单幼兰
- 作品数：26 被引量：174H指数：6
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBV cccDNA荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
- 乙肝病毒感染影响了全球约三亿五千万人口,而且绝大多数为慢性感染,其中约5/%最终发展成肝硬化或肝癌,导致每年约有一百万人死于 HBV 感染引起的各种终末期肝病。而我国 HBV 感染人群的比例则更高,据不完全统计在 10/...
- 单幼兰
- 关键词：乙型肝炎病毒荧光定量PCR
- 文献传递
- 肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒的构建及评价
- 2008年
- 目的:构建一个可高效报告基因表达的绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)报告质粒,为采用差异荧光诱导(Differential fluorescence induction,DFI)技术筛选肺炎链球菌(Streptoccus pneumoniae,S.pn)体内诱导的毒力基因奠定基础。方法:酶切质粒pGreenTIR的SD-ENH-GFP片段,将其插入含氯霉素抗性基因的自杀质粒pEVP3中,构建以绿色荧光蛋白为报告基因的自杀质粒pEVP3-SDGFP。再将肺炎链球菌的溶血素基因(Pneumolysin,ply)上游约500bp片段插入到该质粒报告基因上游的多克隆位点中,得到质粒pEVP3-SDGFP-Ply,将其转化入肺炎链球菌TIGR4中,比较新建质粒pEVP3-SDGFP与同样处理质粒pEGFP-1(报告基因gfp前无SD及ENH序列)报告上游基因表达的情况。结果:通过体内、外实验证实新建质粒pEVP3-SDGFP不但可以报告肺炎链球菌溶血素基因的表达,并且其报告上游基因表达的能力明显强于质粒pEGFP-1。结论:所构建的质粒pEVP3-SDGFP可用于DFI筛选肺炎链球菌体内诱导基因所需启动子诱捕文库的构建。
- 胥文春单幼兰许颂宵王虹陈淑惠尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒
- HBV DNA荧光定量PCR检测的临床意义被引量：8
- 2001年
- 单幼兰罗娅黄爱龙
- 关键词：荧光定量PCR
- 两种国产荧光定量PCR试剂与Roche定量试剂的比较被引量：2
- 2023年
- 目的探讨两种国产荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)试剂以及Roche定量试剂检测乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)结果之间的相关性,分析各方法之间的差异性,比较两种国产试剂的临床应用性能,选择更适合该实验室的试剂。方法收集用Roche定量试剂检测过的71例乙型肝炎患者血清,分别采用A、B两种试剂进行平行检测,然后对各检测结果进行比较,分析3种试剂之间的相关性和差异性;并对A、B试剂的最低检测限、最低定量限、线性范围、重复性精密度、正确度等性能指标进行验证。结果A、B试剂的检出率均高于Roche试剂,B试剂的检出率最高,且两种国产试剂定量结果与Roche试剂比较,差异无统计学意义(P>0.05)。A试剂与Roche试剂的符合率高于B试剂;A、B试剂的定量结果与Roche试剂均有良好的相关性,相关系数分别为0.896、0.908,差异均有统计学意义(P<0.05);A试剂的最低检测限为20 IU/mL,最低定量限为100 IU/mL,线性方程为Y=-0.996 X+8.925(R^(2)=0.999),在1.0×10^(2)~1.0×10^(8) IU/mL范围内线性良好,高浓度值变异系数为2.99%,低浓度值变异系数为4.70%,与Roche试剂的偏倚绝对值为6.69%;B试剂的最低检测限为20 IU/mL,最低定量限为20 IU/mL,线性方程为Y=-0.985 X+8.575(R^(2)=0.999),在2.0×101~1.0×10^(8) IU/mL范围内线性良好,高浓度值变异系数为0.73%,低浓度值变异系数为3.64%,与Roche试剂的偏倚绝对值为6.08%。结论B试剂核酸提取率较高,灵敏度和准确度也较高,重复性更好,且具有更宽的线性范围,但是自动化程度相对较低;总体来说,近年来一些国产HBV-DNA定量试剂性能逐渐优化,可以满足乙型肝炎患者的抗病毒和治疗监测的基本要求,其定量结果与Roche定量试剂有良好的相关性。通过比较,B试剂更适合该实验室。
