吴伟刚
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 供职机构：深圳市第三人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- BLCAP基因RNA过编辑对肝癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2016年
- 目的研究BLCAP基因RNA过编辑对肝癌SMMC7721、Focus细胞的生长增殖能力的影响,并探讨其在肝癌发生发展的作用。方法采用半定量PCR的方法分析BLCAP基因在11株肝癌细胞以及2株正常肝脏细胞中的表达情况,选出2株BLCAP基因相对低表达的肝癌细胞株。以基因转染技术,将空质粒(pc DNA3.1,对照组)、BLCAP_WT(野生型)和BLCAP_RDD(过编辑型)质粒(实验组)分别转染肝癌细胞株,通过Western blot法检验转染效率。利用CCK-8生长曲线试验和平板克隆形成实验检测肝癌细胞株的增殖能力。结果半定量PCR结果显示BLCAP基因在肝癌SMMC7721、Focus细胞中的表达量相对较低。Western blot的结果显示,实验组细胞BLCAP基因的蛋白表达水平较对照组细胞明显增高(P<0.05),表明转染较成功。CCK-8生长曲线试验和平板克隆形成实验的结果显示,肝癌SMMC7721和Focus细胞在转染BLCAP_RDD质粒后,其增殖能力较空质粒对照组及BLCAP_WT组细胞明显增强(P<0.05)。结论 BLCAP基因过编辑可促进肝癌SMMC7721和Focus细胞的增殖,提示其在肝癌细胞中的过编辑与肝癌的发生发展密切相关。
- 刘琢冰吴伟刚刘妙娜刘威龙杨桂林陈心春周伯平
- 关键词：BLCAP基因肝癌细胞增殖
- SIRT6在原发性肝癌中的表达变化与抑瘤机制分析被引量：4
- 2016年
- SIRT6是Sirtuin家族的组成部分,是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖的组蛋白去乙酰化酶。SIRT6是肝脏葡萄稳态主调节者,通过对胰岛素/IGF1样信号(IIS)途径的影响,基于多个网络调控机制,实现对葡萄糖代谢的影响,对人体生命维系和控制肿瘤产生作用。本文笔者以SIRT6为出发点,分析其在原发性肝癌中的表达变化与抑瘤机制。
- 刘妙娜刘琢冰郑娟谢星吴伟刚
- 关键词：原发性肝癌抑瘤机制
- 苦参碱立方液晶纳米粒的制备及质量控制的研究被引量：4
- 2015年
- 目的采用改良的高压均质法制备苦参碱立方液晶纳米粒,并建立其质量控制方法。方法以单油酸甘油酯（GMO）为载体材料,洛泊沙姆（F127）为稳定剂,通过高速剪切和超声粉碎制备立方液晶纳米粒。采用高效液相色谱法测定苦参碱的含量。结果苦参碱检测浓度在11.125~178μg/m L范围内,浓度和峰面积线性关系良好。苦参碱立方液晶纳米粒在3个浓度水平下测得的平均回收率分别为102.1%、102.6%、100.5%,RSD分别为1.9%、1.9%、2.1%（n=3）;包封率为68%,RSD为2%;实验方法精密度良好。结论该制备工艺简单易行,质量控制方法简单、准确。
- 田圆吴伟刚王家平李宝红彭新生
- 关键词：高效液相法
- SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株的构建及筛选被引量：1
- 2015年
- 目的:构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株,为研究SLC7A11基因的表达沉默对肝癌发生发展的影响奠定基础。方法:针对SLC7A11基因的不同部位合成3个siRNA的寡核苷酸片段,分别将其克隆到真核表达载体p GPU6/GFP/Neo中。利用脂质体转染法分别将质粒导入肝癌LM3细胞,24小时后观察细胞内GFP表达情况,并通过real-time PCR及Western blot的方法比较各组细胞SLC7A11基因mRNA和蛋白的表达水平,然后用G418对转染细胞进行筛选培养。结果:经酶切分析及测序验证,成功构建了靶向沉默SLC7A11基因的真核表达质粒p GPU6-SLC7A11-siRNA;通过real-time PCR及Western blot的方法验证,成功筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株。结论:成功构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株,为进一步研究SLC7A11基因表达沉默对肝癌细胞发生发展的影响奠定了基础。
