刘万波
- 作品数：10 被引量：6H指数：2
- 供职机构：兰州大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 一种结核杆菌融合蛋白及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种结核杆菌融合蛋白，是序列表中序列2的蛋白质，并提供了其制备方法和制备疫苗的应用。本发明所提供的构建并表达纯化去标签融合蛋白ESAT6-Ag85B-Mpt64<Sub>190-198</Sub>-Mtb8....
- 祝秉东辛奇胡丽娜王秉翔达泽蛟牛红霞刘万波唐克峰高娃景涛
- 结核分枝杆菌Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4重组基因克隆及表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建结核分枝杆菌去标签重组蛋白Mtb8.4-Hspx(MH)和Hspx-Mtb8.4(HM)原核表达载体,并在大肠埃希菌株BL21(DE3)中表达。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增Mtb8.4、Hspx基因,产物经纯化后与载体PET30a连接、转化及测序鉴定,构建原核重组表达质粒PET30a-Mtb8.4和PET30a-Hspx。抽提重组质粒,产物经纯化后与目的基因Hspx、Mtb8.4连接,转化及测序鉴定,构建重组目的基因质粒PET30a-Mtb8.4-Hspx(PET30a-MH)和PET30a-Hspx-Mtb8.4(PET30a-HM)载体,转化大肠埃希菌BL21,以IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测表达产物。结果 SDS-PAGE蛋白电泳验证去标签MH和HM融合蛋白分子质量单位为28 ku,与预期值相符。结论本研究成功表达去标签结核杆菌重组蛋白MH和HM,为结核亚单位疫苗免疫原性和临床前研究奠定了基础。
- 吴玉敏谭继英王革刘万波胡丽娜祝秉东
- 关键词：MTB8.4HSPX克隆
- 一种结核杆菌融合蛋白及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种结核杆菌融合蛋白，是序列表中序列2的蛋白质，并提供了其制备方法和制备疫苗的应用。本发明所提供的构建并表达纯化去标签融合蛋白ESAT6-Ag85B-Mpt64<Sub>190-198</Sub>-Mtb8....
- 祝秉东辛奇胡丽娜王秉翔达泽蛟牛红霞刘万波唐克峰高娃景涛
- 文献传递
- 一种结核杆菌融合蛋白HspX-Mtb8.4及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种结核杆菌融合蛋白HspX-Mtb8.4，是序列表中序列2的蛋白质。本发明的有益效果是：发明选用的结核分枝杆菌Mtb8.4是从结核杆菌培养滤液中纯化分离的一种低分子治疗蛋白抗原，具有较强的细胞免疫活性，能诱...
- 祝秉东刘万波谭继英胡丽娜王秉翔吴玉敏辛奇朱丽林孝发
- 文献传递
- 一种结核杆菌融合蛋白Mtb8.4-HspX及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种结核杆菌融合蛋白Mtb8.4-HspX，是序列表中序列2的蛋白质。本发明的有益效果是：发明选用的结核分枝杆菌Mtb8.4是从结核杆菌培养滤液中纯化分离的一种低分子治疗蛋白抗原，具有较强的细胞免疫活性，能诱...
- 谭继英刘万波祝秉东胡丽娜王秉翔吴玉敏辛奇朱丽林孝发
- 文献传递
- 一种聚肌胞联合二甲基三十六烷基铵混合佐剂在制备结核亚单位疫苗中的应用
- 本发明公开了一种聚肌胞联合二甲基三十六烷基铵混合佐剂在制备结核亚单位疫苗中的应用。本发明的有益效果为：本发明提供的混合佐剂DDA/PolyI:C，能够有效增强融合蛋白AMM的抗原特异性IFN-γ的分泌水平，减轻H37Rv...
