键词：水稻基因表达信号分子; 文献传递

受水稻白叶枯病菌抑制的水稻结合蛋白OsCtBP-A基因的RNAi分析: 阐明水稻-白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv．oryzae,Xoo）互作中重要水稻基因的功能, 对于进一步深入了解水稻抗/感病机制,探索更为科学有效的防治方法具有重要的意义。前期工作用 cDNA-AF...; 吴静吴茂森何晨阳; 关键词：水稻白叶枯病菌 RNAI 基因功能; 文献传递

RNAi介导的OsBTF3基因沉默及其对水稻籽粒相关性状的影响被引量：1: 2012年; 为了创制OsBTF3基因沉默的水稻植株、验证该基因在水稻籽粒相关性状中的功能、评价其在水稻遗传改良中潜在的应用价值,设计和合成OsBTF3基因序列的引物、扩增部分基因片段,构建RNAi基因沉默载体、通过农杆菌介导转化愈伤组织、植株再生、潮霉素抗性筛选和PCR验证、定量分析OsBTF3基因表达量,测定转基因水稻籽粒相关性状。结果表明,成功地获得了20个T1代OsBTF3-RNAi转基因株系,OsBTF3基因表达量得到显著的抑制和干扰,抑制效果平均达到85%;与野生型对照株相比,5个所测定RNAi转基因株系的穗长、穗粒数、千粒重和穗粒重等籽粒相关性状明显地减小或降低。因此,RNAi介导的基因沉默导致了OsBTF3基因表达水平抑制以及在籽粒性状中的功能缺失;OsBTF3可能是一个调控水稻籽粒相关性状重要的功能基因。; 李广旭陈华民刘维振吴静吴茂森何晨阳; 关键词：水稻 RNA干扰基因沉默

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吴静