向飞宇
- 作品数：21 被引量：73H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：基础研究重大项目前期研究专项广东省自然科学基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 镰形扇头蜱金属蛋白酶基因全长的克隆和序列分析被引量：1
- 2007年
- 本研究从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的EST序列中筛选了一个含polyA尾的基因序列,经5′-RACE方法得到该基因全长序列。cDNA全长1 566 bp,编码区为23 bp～1 456 bp,编码478个氨基酸残基,该蛋白的预测分子量约为55 Ku,等电点为8.87。RT-PCR分析表明,该基因在镰形扇头蜱未吸血成蜱、半饱血成蜱以及唾液腺、肠中表达。
- 柴国祚周金林沈杰周勇志向飞宇龚海燕马腾
- 关键词：镰形扇头蜱金属蛋白酶CDNART-PCR
- 镰形扇头蜱组胺结合蛋白全长基因的克隆与分析被引量：1
- 2008年
- 从本实验室构建的镰形扇头蜱(Rhipicephalus haemaphysaloides)抑制消减杂交cDNA文库中选择了1条可能编码组胺结合蛋白(HBP)的EST序列(RhHBP),以5′末端快速扩增的方法(5′RACE)扩增获得5′末端序列,拼接获得全长基因。DNAMAN(v4.0)、DNAstar(v4.0)和Genetyx(v4.0)软件分析阅读框、编码产物、序列同源性和系统进化,同时也分析了该基因在吸血前后雌雄蜱体内的表达情况。5′RACE法获得1条约400 bp的DNA片段,克隆测序,拼接获得1条长803 bp的全长基因,编码219个氨基酸残基。该基因在吸血雌蜱唾液腺内特异表达,初步分析该基因是组胺结合蛋白基因。
- 向飞宇周勇志龚海燕周金林
- 关键词：镰形扇头蜱
- 广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查被引量：22
- 2004年
- 对广东省 10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查 ,并按大致 10 %的采样率采集了 10 87头乳牛的新鲜粪便 ,以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊 ,其中检出卵囊的阳性牛 92头 ,阳性率为 8.4 6 % ;有 7个场检出隐孢子虫卵囊 ,场阳性率为 70 %。这 7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是 10 .0 0 %、7.19%、6 .6 7%、9.80 %、6 .72 %、12 .76 %和 6 .72 %。调查发现 ,乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系 ,而且可能与气候有关 ;所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫 (Cryptosporidiummuris)。
- 向飞宇李国清肖淑敏陈红玲谢德华
- 关键词：乳牛隐孢子虫病流行病学改良抗酸染色法卵囊阳性率
- 镰形扇头蜱RhcA和RhcB基因的克隆、表达和抗蜱免疫保护作用
- 本发明属于生物基因技术领域。镰形扇头蜱RhcA和RhcB基因的序列、镰形扇头蜱RhcA和RhcB基因的克隆、以及在大肠杆菌中的表达和兔体抗蜱免疫保护作用。本发明克隆到镰形扇头蜱而个半胱氨酸蛋白酶新基因，为应用半胱氨酸蛋白...
- 周金林陈灵芝周勇志龚海燕向飞宇
- 文献传递
- 镰形扇头蜱—新基因的分离、克隆、表达和抗蜱免疫保护作用被引量：6
- 2005年
- 目的分离、克隆镰形扇头蜱一新基因。方法本实验从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的100个EST(ExpressedSequenceTag)序列中选取一个带有polyA尾的序列,经5’RACE(RapidAmplificationofcDNA Ends)得到此序列的全长基因,命名为RhHp2,基因全长1002bp,开放阅读框(ORF)从31bp至879bp,共848bp,编码282个氨基酸。经序列比较,RhHp2基因与其它序列在核苷酸水平上基本无同源性,但在氨基酸水平上与其它物种同源性最高可达50.81%。RhHp2基因连接于PET32a(+)载体后克隆于表达菌BL21,1mMIPTG诱导表达,产生分子量约为55kD的融合重组蛋白,并以不溶性包涵体形式存在。经纯化和体外复性的重组蛋白三次免疫新西兰兔后,将镰形扇头蜱未吸血成蜱和若蜱接种于此免疫兔耳,并对接种48h后的蜱上体数、蜱的饱血数量、饱血时间、饱血重量等进行记录。结果发现蜱的吸血行为受到一定影响,若蜱在48h的减虫率(上体数减少)为58%,在整个吸血过程中的死亡数增加,成蜱的饱血体重显著降低。结论此结果表明RhHp2基因的重组表达产物具有一定的免疫保护作用。
