吴宗福 作品数:17 被引量:33 H指数:3 供职机构: 南京农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏高校优势学科建设工程资助项目 教育部留学回国人员科研启动基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
重庆屠宰场猪链球菌感染的调查 被引量:11 2022年 旨在调查2021年重庆地区屠宰场表观健康猪群中猪链球菌的血清型、耐药和毒力特征,为制定该地区猪链球菌病的防控策略提供参考。以2021年重庆地区屠宰场表观健康猪扁桃体样品为试验材料,分离猪链球菌并对菌株进行血清型分型、耐药基因检测、药敏试验、斑马鱼毒力试验,分析猪链球菌的流行特征。结果显示:2021年5—6月于重庆屠宰场共采集表观健康猪扁桃体154份,检出猪链球菌阳性样本80份(51.95%),从中分离到菌株87株;主要血清型分别为16型(16.09%,14/87)、9型(9.20%,8/87)、4型(8.05%,7/87),而血清2型检出率较低,占比4.60%(4/87)。分离株对林可酰胺类、四环素类、大环内酯类抗生素耐药率较高,分别为100%(87/87)、95.40%(83/87)、93.10%(81/87);对氨基糖苷类抗生素耐药率为59.77%(52/87);对利奈唑胺、β-内酰胺类、万古霉素、利福平的耐药率较低,分别为5.75%(5/87)、5.75%(5/87)、0(0/87)、0(0/87);96.55%(84株)的菌株对3类及以上的抗菌药耐药,属于多重耐药菌株。选取19株猪链球菌代表菌株进行斑马鱼攻毒试验,结果显示78.95%(15/19)的菌株对斑马鱼致死率≤33.33%,但血清3型菌株2021WUSS071和新荚膜基因簇-7(NCL-7)菌株2021WUSS102对斑马鱼的致死率高,分别为93.33%、86.67%,属于强毒株;菌株2021WUSS067和2021WUSS082对斑马鱼的致死率分别为60.00%、40.00%,属于中等毒力菌株。研究表明,重庆地区屠宰场猪群中猪链球菌流行率较高且血清型复杂,绝大多数菌株属于多药耐药,且存在毒力较强的菌株,需引起重视。 都玉 刘召颖 彭泽仁 吴宗福关键词:猪链球菌 耐药 毒力 广西、四川两地屠宰场猪链球菌致病特征分析 被引量:1 2023年 【目的】猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要致病菌,同时也是一种人畜共患病原。屠宰场健康猪的猪链球菌感染率较高,血清型多而复杂,是人和猪的重要传染源。四川、广西两地都曾暴发猪链球菌疫情,大量生猪发病死亡的同时,也导致部分与病猪有密切接触的人群发病死亡。因此,对上述两地区屠宰场进行猪链球菌感染调查,明确其致病特征,具有重要公共卫生意义。【方法】本研究自2021‒2022年采集广西、四川两地屠宰场健康猪扁桃体,分离鉴定猪链球菌并进行血清型分型,对分离株进行斑马鱼毒力、小鼠毒力试验,并对毒力株进行基因组测序,进行多序列位点分型(multilocus sequence typing,MLST)及毒力标志基因分析,探究其致病特征。【结果】广西57份健康猪扁桃体样品猪链球菌阳性率为84.21%(48/57),分离鉴定出60株猪链球菌,其中分离率最高的是血清31型(16.67%,10/60),其次为9型(11.67%,7/60)、4型(10.00%,6/60)、12型(8.33%,5/60)等,2型菌株仅分离出1株,含2种及以上不同血清型猪链球菌的扁桃体占33.33%(16/48);四川250份健康猪扁桃体样品猪链球菌阳性率为10.8%(27/250),分离鉴定出41株猪链球菌,其中分离率最高的血清型为31型(34.15%,14/41),其次为16型(17.07%,7/41)、9型(12.20%,5/41)、28型(9.76%,4/41)等,2型菌株仅分离出1株,含有2种以上不同血清型的扁桃体占33.33%(9/27)。