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卢建申: 作品数：18 被引量：51H指数：5; 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生化学工程农业科学更多>>

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用三步法纯化重组人促红细胞生成素被引量：8: 1997年; 用生物反应器培养中国仓鼠卵巢细胞促红细胞生成素（ＣＨＯＥＰＯ）Ｃ２细胞株，培养上清液中重组人促红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）表达水平达２×１０６～３×１０６Ｕ／Ｌ。培养上清液经过三步纯化：第一步为反相色谱，可将样品体积浓缩约９６．７％，其收集液经充分透析后进行第二步的ＤＥＡＥ离子交换色谱，最后进行分子筛色谱，总回收率为３０％以上。经纯化的ｒＨｕＥＰＯ比活性为１．５×１０８Ｕ／ｇ蛋白，ＳＤＳＰＡＧＥ为一条带，扫描测试纯度达９８％以上。; 李琳邓继先卢建申周江; 关键词：促红细胞生成素纯化色谱法

用构建的新型BmNPV载体在家蚕高效表达人β-干扰素: 1994年; 家蚕核多角体病毒(Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus.BmNPV)和家蚕细胞已成功地用来大量生产具有生物活性的重组蛋白。但是BmNPV的通用载体的类型较少。因此,本实验构建了BmNPV新型载体pBm92,该载体将多角体蛋白基因的起始密码ATG改变为ATT,然后在多角体蛋白基因的+12位外连接有5个外源基因的克隆位点。将HuIFN-β基因克隆在多角体蛋白基因的+12位后,构建了pBmIFN+12;同时构建HuIFN-β克隆在-3位后的转移栽体pBmIFN-3。将两种转移载体DNA分别与BmNPV基因组DNA共转染Bm-N细胞。利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征,筛选重组病毒。用HuIFN-β基因探针与重组病毒DNA进行杂交鉴定。重组病毒BmIFN+12感染Bm-N细胞,其上清IFN活性最高时可达2.0×10~6IU/ml,将BmIFN+12注射5龄家蚕虫体,表达水平为50×10~7IU/ml,是HuIFN-β基因克隆在多角体蛋白基因的-3位后获得的重组病毒的表达量的2～4倍。家蚕体生产的rHulFN-β为糖基化蛋白具有天然HuIFN-β的抗原性。; 邓继先王少飞杨琴卢建申程萱李琳周耐明肖成祖; 关键词：BMNPV

一种ω－3脂肪酸去饱和酶及其编码基因与应用: 本发明公开了一种ω-3脂肪酸去饱和酶及其编码基因与应用。ω-3脂肪酸去饱和酶的氨基酸残基如序列表中的序列2所示。本发明的ω-3脂肪酸去饱和酶基因，具备转录成mRNA和翻译成去饱和脂肪酸酶功能，并且能在转染细胞和动物体内合...; 邓继先朱贵明陈红星周艳荣卢建申吴晓洁; 文献传递

用三步法纯化重组人促红细胞生成素: 1997年; 在生物反应器中培养中国仓鼠卵巢细胞—促红细胞生成素(CHO-EPO)C2细胞株,培养上清液中重组人促红细胞生成素(rHuEPO)表达水平达2000～3000U/ml。培养上清经过三步纯化:第一步为反相柱色谱,可将样品浓缩约96.7％,其收集液经充分透析后进行第二步的DEAE-离子交换色谱,最后进行分子筛色谱,总回收率为30％以上,经纯化的rHuEPO比活性为1.5×10~8U/g蛋白,SDSPAGE一条带,扫描测试纯度达98％以上。; 李琳邓继先卢建申周江; 关键词：促红细胞生成素色谱纯化

无血清培养基生产重组人红细胞生成素的纯化: 1997年; 用无血清培养基在生物反应器中培养CHO EPOC2细胞株 ,培养上清中重组人红细胞生成素表达水平达 1 0～ 2 1mg/L .培养上清经过三步纯化后纯度可达到 98%以上 ,比活性约为 1 5×1 0 5U/mg.纯化第一步使用反相柱层析 ,可将样品体积浓缩约 30倍 .取其收集液进行DEAE 离子交换柱层析 ,最后进行分子筛层析 ,全过程回收率为 4 0 %左右 .SDS PAGE表明 ,所制备终产品分子质量为 35～ 4 0ku ,等电聚焦方法测其等电点在 3 75～ 4 1 5之间 ,均属文献报道范围 ;ELISA和蛋白质印迹实验结果证明其具有天然红细胞生成素抗原性 ;采用溴化氰裂解方法做肽谱电泳 ,结果与理论推测相符 .该纯化路线简单、迅速、高效 ,重复性好。; 李琳邓继先卢建申周江; 关键词：人红细胞生成素纯化