- 祝秉东达泽蛟牛红霞辛奇于红娟李青章国平李志刘万波张颖
- 文献传递
- CpG-ODN及PolyICLC在结核亚单位疫苗中的佐剂效应被引量：2
- 2012年
- 目的观察TLR识别配体不同组合佐剂对结核分枝杆菌融合蛋白免疫原性的影响及DDA对TLR识别配体的辅助效应。方法 CpG-ODN(CpG)和/或PolyICLC联合/不联合DDA,分别与融合蛋白Mtb10.4-HspX(MH)混合,制备亚单位疫苗,于第1、4、7周皮下免疫C57BL/6小鼠。以PBS和BCG(仅免疫1次)作为对照。末次免疫后6周,采血检测血清抗体水平,并分离脾淋巴细胞,检测分泌IFN-γ的淋巴细胞水平。结果经MH及HspX抗原刺激后,MH+CpG+PolyICLC+DDA组小鼠分泌IFN-γ的脾淋巴细胞数高于其它各组(P<0.05),MH+CpG+PolyICLC组其次,显著高于MH+CpG及MH+PolyICLC组(P<0.05);联合DDA佐剂组均分别高于对应的未联合DDA佐剂组(P<0.05)。各亚单位疫苗组诱导产生的抗MH及HspX的IgG1、IgG2b、IgG2c水平均明显高于BCG组(P<0.05),其中MH+CpG+PolyICLC+DDA组3种抗体水平最高;各亚单位疫苗组IgG2c/IgG1均高于BCG组(P<0.05)。结论 CpG+PolyICLC+DDA佐剂增强了结核分枝杆菌融合蛋白的免疫原性;CpG和PolyICLC具有佐剂协同作用;DDA有助于CpG和/或PolyICLC诱导特异性细胞免疫应答。
- 刘宝元祝秉东胡永浩牛红霞苏娟唐克峰刘万波亢鸿飞李青
- 关键词：CPG-ODN佐剂亚单位疫苗
- 结核分枝杆菌ESAT6-RpfE亚单位疫苗的构建与免疫原性研究被引量：2
- 2012年
- 目的构建Mtb ESAT6-RpfE(早期分泌抗原靶6-复活促进因子E)的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表达纯化ESAT6-RpfE蛋白。采用完全随机的方法将C57BL/6小鼠分组,每组6只,共进行了两次实验,第一次实验分为ESAT6、RpfE、ESAT6-RpfE、PBS、BCG五组,佐剂为二甲基三十六烷基胺(dimethyl-dioctyldecyl ammonium bromide,DDA);第二次实验有ESAT6-RpfE、PBS、BCG三组,佐剂为DPG[DDA+poly(I:C)+明胶]。分别于0、3、6周皮下免疫C57BL/6小鼠。末次免疫8周后,用特异性抗原ESAT6及RpfE刺激,检测其分泌IFN-γ的水平;ELISA检测血清特异性抗体IgG2b、IgG1。结果PCR扩增的esat6、rpfE基因序列与GenBank报道一致;融合蛋白主要以包涵体形式表达;亚单位疫苗免疫动物能够分泌RpfE特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(427.13±100.46)]显著高于PBS组(26.13±22.34;q=7.924,P<0.001);分泌ESAT6刺激特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(506.50±140.40)]明显高于PBS组(19.25±14.75;q=11.36,P<0.001)和BCG组(125.5±46.41;q=8.882,P<0.001)。ESAT6-RpfE免疫组能诱导产生特异性抗体。结论成功构建并表达ESAT6-RpfE融合蛋白。此融合蛋白可在C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性的免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。
- 李志达泽蛟章国平李瑞营刘万波苏娟张颖祝秉东
- 关键词：亚单位重组融合蛋白质类细菌蛋白质类细胞因子类
- 一种聚肌胞联合二甲基三十六烷基铵混合佐剂在制备结核亚单位疫苗中的应用
- 本发明公开了一种聚肌胞联合二甲基三十六烷基铵混合佐剂在制备结核亚单位疫苗中的应用。本发明的有益效果为：本发明提供的混合佐剂DDA/PolyI:C，能够有效增强融合蛋白AMM的抗原特异性IFN-γ的分泌水平，减轻H37Rv...
- 祝秉东达泽蛟牛红霞辛奇于红娟李青章国平李志刘万波张颖
- 结核亚单位疫苗Mtb8.4-HspX和HspX-Mtb8.4表达纯化及免疫保护效果研究
- 目的：结核病是困扰人类健康的重要疾病,研制新型有效、安全的结核疫苗成为国内外学者共同关注的一个重要课题。结核亚单位疫苗成为最有发展前景的新型疫苗之一,同时也存在着很多影响亚单位疫苗免疫保护效率的因素,如融合蛋白的组成顺序...
- 刘万波
- 关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗MTB8.4HSPX
- 文献传递