- 杨鑫城单幼兰
- 关键词：荧光定量聚合酶链反应乙型肝炎病毒核酸
- 谷胱甘肽的快速荧光检测法被引量：6
- 2001年
- 目的建立一种灵敏、特异、稳定、快速的谷胱甘肽（ＧＳＨ）检测方法。方法用二硫苏糖醇还原，邻苯二醛柱前衍生，用长（１５０ｍｍ ）或短（３０ ｍｍ）反相Ｃ１８柱色谱分离，再用荧光检测器测定血浆ＧＳＨ。结果用 Ｃ１８反相长柱和Ｃ１８反相短柱进行ＧＳＨ色谱分析结果基本一致，两组标准曲线的相关系数为 ０．９９８４。用短柱分析的时间为长柱的 １／７，灵敏度为＜ ２μｇ／Ｌ，在 ２～２００ｍｇ／Ｌ范围内，日内变异系数和日间变异系数均小于 １０％。正常人血浆ＧＳＨ水平为 １１．１６±４．２２ ｍｇ／Ｌ。结论用 Ｃ１８反相短柱进行ＧＳＨ色谱分析，用荧光分光光度计定量是一种灵敏、特异、快速并易于临床开展的检测方法，可用于血浆或器官组织ＧＳＨ水平的研究。
- 陈国民孙航单幼兰阳文琳
- 关键词：高效液相色谱法荧光分光光度法血浆器官组织
- 关于HCMV潜伏感染与激活感染研究的新进展被引量：5
- 2011年
- 人巨细胞病毒(HCMV)是疱疹病毒科中最大的病毒,结构复杂,其感染在人群中非常普遍,近年来免疫妥协(immunocompromised)群体尤其是移植群体中的HCMV潜伏感染和激活感染越来越受到临床重视。本文就HCMV的感染与免疫、HCMV的致病机制、宿主的抗感染与免疫、HCMV的免疫逃逸、HCMV的潜伏与激活及HCMV相关研究的困境与展望近年来此方面研究新进展作一简要综述。
- 单幼兰张笋华陈伟华江培学陈家梁
- 关键词：人巨细胞病毒免疫逃逸
- 重庆地区8024例地中海贫血筛查结果及地贫基因型分析被引量：67
- 2014年
- 目的：了解重庆地区人群中α、β地中海贫血基因型的分布情况。方法：送检对象来自重庆各区、县共计8 024例样本,采用单管多重聚合酶链反应法（gap single polymeras chain reaction,GSPCR）结合反向斑点膜条杂交技术（reverse dot blot hybridization,RDB法）同时进行α、β地中海贫血基因检测。各组标本送检之前已在各个医院进行外周血的红细胞数（red blood cell,RBC）、血红蛋白（hemoglobin,Hb）、红细胞平均体积（mean corpuscular volume,MCV）、红细胞平均血红蛋白（mean corpuscular hemoglobin,MCH）、红细胞平均血红蛋白浓度（mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC）细胞、血红蛋白电泳指数测定进行地中海贫血的初筛。8 024例样本男1 267例,女6 757例,0~91岁,按年龄分为儿童组（0~16岁）317例,青壮年组（17~49岁）7 552例,老龄组（50~91岁）155例。结果：8 024例样本共检出α、β地贫111 7例,比例为13.92%。α地贫479例,其中常见缺失型α地贫基因型为--SEA/αα（332例）,-α3.7/αα（84例）,-α4.2/αα（15例）,基因型以--SEA/αα最为常见,构成比分别为69.31%、17.54%、3.13%,共89.98%;以右缺失为主,--SEA/-α3.7 5例,--SEA/-α4.2 1例。非缺失型42例,占8.76%;确定为β地贫共619例,α复合β地贫19例。β地贫基因型本次研究中共计发现12种基因型,其中最常见的突变构成类型分别为CD17（A→T）、CD41-42（-TCTT）、IVS-2-654（C→T）、CD43、TATAboxnt-28（A→T）、βE共占96.12%,其中以CDl7（A→T）位点突变所占比例最高,CAP点突变和IVS1-1点突变各1例;8 024例样本中男性1 267例,其中地贫167例（13.18%）,女性6 757例其中地贫950例（14.06%）,男性和女性地贫检测阳性率差异无统计学意义（χ2=0.691,P=0.433）;男性α地贫77例,女性402例;男性β地贫74例,女性545例,男性检测为α地贫或β地贫与女性的2种地贫检测率之间的差异,无统计学意义（χ2=0.381,P=0.604）;儿�
- 杜伟欧阳小峰甘承文郭海波李嘉艳周瑾陈玲单雪峰曹玲单幼兰
- 关键词：地中海贫血Α地中海贫血Β地中海贫血
- GSTZ1重组腺病毒的构建及影响肝癌细胞迁移能力的研究
- 2017年