- 龚海燕周金林周勇志向飞宇丘玉涛
- 关键词：镰形扇头蜱
- 我国出口观赏鸟的球虫和线虫的调查与分析被引量：9
- 2004年
- 陈永红李国清陈红玲向飞宇肖淑敏周荣琼郭远忠林志雄
- 关键词：观赏鸟球虫线虫寄生虫易感性
- 亚洲璃眼蜱差异表达新基因P18的克隆和鉴定被引量：2
- 2006年
- 为了进行抗蜱和蜱传病疫苗的研究,本实验对亚洲璃眼蜱雌蜱吸血前后唾液腺消减文库中获取的一个全长编码基因P18进行了研究。该基因全长519bp,共编码170个氨基酸,分子量为18.36Ku,等电点为4.28。BLAST分析表明,该基因预测的氨基酸与肩突硬蜱、篦子硬蜱唾液腺的抗凝血小肽有30%～40%低度同源性。将该基因亚克隆到pET-32a(+)表达载体,转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导,重组融合蛋白以可溶性形式高效表达。将可溶性重组蛋白免疫小鼠后获得的抗血清。经免疫印迹分析表明,该重组蛋白抗体可特异性的识别半饱雌蜱唾液腺中的天然蛋白抗原,而未吸血雌蜱唾液腺中则不显现特异条带。RT-PCR结果进一步证实,该基因在蜱吸血后的唾液腺中差异表达。
- 王玉霞周金林周勇志龚海燕向飞宇程天印刘毅
- 关键词：唾液腺基因
- 镰形扇头蜱的人工饲养、生活史及不同湿度对蜱生长发育的影响
- 为了给蜱及蜱传疾病的分子生物学研究提供充足、有效的试验材料,对镰形扇头蜱(Rhipicevhalus haemavhysaloides haemaphysaloides)进行了实验室人工饲养,在25℃±1℃,92%RH、...
- 周勇志周金林沈杰龚海燕向飞宇
- 文献传递
- 镰形扇头蜱唾液腺抑制消减杂交文库的构建和分析被引量：12
- 2006年
- 【目的】寻找镰形扇头蜱吸血后较吸血前唾液腺差异表达基因。【方法】以抑制消减杂交法分别构建镰形扇头蜱半饱血雌蜱和吸血雄蜱唾液腺以pGEM-T-easy为载体的cDNA文库,并测序进行生物信息学分析。【结果】分别测得247个雌蜱有效EST序列和168个雄蜱有效EST序列,并预测雌蜱可能含有5′末端和3′末端的EST序列分别为25个和44个,雄蜱可能含有5′末端和3′末端EST序列分别为53个和74个。随机选择非重复的24个雌蜱序列和21个雄蜱序列以RT-PCR方法验证消减效果;在吸血后唾液腺中,雌蜱有13个基因表达上调或新表达,消减效率为54%,雄蜱有9个基因表达上调或新表达,消减效率为43%。对所测有效序列经BLAST分析,检索247个雌蜱序列获得141个匹配,匹配率为57%,其中有32个蜱基因,占141个匹配基因的23%;检索168个雄蜱序列获得125个匹配,匹配率为74%,其中有29个蜱基因,占125个匹配基因的23%。BLAST检索结果显示这些蛋白主要包括帮助蜱口器固定免疫调节蛋白、抗凝血蛋白、加强能量代谢的线粒体蛋白和促进基因转录的各种转录因子。【结论】这些蛋白主要是为了适应蜱吸血的生理过程及应变蜱因吸血而产生的免疫防御和排斥。
- 向飞宇周金林周勇志龚海燕沈杰
- 关键词：镰形扇头蜱唾液腺抑制消减杂交CDNA文库表达序列标签
- 镰形扇头蜱IgG结合蛋白基因的克隆与表达分析被引量：2
- 2007年
- 本实验以镰形扇头蜱吸血前后雄蜱唾液腺的抑制消减杂交cDNA文库中的EST数据为基础,应用RACE方法从镰形扇头蜱体内克隆出一个IgG(IgG binding protein,IGBP)基因的全长序列,该基因全长683bp,编码178个氨基酸,预测分子量为19.5kDa,经同源性比较该基因与具尾扇头蜱的IGBP-MB基因序列的同源性高达92%。用RT-PCR方法分析了该基因表达的性别特异性、各个器官、不同发育阶段的表达情况,结果表明,该基因表达没有性别特异性;IGBP基因在唾液腺、壳这2个器官有所表达,但在肠中却没有表达;在蜱的各个发育阶段均有表达。
- 万修红周勇志向飞宇张文杰周金林
- 关键词：镰形扇头蜱RACERT-PCR克隆