选择44株不同血清型的代表菌株(广西28株,四川16株)进行斑马鱼毒力试验,结果显示,5株菌株对斑马鱼致病性较强,攻毒计量在3×106 CFU/尾时,对斑马鱼的致死率高达70%‒100%,其中广西3株分别为2型、9型和新荚膜基因簇(novel capsular polysaccharide loci,NCL)18型,四川2株分别为2型和9型。对上述5株毒力株进行小鼠毒力试验,结果显示4株菌株致死率高达80%‒100%,1株致死率为60%,与斑马鱼试验较为相符。MLST及毒力标志基因分析表明,2株血清2型菌� 彭泽仁 吴宗福关键词:猪链球菌 屠宰场 一种猪链球菌菌蜕及其制备方法和应用 本发明公开了一种猪链球菌菌蜕及其制备方法和应用,所述猪链球菌菌蜕的制备方法包括以下步骤:将包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的四环素诱导调控系统和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的猪链球菌细胞壁穿孔酶Crf... 马家乐 刘嘉楠 蒲晚霞 吴宗福 姚火春纤维二糖利用基因簇对巴氏链球菌生长及毒力的影响 2024年 [目的]本研究旨在明确纤维二糖利用基因簇对巴氏链球菌生长及毒力的影响。[方法]以肺炎链球菌基因组中纤维二糖利用基因簇为参考,同源性比对分析猪源巴氏链球菌WUSP067中纤维二糖利用基因簇,通过荧光定量PCR(RT-qPCR)、RT-PCR、缺失株构建、不同条件下的生长曲线测定、小鼠毒力试验等评价其对巴氏链球菌生长及毒力的影响。[结果]巴氏链球菌WUSP067基因组中存在2个潜在的纤维二糖利用相关基因簇(cellobiose locus, CL),将其分别命名为CL1和CL2,它们均包括编码磷酸转移酶系统和β-葡萄糖苷酶的基因。RT-qPCR结果显示,与添加10 g·L^(-1)葡萄糖的DMEM培养基相比,在添加10 g·L^(-1)纤维二糖的DMEM培养基中,CL1中的BglP1_(wp)和BglA_(wp)基因表达量无显著差异,而CL2中celA_(wp)和celB_(wp)基因表达极显著上调(P<0.000 1),分别上调49倍和33倍,提示其参与利用纤维二糖。选择CL2深入研究,RT-PCR结果显示,该基因簇由2个操纵子组成。构建编码β-葡萄糖苷酶的celA_(wp)基因缺失株,生长曲线分析表明,野生株和celA_(wp)基因缺失(ΔcelA_(wp))株在THB、DMEM+10 g·L^(-1)葡萄糖条件下生长情况无明显差异,但在DMEM+10 g·L^(-1)纤维二糖条件下,野生株能以纤维二糖为唯一碳源生长,而ΔcelA_(wp)表现出明显的生长缺陷,生长12 h时D_(600)仍低于0.5。以断奶仔鼠为感染模型,比较野生株和ΔcelA_(wp)株的毒力,每鼠攻毒剂量为3×10^(8) CFU,野生株攻毒组小鼠3日内全部死亡,而ΔcelA株攻毒组的小鼠死亡趋势较缓,14 d后存活率为20%(P<0.05)。[结论]猪源巴氏链球菌WUSP067能以纤维二糖为唯一碳源生长,CL2是纤维二糖利用相关基因簇,其中celA_(wp)基因不仅促进该菌利用纤维二糖,而且还影响该菌的毒力,在巴氏链球菌致病过程中发挥作用。 李鑫椿 王硕玥 吴宗福关键词:纤维二糖 毒力 猪链球菌分子流行病学研究方法 被引量:6 2021年 猪链球菌(Streptococcus suis)是猪重要的细菌性病原,它可以导致猪的脑膜炎、败血症和关节炎等症状,给养猪业带来严重经济损失;同时该菌还可感染人,是一种人畜共患病原菌。