猪血清白蛋白基因的克隆及其5′端调控序列功能分析被引量：5: 2005年; 目的:克隆猪血清白蛋白全基因并对其5′端调控序列的转录功能进行分析。方法:以GenBank公布的猪血清白蛋白基因启动子序列和cDNA序列为依据,设计并合成D123/D61和D81/D84两对引物,同时从猪肝中提取猪基因组DNA,并以此为模板PCR扩增猪血清白蛋白部分基因片段作为噬菌斑原位杂交探针,对猪λ噬菌体文库进行筛选。经过4轮杂交和PCR交替筛选,从噬菌体文库中共获得4个基因片段,并对这4个片段进行测序、拼接。以绿色荧光蛋白作为报告基因,对猪血清白蛋白启动子在HepG2细胞中的表达进行研究。结果:共获得包括调控区在内的猪血清白蛋白全基因序列约35kb(GenBank登录号:AY663543)。将其与人的血清白蛋白基因相比对,发现基因的同源性为53.8%,其中编码区同源性为82.3%。荧光显微镜下可见EGFP在HepG2细胞中的表达。结论:获得猪血清白蛋白全基因。猪血清白蛋白基因启动子在HepG2有转录起始功能。此项工作一方面为利用基因打靶从猪体内制备生产人血清白蛋白的研究奠定了良好基础,另一方面为利用白蛋白启动子研究外源基因在肝组织的特异性表达及进行基因治疗提供了资料。; 孙世惠周艳荣卢建申邓继先; 关键词：血清白蛋白基因文库聚合酶链反应绿色荧光蛋白

应用PCR-酶切连接法合成全长sFat1基因被引量：9: 2006年; 人工合成基因在生命科学研究中有着重要的意义,因此基因合成是一项常用技术。长片段基因的合成比较困难,常常因为合成中碱基序列的错配、突变等原因而导致失败。研究者们所熟知的几种现行的方法仍然难以解决该问题。本研究在作者自身的工作经验中建立了一种新的基因合成方法,即PCR-酶切连接法。应用该方法成功地将化学合成的27个寡聚核苷酸片段(每个片段长60～68bp)拼接组装起来,获得了完整的总长为1226bp的基因sFat-1。整个过程仅采用3轮PCR(共7个反应)、2轮的酶切连接(3个反应),而且未曾出现任何偏离预期基因序列的差错。该方法步骤较少,技术简单,出错极少,是合成长基因序列很好的选择。; 朱贵明陈宏卢建申周艳荣吴晓洁陈红星邓继先; 关键词：基因合成聚合酶链式反应

利用精子载体方法生产mt-PA转基因山羊: 精子介导基因转移方法具有操作简单和适用范围广泛等优点,但该方法在不同动物以及不同研究者中的实验结果差异很大,甚至截然相反.本实验以标记的DNA片段为示踪材料,就精子与外源DNA相互作用的基本特征及影响因素进行了研究.结果...; 叶华虎刘珠果卢建申林福玉周艳荣邓继先; 关键词：精子载体法转基因山羊基因标记外源DNA; 文献传递

人尿激酶原突变体的构建及其特性的研究被引量：6: 2005年; 由于人尿激酶原(pro_UK)存在凝血酶和纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI_1)的作用位点,在生产和治疗过程中容易失去活性。采用PCR介导的定点突变技术对pro_UK基因进行了突变,构建了3种人pro_UK突变体,分别将蛋白序列中的凝血酶作用位点Arg156突变成His156,构建成pro_UKM1;将PAI_1的作用位点Arg178、Arg179、Arg181突变为Lys178、Lys179、His181构建成pro_UKM2;同时将凝血酶和PAI_1的作用位点突变构建成pro_UKM3。分别在CHO细胞中获得稳定表达。并对3种突变体进行了SDS_PAGE纤维蛋白自显影和Westernblot分析,证明3种细胞表达的pro_UKM与天然尿激酶原带型一致,绝大多数为单链。体外溶栓试验表明,pro_UKM1对凝血酶有抵抗性,pro_UKM2对PAI有抵抗性,pro_Ukm3能有效抵抗凝血酶和PAI的活性抑制特别是pro_UKM3具有开发成新型溶血栓药物的潜力。; 于永生周艳荣卢建申吴晓洁李青旺邓继先; 关键词：凝血酶纤溶酶原激活剂抑制剂

染色质免疫沉淀法筛选转录因子Nanog调控的目的基因: 2009年; 目的:利用染色质免疫沉淀法筛选转录因子Nanog调控的目的基因。方法:用甲醛固定胚胎干细胞,利用超声将其染色质随机断裂成0.5～1.0kb的染色质片段,通过免疫沉淀富集与Nanog结合的DNA片段,回复交联后分离纯化DNA片段,最终用凝胶迁移阻滞实验验证Nanog与DNA片段的结合。结果:我们发现fzr为Nanog调控的目的基因,并通过电泳迁移率变动分析证明了二者的结合。结论:Fzr在细胞周期调控中发挥重要作用,这为阐明Nanog的作用机理奠定基础。; 林艳丽周艳荣阎新龙熊福银田利源吴晓洁卢建申邓继先陈红星; 关键词：NANOG 染色质免疫沉淀

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