- 吴伟刚田圆刘琢冰刘妙娜刘威龙杨桂林陈心春周伯平
- 关键词：肝癌细胞细胞株
- IL-6基因单核苷酸多态性与中国汉族人群乙型肝炎易感性的相关性研究被引量：3
- 2017年
- 目的 白细胞介素-6（IL-6）在慢性病毒性肝炎发病机制和相关的肝脏疾病中有重要的作用,本文拟通过大样本病例-对照研究以及临床数据分析探讨IL-6单核苷酸多态性与HBV感染易感性的相关性,从而达到能够通过检测机体IL-6基因的表达的水平来预防和治疗HBV感染的目的.方法 选取深圳地区汉族HBV病患者共计848例,对照组894例,抽提基因组DNA,运用TaqMan探针的技术对上述标本的rs1 800 796位点进行基因分型.结果 rs1 800 796位点的单核苷酸多态性与HBV感染的易感性相关P=0.0003,OR=1.43,两者之间的差异具有统计学意义.结论 IL-6rs1800 796位点的单核苷酸多态性与汉族人群HBV感染的易感性相关.
- 朱秀云汪文斐吴伟刚李红春刘威龙张明霞刘磊
- 关键词：单核苷酸多态性白细胞介素6肝炎病毒乙型
- 氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:研究氨基葡萄糖对人肝癌Hep G2细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:CCK-8法检测人肝癌Hep G2细胞的增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。Western blot检测ERK及P-ERK蛋白的表达水平。结果:氨基葡萄糖可以抑制人肝癌Hep G2细胞的增殖,且该作用随着药物浓度的增加而逐渐增强。1.0mmol/L氨基葡萄糖作用72h可以使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。同时,2.0mmol/L及4.0mmol/L氨基葡萄糖处理72h可以使人肝癌Hep G2细胞发生凋亡。另外,随着药物浓度的增加,人肝癌Hep G2细胞中ERK蛋白的磷酸化水平逐渐降低。结论:氨基葡萄糖可能是通过降低ERK1/2蛋白的磷酸化水平影响细胞周期,从而抑制人肝癌Hep G2细胞的增殖并诱导其发生凋亡。
- 吴伟刚刘威龙诸葛福艳田圆刘琢冰陈心春周伯平
- 关键词：氨基葡萄糖肝癌细胞HEPG2增殖凋亡
- CENPK基因过表达载体的构建及鉴定被引量：2
- 2015年
- [目的]构建着丝粒蛋白K(cetromere protein K,CENPK)基因过表达载体,并对其在肝癌FOCUS细胞中的表达进行鉴定。[方法]1从人肝癌组织中扩增出CENPK目的基因并将其克隆到p CMV-3Tag-3载体上,构建真核表达载体p CMV-CENPK;2利用脂质体法将构建好的p CMV-CENPK真核表达载体转染肝癌FOCUS细胞,并用G418筛选出CENPK基因稳定过表达的肝癌FOCUS细胞株;3通过Real-time PCR及Western Blot的方法对筛选出来的细胞进行鉴定。[结果]1经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体p CMV-CENPK。2通过Real-time PCR及Western blot的方法鉴定,CENPK基因在筛选出来的肝癌FOCUS细胞株中成功过表达。[结论]成功构建真核表达载体p CMV-CENPK并使其在肝癌FOCUS细胞中稳定过表达,为进一步研究CENPK基因在肝癌发生发展中的作用奠定了基础。
- 吴伟刚刘妙娜刘利平刘琢冰刘威龙陈心春周伯平
- 关键词：过表达真核表达载体