应用分子流行病学方法,阐明猪链球菌病的流行病学特征,明确其毒力分型、时空分布、传播途径、传染源,确定传播的遗传决定因素等,将有助于猪链球菌病的防控。目前常用的分子流行病学方法主要有多位点序列分型、脉冲场凝胶电泳、全基因组测序和基于PCR的方法等。本文介绍了上述方法的原理以及在猪链球菌流行病学中的应用,并分析这几种方法的优缺点,从而为更好地揭示猪链球菌流行病学特征、制定猪链球菌病的防控策略提供参考。 杨诗鑫 卞晨 吴宗福关键词:猪链球菌 流行病学 多位点序列分型 脉冲凝胶电泳 全基因组测序 奶牛乳液中伊丽莎白菌按蚊亚种高度同源株的分离与鉴定 被引量:1 2017年 [目的]本文旨在从患乳房炎的奶牛乳液中分离鉴定病原菌。[方法]收集患乳房炎奶牛的乳液病料后分别接种绵羊血液平板和麦康凯鉴别培养基,置于37℃培养箱过夜。观察获得的单菌落形态并接种含有血清的液体培养基富集培养,然后煮沸法提取细菌纯培养物的基因组,以该基因组为模板通过PCR扩增未知细菌的核糖体RNA序列并对产物进行测序分析。以不同培养时间测定菌液D_(600)并绘制细菌的生长曲线。用倍比稀释法在96孔板上测定细菌对不同药物的最小抑菌浓度。[结果]从病料中分离到一株革兰阴性菌,命名为JS20170427COW。该菌无运动性,在绵羊血平板上菌落圆形、光滑、淡黄色、边界清晰。生化试验和16S rRNA序列分析结果显示,其与伊丽莎白按蚊亚种人源株KT768343.1同源性达95%,称之为伊丽莎白按蚊亚种高度同源株。药敏试验显示,该菌对杆菌肽、溶菌素、硫酸黏菌素、乳酸菌素以及多肽类药物等耐药。[结论]从病牛乳液中分离到一株与伊丽莎白菌按蚊亚种同源性高达95%的细菌,其具有公共卫生的潜在意义。 潘子豪 龚倩梅 李科茫 马慧 吴宗福 姚火春关键词:奶牛 乳房炎 浙江某市屠宰场猪链球菌血清型、耐药及致病特征 被引量:11 2022年 【目的】猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要病原菌,同时也是人畜共患病原。猪的扁桃体是猪链球菌主要定殖部位之一,是易感猪和人的重要传染源。因此,对屠宰场健康猪进行猪链球菌流行病学调查,具有重要的公共卫生学意义。【方法】本研究自2020年至2021年,从浙江某市屠宰场采集健康猪扁桃体样品,分离鉴定猪链球菌,采用血清型特异性PCR法分型,通过耐药基因检测、药敏试验、斑马鱼毒力实验分析其耐药及致病特征。【结果】131份健康猪扁桃体样品猪链球菌阳性率为62.59%(82/131),共分离猪链球菌68株,其中16型分离率最高,占比16.18%(11/68),其次为31型(11.76%,8/68)、9型(7.35%,5/68)、3型(7.35%,5/68)等。含2种及以上血清型的扁桃体样品占15.85%(13/82)。药敏试验表明,分离株主要对林可酰胺类(100%,68/68)、大环内酯类(98.53%,67/68)、四环素类(100%,68/68)抗生素耐药,所有菌株均属于多药耐药。值得关注的是,有18株菌对青霉素耐药、3株菌对头孢噻肟耐药、2株菌对利福平耐药、11株菌对利奈唑胺耐药。大环内酯类/林可酰胺类耐药基因、四环素类耐药基因检出率均为82.35%(56/68),这是猪链球菌对这些抗生素耐药的主要原因。按不同批次分离的菌株,选择25株代表株进行斑马鱼毒力实验,结果显示:5株菌对斑马鱼致病力强,攻毒剂量为3×10^(6)CFU/尾时死亡率为80%–100%。【结论】该地区健康猪不仅猪链球菌携带率高,而且存在多药耐药和致病性强的菌株,这为了解该地区猪链球菌病的发病规律和制定相关的防控策略提供参考。 刘召颖 朱夏雨 牛洪颖 万欣 吴宗福关键词:猪链球菌 屠宰场 耐药 致病 猪链球菌抗氧化应激蛋白YED和AHH的鉴定 被引量:2 2020年 为揭示猪链球菌抗氧化应激的机制,采用比较蛋白组学方法,鉴定猪链球菌抗氧化应激相关蛋白。