- 目的:构建人谷胱甘肽-S-转移酶Z1(glutathione S-transferase zeta 1,GSTZ1)重组腺病毒,并初步研究GSTZ1调控粘附连接信号通路(adhesion junction pathway)靶基因SMAD3、IGF1R等影响肝癌细胞的迁移能力。方法:PCR扩增GSTZ1 cDNA序列并克隆到腺病毒载体pAd Track-TO4,构建重组腺病毒质粒p Ad Track-GSTZ1,将重组质粒用Lipofectamine 2000转染至HEK293细胞中,包装、扩增成高滴度重组腺病毒AdGSTZ1。首先,将SMMC-7721细胞设为3组:Mock组、AdGFP组和AdGSTZ1组,Mock组为空白对照组,AdGFP组为感染腺病毒AdGFP的对照组,AdGSTZ1组为感染腺病毒AdGSTZ1的实验组。然后,通过Transwell实验和MTS实验观察其对肝癌细胞迁移增殖能力的影响,进一步经qRT-PCR及Western blot技术研究GSTZ1通过调控粘附连接信号通路关键分子影响肝癌细胞的迁移。结果:成功构建了高滴度重组腺病毒AdGSTZ1,经Western blot鉴定GSTZ1在SMMC-7721细胞中的表达。Transwell实验结果表明,AdGSTZ1组与Mock组及AdGFP组相比,能够明显抑制人肝癌细胞的迁移能力;与Mock组相比,抑制率为(68.10±1.63)%(P=0.000),与AdGFP组相比,抑制率为(50.70±0.99)%(P=0.000)。MTS实验结果表明,AdGSTZ1组在72 h和96 h的吸光度值分别为(1.13±0.08)和(1.28±0.07),AdGFP组72 h和96 h的吸光度值分别为(1.28±0.03)和(1.45±0.03),AdGSTZ1组在96 h的吸光度值与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。另外q RT-PCR及Western blot结果显示,与Mock组和AdGFP组相比,AdGSTZ1感染细胞内粘附连接信号通路中靶基因SMAD3、IGF1R等的表达明显降低。q RT-PCR结果显示,AdGSTZ1组与AdGFP组相比,TGFBR1相对表达量为(0.58±0.13)(t=4.609,P=0.010),SMAD3相对表达量为(0.51±0.08)(t=8.030,P=0.000),ERBB2相对表达量为(0.46±0.09)(t=9.384,P=0.000),IGF1R相对表达量为(0.45±0.02)(t=14.480,P=0.000),FARP2相对表达量为(0.37±0.13)(t=7.082,P=0.028)。Western blot表明,SMAD3组中,AdGFP组的蛋白相对表达量为(0.96±0.18),AdGS
- 杨翼李晶晶梁利高庆祝郑亚秋潘娥汪凯唐霓单幼兰
- 关键词：SMMC-7721细胞肝癌细胞迁移
- 乙型肝炎病毒基因型B和C同时定量和分型的实时定量PCR检测
- 赵耀张秀瑜郭进军曾爱中胡接力黄文祥单幼兰黄爱龙
- 重庆市某研究所体检人群中维生素D水平的调查研究被引量：14
- 2013年
- 目的了解重庆地区健康人群维生素D(VitD)营养状况。方法用串联质谱分析仪检测送检人员血清25-羟维生素D[25(OH)VitD]水平,据此确定VitD营养状况。随机抽取重庆金域医学检验所从2012年1-8月的体检健康人员共3 875例,3～71岁。按年龄分为≤14岁儿童组(657例)、15～44岁青壮年组(3 019例)和≥45岁中老年组(199例)3组,采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析。结果年龄≤14岁组的25(OH)VitD水平严重缺乏、缺乏、不足、正常、过量所占的比例分别为1.52%、19.03%、9.44%、70.02%和0%;15～44岁组水平缺乏、不足、正常、过量的比例分别为60.09%、27.59%、12.32%和0%;≥45岁组水平缺乏、不足、正常、过量的比例分别为84.92%、13.07%、2.01%和0%。15～44岁组和≥45岁组女性25(OH)VitD平均水平均较男性低,缺乏的女性人数较男性所占比例高,差异均有统计学意义(P<0.01),而≤14岁组男女间差异无统计学意义;≥45岁组与15～44岁组相比,25(OH)VitD平均水平随着年龄增加而降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论重庆地区人群VitD不同程度缺乏,女性缺乏所占比例较男性高,儿童有严重缺乏。
- 杜伟甘承文郭海波许路程佳单幼兰
- 关键词：VITD缺乏营养调查