提取猪链球菌全菌蛋白,以THB培养基培养的细菌作为对照,经H2O2处理后,液相色谱-串联质谱共鉴定出54个差异表达蛋白,其中28个蛋白在H2O2处理组中上调表达,26个蛋白下调表达。这些差异表达的蛋白主要参与代谢、生物合成、抗应激等过程。深入分析,发现7个新的蛋白可能参与猪链球菌抗氧化应激;从中选择在H2O2处理组显著上调表达的2个蛋白YbaB/EbfC家族核苷相关蛋白(YED)和2-氨基-4-羟基-6-羟甲基二氢蝶啶二磷酸激酶(AHH)进行验证。分别构建二者缺失株ΔYED和ΔAHH;生长曲线分析表明,2个缺失株在THB培养基中生长与野生株相似;氧化应激试验表明,经H2O2作用后,野生株存活率为97.12%,而ΔYED与ΔAHH则显著降低,分别为72.69%(P<0.05)和79.49%(P<0.05);小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬与存活试验表明,RAW264.7对野生株和2个缺失株的吞噬率无显著差异,但与野生株相比,2个缺失株在RAW264.7内的存活率均显著降低。本研究鉴定的与氧化应激相关的差异表达蛋白,有助于揭示猪链球菌的抗氧化应激机制,其中YED和AHH与猪链球菌在吞噬细胞内存活相关,提示它们在猪链球菌致病过程中发挥作用。 王硕玥 梁子敬 陈琳 吴宗福关键词:猪链球菌 氧化应激 巨噬细胞 碳酸酐酶对猪链球菌生长及抗氧化应激的影响 2021年 [目的]本文旨在研究碳酸酐酶(SCA)对猪链球菌生长及抗氧化应激的影响,并分析其生物学功能。[方法]以猪链球菌2型野生株SC070731为背景,构建sca缺失株Δsca,通过测定不同条件下的生长曲线和H 2O_(2)应激、小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬与存活、猪全血存活等试验,评价SCA对猪链球菌生长及抗氧化应激的影响。[结果]与野生株相比,Δsca株在缺乏CO_(2)条件下的生长受到显著抑制,生长12 h A 600值低于0.5;在5%CO_(2)条件下,虽然Δsca株的迟缓期较野生株长,但平台期其恢复到与野生株相同的水平,A 600值均接近1.6;在缺乏CO_(2)条件下,添加NaHCO_(3)可显著刺激Δsca株生长,且与浓度呈正相关;添加不饱和脂肪酸(UFA)油酸或Tween-80、Tween-20等UFA衍生物均可显著促进Δsca株生长。经H 2O_(2)作用20 min后,野生株存活率为99.48%,而Δsca株存活率为74.04%(P<0.01)。吞噬试验表明,RAW264.7对野生株和Δsca株的吞噬率无显著差异;存活试验表明,经抗生素处理3 h后,野生株的存活率为77.98%,而Δsca株在RAW264.7内的存活率显著降低,仅为38.93%(P<0.01)。猪全血存活试验表明,与野生株的存活率(110.02%)相比,Δsca株在猪全血中的存活率为51.39%(P<0.01)。[结论]SCA促进猪链球菌利用CO_(2)和HCO-3,并参与UFA合成,因而有助于猪链球菌的生长及抗氧化应激;该酶促进猪链球菌在猪全血和小鼠巨噬细胞中存活,提示其在猪链球菌致病过程中发挥重要作用。 陈琳 王硕玥 姚火春 吴宗福关键词:猪链球菌 碳酸酐酶 氧化应激 一种具有多血清型保护性的猪链球菌多表位抗原及其应用 本发明公开了一种具有多血清型保护性的猪链球菌多表位抗原,所述猪链球菌多表位抗原MEAS的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了含有所述猪链球菌多表位抗原的猪链球菌亚单位疫苗。本发明中的多表位抗原可激活小鼠... 马家乐 刘嘉楠 蒲晚霞 吴宗福 姚火春